血清HE4、CEA及ESM-1联合检测对肺癌的诊断价值

目的探讨人血清中附睾蛋白4(humanepididymis 4,HE4)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)及内皮细胞特异性分子-1(endothelial cell specific molecule-1,ESM-1)三项检验指标在肺癌诊断中的价值。方法采用化学发光法检测50例肺癌患者(肺癌组)、50例肺部良性病变患者(良性组)血清中HE4、CEA水平,应用ELISA法检测ESM-1水平,分析比较2组三项指标水平差异,采用ROC曲线比较HE4、CEA及ESM-1单项与联合检测对肺癌的诊断性能。结果HE4、CEA、ESM-1的检测水平肺癌组明显高于良性组,差异均有统计学意义(Z=-2.292,P=0.022;Z=-5.412,P=0.000;Z=-6.431,P=0.000);ESM-1的ROC曲线下面积(0.983)>CEA(0.907)>HE4(0.672),结果表明在诊断肺癌中,ESM-1ROC面积最大,有较高的诊断意义;ESM-1水平在26.31 ng/ml时,诊断肺癌的敏感度为96.7%,特异度为96.7%;通过绘制ROC曲线发现AUC CEA+HE4+ESM-1=AUC CEA+ESM-1>AUC HE4+ESM-1>AUC CEA+HE4,通过Z检验分析,发现CEA+ESM-1联合检测与CEA+HE4+ESM-1检测的ROC曲线下面积均为0.997,无统计学意义(P>0.05),两者诊断效率相当。结论CEA和ESM-1对肺癌的诊断有较高应用价值,CEA+ESM-1联合检测可使肺癌在诊断效率上得到显著提高。

小鼠杏仁核脑区(CeA)中单核细胞趋化因子(MCP-1)及其受体CCR2在慢性炎症性疼痛过程中的作用

目的观察完全弗氏佐剂(complete Freund′s adjuvant,CFA)诱导的小鼠慢性炎症性疼痛模型中,单核细胞趋化因子(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)及其受体CCR2在杏仁核脑区(the central nucleus of the amygdala,CeA)中的表达变化以及细胞定位情况。方法足底皮下注射CFA 20μL,制作慢性炎症性疼痛模型,用行为学方法检测小鼠的机械性刺激缩爪阈值和热刺激缩爪潜伏期的变化;用real-time PCR法检测造模后不同时间点CeA中MCP-1/CCR2mRNA的表达变化;用Western blot法检测造模后不同时间点CeA中CCR2蛋白的表达变化;选择CFA 7天组,用免疫荧光染色来观察CeA中MCP-1/CCR2蛋白的表达情况,并用双标染色来定位表达MCP-1/CCR2的细胞类型。结果造模1h后小鼠同侧后爪机械性缩爪阈值和热缩爪潜伏期显著降低(P<0.001),并能维持7天以上;造模1天后,CeA中MCP-1mRNA表达量增加(P<0.05),7天达高峰(P<0.01),一直持续到14天(P<0.05);CCR2mRNA从造模6h起表达增加(P<0.05);Western blot结果显示CeA中CCR2蛋白在造模后各个时间点均有表达上调,7天达高峰(P<0.01),一直持续到14天(P<0.01);免疫荧光染色显示,CFA 7天组CeA中MCP-1/CCR2蛋白的表达与生理盐水对照组相比均有增加,而且荧光双标染色显示MCP-1/CCR2蛋白主要与神经元核标记物(NeuN)共标。结论足底皮下注射CFA能诱导小鼠产生机械性触诱发痛和热痛觉过敏,CeA中MCP-1/CCR2mRNA和蛋白表达均增加,且均在神经元表达,提示该部位表达增加的MCP-1/CCR2可能参与炎症性疼痛的维持过程。

联合检测CEA、CA199和CA242在胰腺癌诊断中的应用价值

目的探讨用蛋白芯片法检测CEA、CA199和CA242在胰腺癌诊断中应用价值。方法用蛋白芯片法测定38例胰腺癌患者、65例非胰腺恶性肿瘤患者、37例良性疾病患者和20例健康人群血清CEA、CA199和CA242含量。结果CEA、CA199和CA242对胰腺癌有诊断价值,其中敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为60.3%、61.4%、36.3%和80.3%;81.3%、72.5%、52.6%和89.3%;79.0%、84.2%、64.5%和90.3%;联合检测可提高检测的特异性和阳性预测值。结论联合检测CEA、CA199和CA242有利于胰腺癌临床诊断。

呼出气冷凝液CEA、P53蛋白、miRNA21检测对孤立性肺结节早期肺癌的诊断价值及临床相关性研究

目的探讨呼出气冷凝液(exhaled breath condensate,EBC)癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)、P53蛋白、miRNA21在肺癌组患者中的诊断价值及临床相关性。方法随机选择2014年12月～2017年6月入住我院呼吸科的胸外科孤立性肺结节需手术切除患者51例,根据术后病理将孤立性肺结节患者分为肺癌组35例、非肺癌组16例,同期体检者12例为对照组。所有患者均采集呼出气冷凝液、空腹静脉血。采用全自动化学发光免疫分析仪测定CEA水平、酶联免疫吸附试验测定P53蛋白水平、实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,RT-PCR法)测定miRNA21水平,分析呼出气冷凝液CEA、P53蛋白、miRNA21对孤立性肺结节早期肺癌的诊断价值。结果肺癌组EBC的CEA、P53蛋白、miRNA21表达水平均高于非肺癌组与对照组(P<0.05);肺癌组患者EBC中CEA、P53蛋白、miRNA21表达水平与性别、年龄、TNM、病理类型差异均无统计学意义(P>0.05);联合检测EBC的CEA、P53蛋白、miRNA21对孤立性肺结节早期肺癌的诊断敏感性、特异性均优于单项检测(AUC 0,931 P<0.05)。结论联合检测呼出气冷凝液CEA、P53蛋白、miRNA21有助于孤立性肺结节早期肺癌的筛查,提高诊断的敏感性和特异性。

CEA多表位融合蛋白在胃肠道肿瘤血清学诊断中的研究价值

目的以CEA多表位融合蛋白为抗原,即ozlf-86/87融合蛋白,检测胃肠道肿瘤患者血清中抗CEA抗体,鉴定融合蛋白的抗原性,为融合蛋白作为诊断抗原提供依据,为下一步动物免疫反应实验奠定基础。方法以CEA多表位融合蛋白作为诊断抗原,采用间接ELISA法,分别对收集的39例胃癌患者血清、25例结肠癌患者血清、30例慢性胃炎患者血清和30例健康对照者的血清中的抗CEA抗体进行检测,用方差检验分析胃结肠癌患者实验组和慢性胃炎、健康患者对照组血清抗体效价之间差异性。结果胃癌和结肠癌实验组与对照组血清抗体效价之间差异均有统计学意义(P<0.01)。对胃癌患者和结肠癌患者血清抗体的诊断敏感度分别为35.9%和44.0%,结论本实验通过工程菌表达纯化的CEA多表位融合蛋白具有很好的抗原性,对用于血清学诊断的研究有一定的可行性,对制备ELISA血清检测试剂盒提供了理论基础,为下一步免疫反应及抗CEA抗体的制备奠定基础。

大肠癌P53蛋白和CEA表型与其预后的关系

目的 探讨P5 3蛋白和CEA表达类型与大肠癌预后指标的关系。方法 应用LsAB免疫组化法 ,观察 79例大肠癌中P5 3蛋白的阳性率和CEA的表达类型。结果 大肠癌P5 3蛋白阳性率为 6 0 .8%。其阳性表达与性别、年龄、肿瘤部位无关 ,与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移有关 :低分化癌患者为 83.4% ,高分化癌患者为 35 .1% ,浸润达肌层至全层患者为 6 4.8% ,浸润未达肌层为 12 .5 % ;淋巴结转移阳性患者为 74.2 % ,淋巴结转移阴性患者为 11.8%。CEA表型中 (Ⅱ +Ⅲ )型与肿瘤分化程度、淋巴结转移有关 :低分化癌患者为 88.1% ,高中分化癌患者为 18.9% ;淋巴结转移阳性患者为 6 6 .1% ,淋巴结转移阴性患者为 17.6 %。P5 3阳性率与CEA表达类型有关。结论 检测P5 3阳性表达和CEA表达类型对评估大肠癌预后及指导临床治疗有相应的价值。

BCL-2蛋白、NM23基因/NDPK、CEA在非小细胞肺癌的表达及其意义

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中bcl-2蛋白、nm23基因/NDPK、CEA的表达及其在NSCLC发生、转移、预后中的意义.方法 采用亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)免疫酶标法检测65例NSCLC、42例癌旁正常肺组织bcl-2蛋白、nm23基因/NDPK、CEA的表达情况.结果NSCLC中bcl-2蛋白、nm23基因/NDPK、CEA阳性率分别为33.8%、70.8%、61.5%,腺癌、腺鳞癌CEA阳性率(90%、60%)明显高于鳞癌(20%,P<O.01).nm23基因/NDPK阳性率在NSCLC伴淋巴结阳性组低于淋巴结阴性组(58.1%,82.4%,P<0.05);且Ⅰ、Ⅱ期患者阳性率高(84.6%、85.7%),Ⅲ期患者低(56.3%,P<0.05).CEA阳性率在NSCLC伴淋巴结阳性组高于淋巴结阴性组(87.1%,38.2%,P<0.001);且Ⅰ期患者阳性率低(34.6%),Ⅱ、Ⅲ期患者高(100%、75%,P<0.001);CEA阳性患者术后生存率明显低于CEA阴性者(P<0.05).结论 (1)bcl-2基因与部分NSCLC的发生有关,而与NSCLC淋巴结转移、PTNM分期、生存率无关.(2)nm23基因/NDPK与淋巴结转移呈负相关;临床分期越晚,阳性率越低;与生存率无关.(3)CEA可作为NSCLC早期诊断、鉴别诊断的参考指标.

CEA的多表位疫苗基因的设计及构建的表达载体在原核表达系统中的表达

目的本研究设计肿瘤相关抗原CEA的多表位疫苗基因和构建的重组表达载体在原核表达系统中成功表达融合蛋白。方法根据预测分析得到的表位氨基酸序列,选取预测分值较高的CTL表位(IMIGVLVGV)和B细胞表位(SNNSK-PVEDK),并结合"非选择性"辅助T细胞表位(AKFVAAWTLKAAA)串联起来,按原核系统偏爱的氨基酸密码子优化,委托生物技术公司合成寡核苷酸,退火获得目的基因,并将目的基因克隆至原核表达载体pET32a(+)多克隆位点内。将此重组载体转化E.coli BL21(DE3)表达融合蛋白,并经SDS-PAGE、Western blot分析鉴定。用Ni-NTA树脂亲和层析法纯化表位融合蛋白ozlf-86/87。结果嵌合有多表位目的基因的原核重组质粒pET32a(+)/ozlf-86/87,进行酶切和测序鉴定,构建成功。SDS-PAGE分析表明,重组质粒在37℃1.0mmol/L IPTG条件下诱导6h能很好地表达目的蛋白,相对分子质量(Mr)约为20kDa,与预期Mr大小吻合;蛋白表达量均约占细菌总蛋白量的20%。,并经Western blot鉴定为目的蛋白。用Ni-NTA树脂亲和层析法纯化成功获得表位融合蛋白,即ozlf-86/87,纯度达到90%以上。结论本研究获得的多表位融合蛋白对胃肠道恶性肿瘤诊断试剂的研究和进一步的疫苗研究奠定了基础。

联合检测血清、痰液中CEA,SA与SP-A对肺癌诊断的临床研究

目的 通过联合检测血清和痰液中CEA,SA（唾液酸,N-乙酰神经氨酸）,SP-A（肺表面活性物质相关蛋白A）的表达水平,探讨其对肺癌诊断的价值.方法 应用酶联免疫吸附法（ELISA）对65例肺癌、55例肺部良性疾病患者及31例健康查体者的血清及痰液进行相关检测.结果 肺癌患者血清及痰液中三项肿瘤标志物平均含量均高于其它肺良性疾病患者（P＜0.01）;痰液中三种标志物明显高于血清中的含量（P＜0.05）;联合检测两项及三项阳性者均使血清和痰液诊断肺癌的特异度提高;肺癌组血清和痰液中三项肿瘤标志物的表达水平,Ⅲ期,Ⅳ期患者均高于Ⅰ＋Ⅱ期患者（TNM分期）.结论 联合检测血清和痰液中的标志物有助于肺癌的诊断;SA和SP-A联合检测可以显著提高敏感度、特异度和准确度,有助于肺癌诊断.

p53、c-erbB-2、nm23及CEA与肺癌临床病理因素的关系

目的:探讨P53、c-erbB-2、nm23及CEA在未经治疗的肺癌中的表达及与临床病理因素的关系。方法:采用免疫组化法检测87例非小细胞肺癌组织及15例癌旁肺组织(距癌灶5cm)中P53、c-erbB-2、nm23及CEA的蛋白表达情况。结果:免疫组化显示P53、c-erbB-2、CEA在肺癌组织中的阳性表达率分别是45/87(51.7%)、37/87(42.5%)和41/87(47.1%),高于正常肺组织中的表达水平(P<0.05);nm23在癌组织中的表达率49/87(56.3%)低于正常肺组织的86.7%(13/15);p53的表达在不同的分化程度之间有显著性差异(P=0.043);CEA的表达在不同的病理类型之间以及在腺癌的不同TNM分期组之间有显著性差异(P<0.05);nm23表达在不同的淋巴结转移情况之间以及在不同的TNM分期之间有显著性差异(P=0.031,P=0.035);p53与c-erbB-2两者的表达有相关性(Spearman相关系数=0.319,P=0.003)。结论:p53、c-erbB-2、nm23及CEA与肺癌的发生和发展密切相关,并具有协同作用,它们的综合检测在非手术临床分期的判断及指导肺癌的临床治疗等方面具有一定价值。

胸腔积液患者ADA、CRP和CEA水平检测及其临床意义

目的探讨腺苷脱氨酶(ADA)、C反应蛋白(CRP)和癌胚抗原(CEA)水平检测在胸腔积液鉴别诊断中的价值。方法对125例胸腔积液患者(其中恶性21例、结核性88例、炎性16例)的临床资料进行回顾性分析,并对各组的ADA、CRP和CEA水平进行比较。结果 ADA在结核性和炎性胸腔积液组中明显升高,在恶性胸腔积液组中不升高(P<0.05),结核性和炎性胸腔积液组之间差异无统计学意义(P>0.05);CRP含量在炎性组和结核组中均升高,恶性组升高不明显,与恶性组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);CEA含量恶性胸腔积液组明显高于结核性和炎性胸腔积液组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 ADA、CRP和CEA联合检测在胸腔积液的鉴别诊断中具有较高的临床价值。

CEAmRNA CEA蛋白及细胞学检测大肠癌腹腔液中游离癌细胞的研究

目的比较大肠癌患者腹腔冲洗液中CEAmRNA、CEA蛋白(p-CEA)和细胞学(peritoneallavage cytology,PLC)检测游离癌细胞的临床价值。方法术中收集58例大肠癌患者和15例大肠良性病变病人的腹水或腹腔冲洗液,分别采用RT-PCR方法检测腹腔液中游离癌细胞CEAmRNA表达,化学发光法检测上清液中p-CEA,同时做腹腔冲洗液的细胞学检查。结果CEAmRNA表达阳性率(64.0%)明显高于p-CEA(31.0%)或PLC(24.0%,P<0.05)。CEAmRNA表达阳性率随着侵袭深度而增加。结论三种方法均可用于大肠癌腹腔脱落细胞的诊断,但RT-PCR方法对微量癌细胞检出的敏感性最佳。

IGF-1、IGFBP-3、CEA和CA125联合检测对肺癌的诊断价值

目的探讨胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)、胰岛素样生长因子结合蛋白-3(insulin-like growth factor binding protein-3,IGFBP-3)、CEA及CA125联合检测对肺癌诊断的临床价值。方法采用化学发光法分别对77例肺癌患者和41名健康体检者血清IGF-1、IGFBP-3、CEA和CA125水平进行检测,并对检测结果进行对比分析。结果肺癌组血清IGF-1水平明显高于健康对照组(P<0.01),血清IGFBP-3水平明显低于健康对照组(P<0.05);单项检测时IGF-1灵敏性为28.57%,CEA灵敏性为44.16%,CA125灵敏性为40.26%;三项指标联合检测时灵敏性为75.33%。结论IGF-1有助于肺癌的诊断,IGF-1、CEA及CA125联合检测可显著提高肺癌检出率。

CEA CA242 CA199 AFP联合检测对消化道恶性肿瘤的诊断价值

目的探讨CEA,CA242,CA199,AFP联合检测对消化道恶性肿瘤的诊断价值。方法采用蛋白芯片技术对100例消化道恶性肿瘤患者及100例相应良性疾病进行CEA,CA242,CA199,AFP测定。结果CEA,CA242,CA199,AFP单检(总)的阳性率分别为33%,56%,45%,9%。联检(总)的阳性率为90%。结论联合检测可提高消化道恶性肿瘤诊断的阳性率,经卡方检验P<0.01,恶性肿瘤与相应的良性疾病相比差异有统计学意义。

基于CLISEP28-A3c建立济南地区AFP、CEA参考区间的探讨

目的：通过统计分析初步建立济南地区健康人群肿瘤标志物AFP和CEA的参考区间，为临床诊疗肿瘤标志物提供依据。方法：使用Roche cobas8000检测系统检测来自山东中医药大学附属医院和齐鲁医院查体中心共3928例健康体检者的AFP和CEA，依据CLSI EP28-A3c，统计分析并建立参考区间。结果：AFP无需根据性别和年龄分组，参考区间是0-6.84ng/ml；CEA无需根据性别分组但需根据年龄进行分组，中青年组和老年组参考范围分别是0-4.40ng/ml和0-5.30ng/ml。结论：初步建立了济南地区AFP和CEA的参考区间，非常有必要统一各检测系统的参考区间。

利用电泳迁移分析法初步探讨肺癌细胞株CEA的转录调控

【目的】探讨癌胚抗原 (CEA)表达水平不同的肺癌细胞株在转录因子水平有无差异。【方法】利用电泳迁移分析法 (EMSA)检测这些细胞株与CEA启动子阳性足迹区探针结合的DNA结合蛋白。维甲酸 (RA)诱导分化A5 49细胞 ,检测诱导前后转录因子的变化。【结果】CEA水平高的细胞DNA结合蛋白的条带信号强 ,CEA水平低的细胞DNA结合蛋白的条带信号弱 ,CEA阴性细胞可见到较弱的DNA结合蛋白信号。结合条带信号在诱导后细胞组明显减弱。【结论】CEA基因特异性的表达部分依赖于转录因子的合成。转录因子量的改变与CEA表达的高低有关 ,并且提示RA对CEA阳性肺癌细胞的诱导是在转录水平起作用。

CEA串连表位-HSP70融合基因疫苗诱导小鼠的表位特异性免疫应答

目的:观察癌胚抗原(CEA)串联表位-HSP70融合基因疫苗诱导的免疫应答,为开发新型肿瘤特异性基因疫苗奠定基础。方法:在已经构建含有变异热休克蛋白(HSP)序列的基础上,插入重组CEA串联表位的编码片段获得CEA串联表位-HSP融合基因疫苗。3次肌肉注射免疫Balb/c小鼠,设立注射生理盐水的阴性对照组、注射氢氧化铝佐剂混悬CEA串联表位的阳性对照组及注射pCITriCEA625-667-mtHSP70的实验组。FCM分析脾脏T细胞亚群;体外培养脾细胞,ELISA检测培养上清中干扰素γ(IFNγ)的相对含量;同时测定小鼠血清CEA特异性抗体的滴度。结果:阴性对照组脾细胞中CD3+和CD4+T细胞分别为55.1%±6.1%和30.2%±4.1%;实验组脾细胞中CD3+和CD4+T细胞分别为78.7%±9.2%和48.9%±4.7%,两组比较差异有显著性(P<0.01)。其体外特异性抗原肽诱导的IFNγ分泌处于本底水平,可视为生理性参数,体外非特异性和特异性的IFNγ分泌分别增加3和6倍(P<0.01)。血清中CEA表位特异性抗体滴度阴性对照组为0,阳性对照组<1:500,而融合基因疫苗免疫组达到1:4000。结论:CEA串联表位-HSP融合基因疫苗在体内诱导以激发辅助性T细胞为特征的免疫应答。

胃肠道癌CD44v6与CEA mRNA的表达及其临床意义

目的探讨外周血CEA mRNA及癌组织中CD44v6的表达对胃肠道癌转移的影响及临床意义。方法采用RT-PCR技术和S-P免疫组化法进行研究。结果62例胃、结直肠癌患者术前外周血CEA mRNA RT-PCR检测阳性表达率为43.5％(27/62),对照组测定均为阴性。癌组织中CD44v6阳性表达率为46.7％(29/62)。Ⅰ+Ⅱ与Ⅲ+Ⅳ期胃肠道癌患者之间CEA mRNA、CD44v6的阳性表达差异均有显著性(P<0.05)。CD44v6、CEA mRNA的表达与局部淋巴结转移密切相关(P<0.05,P<0.01)。外周血CEA mRNA的阳性表达与癌组织中CD44v6的表达密切相关(P<0.01)。结论CEAmRNA是判定胃肠道癌微转移的敏感指标,与癌组织中CD44v6的表达密切相关,均可作为胃肠道癌的预后判断指标,对临床正确分期及综合治疗起指导作用。

结直肠癌中Survivin和P-gp蛋白表达及其与血清CEA的相关性

目的探讨结直肠癌组织中Survivin和P-gp蛋白表达及其与血清CEA的相关性。方法采用免疫组化SP法检测63例结直肠癌及癌旁黏膜,10例腺瘤组织中Survivin和P-gp蛋白表达,分析两者表达与结直肠癌临床病理特征以及血清CEA值的关系。结果Survivin和P-gp蛋白在结直肠癌组织中阳性率分别为74.6%、76.19%,均显著高于癌旁和腺瘤组织(P<0.01)。Survivin和P-gp蛋白表达与结直肠癌淋巴结转移、远处转移、TNM分期呈正相关(P<0.05),两者表达之间具有正相关性(P<0.05),Survivin蛋白高表达组血清CEA值明显高于低表达组(P<0.05)。结论Survivin和P-gp蛋白在结直肠癌中高表达与肿瘤细胞的侵袭、转移密切相关,两者的表达具有协同作用,联合血清CEA检测有助于对肿瘤监测,为治疗结直肠癌提供分子生物学支持。

HSP gp96和CEA在结直肠癌中的表达及临床意义的研究

目的通过检测结直肠癌组织及相应癌旁组织中的热休克蛋白糖蛋白96(Heat Shock Protein glycoprotein 96,HSP gp96)和癌胚抗原(Carcino-Embryonic Antigen,CEA)的表达,探讨HSP gp96和CEA在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学方法检测88例结直肠癌及相应癌旁组织中的HSP gp96和CEA的表达情况。结果 HSP gp96在结直肠癌组织中的表达率明显高于癌旁组织(χ2=47.400,P<0.001),在低分化型癌中的表达高于中、高分化型(χ2=4.136,P=0.042),淋巴结转移阳性的病例中表达高于淋巴结转移阴性的病例(χ2=6.029,P=0.014),Dukes分期C期+D期中表达高于A期+B期(χ2=6.820,P=0.009),HSP gp96的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小无明显统计学意义(P>0.05);CEA在结直肠癌组织中的表达率明显高于癌旁组织(χ2=52.391,P<0.001),淋巴结转移阳性的病例中表达高于淋巴结转移阴性的病例(χ2=4.026,P=0.045),Dukes分期C期+D期中表达高于A期+B期(χ2=5.640,P=0.018),CEA的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小及分化程度无明显统计学意义(P>0.05);且HSP gp96和CEA的表达存在关联(χ2=9.374,P<0.05,r=0.326)。结论HSP gp96和CEA共同参与了结直肠癌的发展、侵润及转移;HSP gp96可作为结直肠癌新的肿瘤标志物。