CENPs在胃癌中的相关研究进展

胃癌是一种高发病率、高死亡率的恶性肿瘤。尽管在诊断和治疗策略方面取得了进展,但相关的死亡率仍位于前列。了解胃癌发生发展的分子机制具有重要意义。着丝粒蛋白(centromere proteins,CENPs),是一组参与动粒形成的蛋白,是确保有丝分裂过程中姐妹染色单体正确分离的必要蛋白。研究发现,部分CENPs在胃癌中高表达,通过多种途径参与胃癌的发生发展,并可作为一个不良预后因素。CENPs有可能成为胃癌治疗的新靶点,其研究具有重要意义,本文就CENPs在胃癌中的相关研究进展作一综述。

SNHG17通过与转录因子E2F1结合激活CENPE促进肾透明细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨SNHG17通过与转录因子E2F1结合激活CENPE对肾透明细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:生信分析SNHG17、E2F1和CENPE在肾透明细胞癌肿瘤组织中的表达,生信分析三者的调控关系。qRT-PCR检测SNHG17、E2F1和CENPE的mRNA水平。Western blot检测E2F1和CENPE的蛋白表达。CCK-8、Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭情况。RIP实验验证SNHG17与E2F1的结合关系;ChIP实验检测E2F1与CENPE的结合关系。构建异种瘤模型验证SNHG17对肾透明细胞癌生长的影响。结果:SNHG17和CENPE在肾透明细胞癌组织和细胞系中的表达水平均显著上调。沉默SNHG17转染肾透明细胞后,癌细胞的增殖、迁移和侵袭受到明显抑制。体内实验也验证了沉默SNHG17抑制肾透明细胞癌的生长。此外,RIP实验显示SNHG17能够与转录因子E2F1结合。ChIP实验检测转录因子E2F1与CENPE启动子区的结合,结果表明E2F1能够显著富集在CENPE的启动子区。体外功能实验表明SNHG17通过招募E2F1激活CENPE表达从而促进肾透明细胞癌细胞的增殖和转移。结论:SNHG17招募E2F1上调CENPE,促进肾透明细胞癌细胞的致瘤性。

染色体数目异常滋养层细胞中CENP-I基因的的异常表达

目的:探讨人胚胎滋养层细胞中染色体数目异常与着丝粒特异性蛋白质CENP-I表达水平的相关性。方法:T-A克隆制备CENP-I、GAPDH定量PCR标准品;用Ni2+-NTA亲和层析柱纯化CENP-I重组蛋白,免疫兔制备抗人CENP-I多克隆抗体;采用FQ-PCR和Western-blot检测23例染色体数目异常的滋养层细胞(实验组)和30例具有正常核型的滋养层细胞(对照组)中CENP-ImRNA和蛋白表达水平。结果:成功制备CENP-I、GAPDHFQ-PCR标准品,表达和纯化CENP-I重组蛋白,获得兔抗人CENP-I多克隆抗体;FQ-PCR和Western-blot结果显示CENP-I在实验组和对照组中均有表达,但实验组中CENP-I的表达水平明显降低(P<0.05)。结论:CENP-I表达的降低可能是导致人胚胎滋养层细胞中染色体数目异常的原因之一。

乳腺癌组织中着丝粒蛋白CENP-B的表达及意义

目的检测乳腺癌组织中着丝粒蛋白CENP-B的表达,探讨CENP-B的表达与乳腺癌患者临床病理特征的关系及意义。方法分别用RT-PCR、Q-PCR和Western blot法检测4例乳腺癌活检组织及相应癌旁组织中CENP-B mRNA和蛋白表达水平的差异;采用免疫组化SP法检测CENP-B在53例乳腺癌石蜡组织切片中的表达,并采用SPSS 10.0软件分析其与乳腺癌的临床病理特征的关系。结果 CENP-B mRNA和蛋白在4例乳腺癌组织中的表达高于癌旁组织;53例乳腺癌组织中CENP-B阳性率为90.6%(48/53),强阳性率为52.8%(28/53),CENP-B在乳腺肿瘤组织中的表达水平高于癌旁组织。统计分析结果发现CENP-B强阳性与临床分期、T分期密切相关。结论 CENP-B可能成为评价乳腺癌发生、发展的重要生物学指标。

CENP－I表达下调对HEK293细胞生长及染色体分离的影响

目的构建CENP-I特异性RNA干扰真核表达载体,体外观察抑制CENP-I基因表达对HEK293细胞生长、细胞周期和染色体数目异常率的影响。方法构建CENP-IsiRNA真核表达载体,脂质体法将pGenesil-1空载体和pGene-sil-1/CENP-I-siRNA-1、pGenesil-1/CENP-I-siRNA-2、pGenesil-1/CENP-I-siRNA-3真核表达载体分别导入人胚肾HEK293细胞。转染后24、48、72h收集细胞用Western blot和FQ-PCR检测HEK293细胞内CENP-I蛋白及mRNA水平的表达情况,以确定干扰效果及最佳干扰时间。MTT法检测各实验组细胞生长情况,流式细胞术检测各组细胞的细胞周期分布,Giemsa染色法计数细胞分裂指数,常规法制备染色体标本。结果成功构建CENP-I siRNA真核表达载体,筛选出具有干扰效果的质粒载体即pGenesil-1/CENP-I-siRNA-3,转染人胚肾HEK293细胞72h后可使CENP-I蛋白及mRNA表达显著下凋。CENP-I表达降低的HEK293细胞生长速度明显减慢(P<0.05),G2/M期细胞增加,分裂期细胞比例增大。结论RNA干扰有效地特异性抑制着丝粒特异性蛋白质CENP-I的表达。CENP-I的抑制可使人胚肾HEK293细胞生长减慢,增殖能力减弱,使细胞分裂期延长。

舌鳞癌组织中CENP-H的表达及临床意义

目的:检测着丝粒蛋白-H(CENP-H)在舌鳞状细胞癌中的表达水平,并结合临床病理资料探讨其临床意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测168例舌鳞状细胞癌组织石蜡切片中CENP-H的表达情况。所有病例均有完整的临床病理资料,应用SPSS13.0软件包对数据进行统计学处理,分析CENP-H表达水平对舌鳞癌的早期诊断和预后评估的价值。结果:168例舌鳞癌标本中,CENP-H的强阳性率为55.95%(94/168);不同临床分期(P=0.005)、T分期(P=0.004)的CENP-H表达有显著性差异,随分期增高而表达升高;多因素Cox回归分析显示,CENP-H的表达水平(P=0.043)、临床分期(P<0.001)分别是舌鳞癌患者的独立预后因素。生存分析显示,高表达CENP-H的患者生存率显著低于低表达CENP-H的患者(P=0.001);早期舌鳞癌组中CENP-H高表达患者预后较差(P=0.000)。结论:CENP-H可能是与舌鳞癌发生、发展相关的标志物。对舌鳞癌患者的预后评估,特别是对早期患者的预后评估具有重要意义。

抗线粒体Ⅱ型抗体与抗着丝点B蛋白抗体重叠阳性在CREST综合征中的临床意义

采用间接免疫荧光(IIF)法、酶免疫斑点(ELISPOT)法和免疫印迹(Western blot)法检测107例进行性系统性硬皮病(SSc)患者,血清中的ANA阳性率及核型、AMA阳性率及亚型AMA-M2、AMA-M4和AMA-M9的阳性率、CENP-B和Scl-70的阳性率,分析AMA-M2和CENP-B在CREST综合征中的重叠阳性率,同时记录AMA-M2和CENP-B重叠阳性患者的临床症状和相关实验室指标,探讨AMA-M2与CENP-B重叠阳性在CREST综合征中的临床意义。

纺锤体检查点蛋白Cenp-E在肝癌组织的表达及临床意义

目的观察纺锤体检查点蛋白(Cenp-E)在肝癌组织和人类正常肝组织表达水平的差异,以探讨Cenp-E蛋白在肝癌细胞中的表达及临床意义。方法用荧光定量PCR和Western blot分别检测Cenp-E基因和蛋白在肝癌组织和正常肝组织的表达水平。结果正常肝组织中Cenp-E基因mRNA水平(0.023 78±0.009 73)明显高于肝癌组织(0.014 58±0.008 73);Cenp-E蛋白表达量在正常肝组织中(0.656±0.012)明显高于在肝癌组织中的表达(0.301±0.009),且二者有显著性差异。结论 Cenp-E低表达在肝癌的发生过程中起重要作用。

基于生物信息学分析CENPE在肺腺癌中的表达及临床意义

目的探讨着丝粒蛋白E(CENPE)在肺腺癌中的表达及临床意义。方法通过TCGA和GEO数据库获得CENPE在肺腺癌中的表达数据及相关临床特征参数,比较CENPE在肺腺癌组织和正常组织中的表达差异;分析CENPE表达与肺腺癌患者临床特征、驱动基因突变、免疫治疗靶点及预后的关系;通过构建列线图模型进一步探讨联合CENPE及相关临床参数在预后监测中的作用;采用基因富集分析(GSEA)探讨CENPE相关的信号通路。最后,在TIMER数据库中观察CENPE在泛肿瘤组织中的表达与临床意义。结果在TCGA、GSE31210、GSE10072、GSE32863、GSE40791和GSE75037等数据库中,CENPE表达水平在肺腺癌组织中高于正常组织(均P<0.001)。HPA数据库的免疫组化结果提示,CENPE蛋白在肺腺癌组织中呈高表达。CENPE的表达与年龄、性别、吸烟史、T分期、N分期、TNM分期、EGFR/KRAS突变状态及PD-L1的表达等密切相关(均P<0.05)。CENPE高表达组患者总体生存率低于低表达组(P<0.05),且可以作为肺腺癌患者的独立预后因子。基于T分期、N分期及CENPE表达的列线图模型,能更准确地预测肺腺癌患者的预后。GSEA结果提示,CENPE高表达患者在有丝分裂纺锤体、mTOR信号通路、G2M检查点、Myc信号通路、E2F靶点、未折叠蛋白反应及DNA损伤修复等信号通路集中。在TIMER数据库中观察到,CENPE在泛肿瘤组织中高表达,并与患者的恶性生物学表型相关。结论CENPE在肺腺癌患者中呈高表达,与患者的恶性表型及不良预后相关,可作为治疗筛选及预后监测的潜在生物标志物。

探讨染色体非整倍体形成与CENP变化的关系

目的探讨子代染色体非整倍体形成与着丝粒蛋白(CENP)表达及其双亲染色体CENP表达的关系。方法以染色体非整倍体流产绒毛为研究组,以染色体正常绒毛为对照组。应用染色体G显带技术及免疫组化技术,对每例标本及其流产夫妇双方进行染色体核型分析及CENP检测。结果①染色体正常夫妇的流产绒毛的染色体非整倍体发生率为44.78%,在非整倍体中性染色体异常发生率最高,占40.00%,其次21-三体综合征,占23.33%,②两组流产绒毛染色体中均有CENP的表达,且研究组显著低于对照组(t=3.012,P<0.05)。研究组非整倍体绒毛染色体中CENP含量与其父方外周血染色体的比较有显著性差异,前者显著低于后者(t=4.279,P<0.05),而与母方的差异无统计学意义(t=1.927,P>0.05)。对照组正常绒毛与其父方外周血染色体CENP含量比较有显著性差异,前者CENP含量显著低于后者(t=3.008,P<0.05),而与母方的差异无统计学意义(t=1.234 P>0.05)。结论 CENP含量降低可能是染色体着丝粒不分离造成非整倍体形成的原因之一,且CENP的含量与其母亲具有一定的同源性、相似性。