固定化CGMCC No.2266生物转化法制备(S)-(-)-β-羟基苯丙酸乙酯

在邻苯二甲酸二丁酯中采用固定化酿酒酵母CGMCC No.2266不对称还原β-羰基苯丙酸乙酯制备(S)-(-)β--羟基苯丙酸乙酯。将干重为430 mg的100 ml菌液50℃预热处理30 min,以2%海藻酸钠固定化得到的直径为2 mm的固定化细胞增殖培养72 h,在300 ml邻苯二甲酸二丁酯中转化17.2 mmol.L-1β-羰基苯丙酸乙酯,摩尔产率和对映体过剩值可以分别达到92.2%和100%。固定化细胞可以较好地重复利用于转化反应10次。产率随底物浓度的增高而降低,分批加入底物可以降低底物浓度过高对反应过程的抑制。

响应面法优化羰基还原酶产生菌Bacillus anthracis CGMCC No.12337的培养条件

炭疽芽孢杆菌Bacillus anthracis CGMCC No.12337作为生物催化剂可不对称还原奥卡西平制备抗癫痫药物醋酸艾司利卡西平的关键中间体S-利卡西平.采用响应面优化法对B.anthracis CGMCC No.12337发酵培养基成分和培养条件进行优化,确定最优发酵条件为葡萄糖42g/L,蛋白胨20g/L,初始pH 4.8,磷酸氢二钾0.5g/L,磷酸二氢钾0.5g/L,转速120r/min,温度33℃,接种量10%,培养时间36h.采用该优化培养方法,该炭疽芽孢杆菌产生的羰基还原酶活力达到了775.62U/L,较优化前提高了35.12%.

羟基化酶产生菌Stenorophomonas maltophilia CGMCC 1.1788对农药氯噻啉生物转化的条件研究

[目的]探究羟基化酶产生菌Stenorophomonas maltophilia CGMCC 1.1788菌株中羟基化酶的转化活性。[方法]采用摇瓶发酵转化方法对羟基化酶产生菌S.maltophilia CGMCC 1.1788对农药氯噻啉的生物转化条件(不同生长时期的细胞、温度、pH等影响因子)进行了优化。[结果]确立了转化条件:100 ml锥形瓶最佳装液量10 ml,最佳反应温度25℃,最适pH 6.5,最佳反应底物起始浓度0.2 g/L,最佳反应时间48 h。[结论]为较好地发挥该菌的微生物转化功能及了解羟基化酶的生物学特性提供了理论依据。

人参皂苷糖苷水解酶高产菌株CGMCC No.4316发酵工艺

灰绿犁头霉Absidia glauca CGMCC No.4316具有将人参二醇类皂苷Rb1专一转化成Rd的活性。该文采用TLC法,在单因子试验基础上,应用响应面分析,以人参皂苷糖苷酶活力为响应值,建立回归模型,对培养基等各影响因子进行优化。试验结果表明:以麦麸皮20.47 g/L为碳源,蛋白胨9.74 g/L为氮源,初始pH 6.0,瓶装量45 mL/250 mL,摇瓶转数180 r/min,投料量10%,30℃发酵72 h,其酶活力达到92.78 U/mL。

A Two-stage pH and Temperature Control with Substrate Feeding Strategy for Production of Gamma-aminobutyric Acid by Lactobacillus brevis CGMCC 1306

由乳杆菌 brevis CGMCC 1306 优化 gamma-aminobutyric 酸(伽马氨基丁酸) 的生产的方法被调查。结果显示房间生长在 pH 是最大的 5.0，当时 4.5 是的 pH 对伽马氨基丁酸更好形成。为细胞生长的最佳的温度(35 ????

芸薹属异源六倍体CGMCCNo.2553多类型再生植株的获得

应用游离小孢子培养技术对兼具有A,B,C染色体组的芸薹属异源六倍体CGMCCNo.2553(AABBCC,n=27)材料进行游离小孢子培养。结果表明,供试材料具有胚胎发生能力,并获得DH再生植株。220份驯化后的再生植株定植于日光温室中自交留种,其中12株获得自交种子。分别将DH植株与3份大白菜品种正、反交授粉杂交,得到4份杂交种F1代。经田间植物学鉴定,获得的杂交种为真正的杂种。目前,4份杂交种的染色体组成、倍性、育性等正在研究中。所获得的DH植株为今后构建遗传图谱,标记和定位重要的基因等后续研究奠定了基础。

真菌Stilbella sp.CGMCC 40422的萜类产物研究

采用多种硅胶柱色谱、OSD柱色谱与半制备柱高效液相色谱对真菌Stilbella sp.CGMCC 40422大米培养基的发酵产物进行分离提纯,并通过质谱、核磁共振波谱解析等方法对得到的化合物纯品进行结构鉴定。结果显示,从该菌株中分离得到2个原萜烷型四环三萜、1个倍半萜与5个杂萜类化合物,分别为烟曲霉酸、helvolinic acid、tricho-acorenol、ascofuranone、ilicicolin C、LL-Z1272Ɛ、deacetylchloronectrin和ascochlorin N-acetylglucosamine。其中烟曲霉酸的含量最高,随后采用高效液相色谱法测定不同发酵时间发酵物中主产物烟曲霉酸的产量,烟曲霉酸含量在培养15 d后达最大值3 g·kg-1,说明Stilbella sp.CGMCC 40422具有强大的萜类产物生产能力,研究结果为进一步开发萜类化合物生产的底盘细胞奠定了基础。

双相不锈钢ER2594电弧增材制造组织与力学性能研究

采用熔化极活性气体保护电弧焊(MAG)电弧增材制造工艺制备了双相不锈钢ER2594薄壁墙试样,并通过金相显微镜、X射线衍射仪、扫描电子显微镜等检测设备,分析了电弧增材制造试样双相不锈钢ER2594的物相组成、显微组织结构;通过显微硬度仪、拉伸试验机、冲击试验机、电化学工作站等检测设备,测试并分析了电弧增材制造试样的力学性能和腐蚀性能.结果表明,双相不锈钢ER2594试样成形质量良好;显微组织观测发现主要为奥氏体和少量的d-铁素体;横向和纵向截面平均显微硬度分别为310 HV_(0.2)、312 HV_(0.2);其横向屈服强度、抗拉强度、伸长率、冲击功分别为650 MPa、854 MPa、42.7%、174.49 J;纵向屈服强、抗拉强度、伸长率、冲击功分别为620 MPa、850 MPa、45.2%、256.35 J;电弧增材制造ER2594薄壁件为韧性断裂;试样具备良好的耐腐蚀性能.

腐生葡萄球菌CGMCC 3475对发酵里脊猪肉脂质分解氧化及风味特性的影响

以腐生葡萄球菌(Staphylococcus Saprophyticus)CGMCC 3475为发酵剂发酵里脊猪肉,以不接菌的样品为对照,通过测定各发酵阶段(发酵30 d、50 d、70 d、90 d、110 d)的游离脂肪酸(FFA)、硫代巴比妥酸值(TBARS)、双烯值和羰基值等来研究腐生葡萄球菌对发酵里脊猪肉脂质分解氧化规律的影响。通过测定醛和酮等挥发性风味物质来研究腐生葡萄球菌对发酵里脊猪肉脂质的氧化产物对风味特性的影响。结果表明,接菌处理发酵里脊猪肉中的SFA、MUFS、PUFA的含量除发酵50天显著低于对照发酵里脊猪肉外(P<0.05),其余各个阶段这3种脂肪酸的含量都显著高于对照发酵里脊猪肉(P<0.05)。2个处理发酵脊猪肉中的SFA、PUFA的含量都在发酵90天达到最大值,而MUFA的含量在发酵过程中持续增加。TBARS值整体趋势都是减少的,只有在发酵70天的时候有所增加。羰基值从发酵30天到90天都是呈显著增加的(P<0.05),到发酵110天时有所降低。双烯值都是显著增加的(P<0.05),而且接菌处理发酵里脊猪肉的双烯值均显著高于对照处理发酵里脊猪肉(P<0.05)。发酵70天时,接菌处理发酵里脊猪肉检测出高达56.71%的酯类物质而检测出相比对照处理发酵里脊猪肉较少的直链醛和酮外,其余各个发酵阶段的直链醛和酮的含量均显著高于对照处理发酵里脊猪肉(P<0.05)。

1株总状毛霉CGMCC8700的鉴定及蛋白质谱分析

毛霉是发酵大豆制品常用的菌种,通过常规分离方法从自然发酵的豆制品中分离得到一种纯种霉菌,采用培养和显微观察方法,分析其脂肪酸组成、(G+C)%摩尔含量、rRNA基因序列的ITS1-5.8S-ITS2区、结合蛋白质谱分析毛霉蛋白质的组成。经过鉴定该霉菌为总状毛霉(CGMCC8700),菌丝为棉絮状,有厚垣孢子,孢子呈卵圆形或椭圆形,黄褐色,G+C摩尔含量为39.53%,TM值为70%,rRNA基因序列的ITS1-5.8S-ITS2区包括640个碱基,蛋白质全谱质谱鉴定为该毛霉有1 304个特定的肽段,鉴定到肽段的长度集中在8和22之间,但长度为11的肽段最多,平均肽段长度为14.62,平均蛋白质的鉴定覆盖度为17.25%。这些指标与毛霉菌发酵特性有关。

蜡样芽孢杆菌CGMCC4348菌株防治番茄灰霉病的效果及机理研究

试验研究蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)CGMCC4348菌株对番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)的生物防治效果,并初步探讨其抑菌机理,以寻找防治番茄灰霉病的新方法。试验从定量生物测定、室内离体抑菌试验和盆栽试验3个方面考察其抑菌作用效果,并以硫酸铵分级沉淀法提取拮抗蛋白进行检测。结果表明,室内抑菌试验的EC50为6.19 mg/L;盆栽试验中处理3对番茄灰霉病的平均防效达75.80%,与50 mg/L嘧霉胺处理的防效相当。试验证明蜡样芽孢杆菌CGMCC4348对番茄灰霉病菌有较好防治效果。

Alcaligenes sp. CGMCC2428产威兰胶的分批发酵动力学模型

利用分批发酵研究Alcaligenes sp. CGMCC2428产微生物多糖威兰胶的合成特性,结果表明威兰胶的合成和菌体生长模型为部分偶联型.菌体和威兰胶质量浓度分别达到3.30和26.50 g/L,威兰胶对细胞干质量得率系数(YP/X)为8.20.根据分批发酵实验结果采用Logistic方程、Luedeking-Piret方程和Luedeking-Piret相似方程,得到了描述Alcaligenes sp. CGMCC2428生长、威兰胶以及葡萄糖底物消耗分批发酵动力学模型.同时改变初始葡萄糖质量浓度,实验数据与模型预测值进行了比较拟合,平均相对误差小于10%,表现出很好的适用性.

椰壳甘露低聚糖促嗜酸乳杆菌CGMCC 1.1854生长特性的研究

研究了椰壳甘露低聚糖促嗜酸乳杆菌生长特性,发现椰壳低聚糖具有较强的促进嗜酸乳杆菌(LactobacillusacidophilusCGMCC1.1854)生长作用,而椰壳低聚糖与蔗糖混合(DMC+SUC)则可进一步提高其增殖能力,37℃下培养36 h,最高活菌数可达9.38×109cfu.mL-1。

高渗工业菌株Candida glycerinogenes整合型表达载体的构建及验证

构建应用于工业用产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes)CGMCC NO.6830的整合型表达载体,建立一种可利用底物形成的渗透压调控表达外源基因的体系。以p UC19质粒为基本骨架,C.glycerinogenes CGMCC NO.6830的18S r DNA为整合位点,运用其3-磷酸甘油脱氢酶基因启动子PCggpd启动外源基因表达,腐草霉素抗性基因ble作为重组酵母转化子筛选标记,获得应用于产甘油假丝酵母的稳定的表达型整合载体;以绿色荧光蛋白基因gfp作为报告基因考察该表达质粒的性能,实现了外源基因gfp的渗透压调控表达。

凝结芽孢杆菌CGMCC 9951新型抗菌肽的挖掘、表达及活性测定

抗菌肽是一类能够抑制食源性致病菌生长的天然生物防腐剂。为获得凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)CGMCC 9951抗菌肽,利用全基因组测序和生物信息学分析,对抗菌肽合成基因簇进行挖掘,并进行表达和活性验证。结果表明,应用antiSMASH软件共挖掘出2个抗菌肽,与NCBI数据库比对后,发现Region 3与Amylocyclicin相似度较高,后续选择Region 3进行表达。通过Expasy等软件对Region 3抗菌肽结构进行分析,发现成熟Region 3抗菌肽由64个氨基酸残基组成,分子质量为6371.57 Da,呈带正电的疏水性蛋白;Region 3同源比对结果为环状抗菌肽,三级结构主要为α螺旋结构。为研究该肽的抗菌活性,成功在大肠杆菌中构建了含谷胱甘肽巯基转移酶标签的融合蛋白,并进行质谱验证。以单核细胞增生李斯特氏菌为指示菌,抑菌圈直径为(15.2±1.4)mm,证实表达的融合蛋白具有抗菌活性。融合蛋白的成功表达为凝结芽孢杆菌CGMCC 9951抗菌肽的进一步研究和应用奠定基础。

亚硒酸钠对短乳杆菌CGMCC 6683细胞膜的影响

研究了1株高富硒率乳酸菌短乳杆菌(Lactobacillus brevis) CGMCC 6683在降解Na_2SeO_3过程中的生长情况。结果显示,短乳杆菌在含有Na_2SeO_3的培养基中生长24 h后,生物量由108CFU/mL最多下降至104CFU/mL,菌体富硒后其膜表面形态发生变化甚至产生破损。实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)结果显示,编码甲硫氨酸亚砜还原酶以及硫氧还蛋白还原酶的基因发生显著上调,表明菌体内被诱导处于氧化应激状态,后续丙二醛含量检测结果与此互为印证,表明菌体内脂质过氧化反应的发生。综合表明,菌体代谢Na_2SeO_3过程中体内处于氧化应激状态,产生的反应活性氧与菌体膜脂质发生脂质过氧化反应,造成膜受损,最终导致菌体死亡。

球毛壳菌CGMCC 6882利用小麦秸秆发酵生产抗氧化多糖

针对我国小麦秸秆存在严重浪费和污染环境的现状,该实验采用球毛壳菌CGMCC 6882对小麦秸秆进行发酵,生产一种新型胞外多糖,并对多糖结构和抗氧化活性进行研究。结果显示,球毛壳菌CGMCC 6882以小麦秸秆为碳源发酵所得胞外多糖的单糖组成和摩尔比为鼠李糖∶氨基葡萄糖∶半乳糖∶葡萄糖∶木糖∶果糖∶葡萄糖醛酸=21.46∶1.58∶1.11∶55.15∶36.37∶7.04∶7.34,重均分子质量M w为3.538×10^(4) Da。体外抗氧化实验结果显示,球毛壳菌CGMCC 6882胞外多糖可以有效清除DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子和ABTS阳离子自由基,且清除率与多糖浓度成正相关。多糖质量浓度为5 mg/mL时,对上述自由基的清除率分别达到(83.08±2.58)%、(81.39±1.47)%、(79.38±2.03)%和(85.69±1.62)%。细胞抗氧化实验结果显示,加入多糖实验组的丙二醛酶活水平从(15.8±0.25)μmol/g降低至(7.5±0.31)μmol/g,与多糖浓度成负相关;Caco-2细胞内超氧化物岐化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活力水平分别从(147.28±4.82)、(11±1.15)和(18.08±1.96)U/mg增加至(238.89±3.91)、(39.12±0.76)和(41.35±2.18)U/mg,且与多糖浓度成正相关。该实验为小麦秸秆的高效利用提供了重要依据和理论基础。

Chaetomium globosum CGMCC 6882产黄酮类化合物的发酵工艺及产物抗氧化活性研究

黄酮类化合物具有多种生物活性,对发酵工艺和抗氧化活性研究可为其生产和应用提供基础数据。采用绞股蓝内生真菌Chaetomium globosum CGMCC 6882发酵产黄酮类化合物,对培养基组成和发酵条件进行优化;通过体外和细胞抗氧化试验,研究黄酮类化合物的抗氧化活性。发酵工艺优化结果表明:C.globosum CGMCC 6882产黄酮类化合物的最佳培养基组成是淀粉、酵母粉、钼酸钠和磷酸氢二钾;发酵最佳条件是发酵时间7.22 d、接种量4.88%(V/V)和pH 6.23。体外抗氧化活性结果表明:C.globosum CGMCC 6882所产黄酮类化合物的抗氧化活性具有一定量效关系,在3.0 mg/mL时,对DPPH自由基、羟基自由基、ABTS自由基和超氧阴离子自由基的清除率分别为(75.2±1.4)%、(84.3±0.8)%、(82.8±1.9)%和(81.5±2.8)%。细胞氧化损伤模型试验结果表明:C.globosum CGMCC 6882发酵所得黄酮类物质可显著提高H_(2)O_(2)氧化损伤的Caco-2胞内超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶的酶活水平,并降低丙二醛含量。对C.globosum CGMCC 6882发酵产黄酮类化合物发酵工艺的优化,进一步提高了黄酮类化合物的产量且产物具有良好的抗氧化活性,可用于工业化生产。

米曲霉CGMCC5992液体发酵培养基的优化

木质素过氧化物酶(LiP)由米曲霉CGMCC5992合成,是催化H_2O_2降解秸秆木质素的关键酶,可用于秸秆的预处理,提高秸秆的消化率。试验以LiP酶活为指标,通过单因素试验和正交试验优化米曲霉CGMCC5992合成LiP培养基中碳源、氮源、无机盐及营养因子组成,得到最佳培养基为麦芽糖2.5、甘油2.5、酵母浸膏15.0、硫酸铵45.0、FeSO_4·5H_2O 0.4、CuSO_4·5H_2O 0.4、MnSO_4·H_2O 1.0、MgSO_4·7H_2O 0.6及甘氨酸5.5g/L,维生素B_(12)100mg/L。优化后条件下,最大LiP酶活可达1892.17U/L,优化效果显著。

真菌Gliocladium roseum CGMCC 3.3657酚类次生代谢产物研究

目的研究Gliocladium roseum CGMCC 3. 3657乙酸乙酯提取物的次生代谢产物情况,为挖掘该菌株可能存在的应用价值奠定基础。方法通过乙酸乙酯萃取液体发酵产物,采用中压制备色谱、硅胶柱层析法分离次生代谢产物,经~1H、^(13)C NMR进行化合物结构鉴定。结果从G. roseum CGMCC 3. 3657发酵液乙酸乙酯粗提物中分离得到4个苯酚类化合物,经核磁共振波谱分别鉴定为:(1)对羟基苯甲醛;(2)对羟基苯甲酸;(3)3,4-二羟基苯甲酸;(4)3,5-二羟基苯甲酸。结论化合物1、2、3、4均为首次从该属真菌中分离得到。