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猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-1R株致弱过程中ORF5基因遗传变异分析 被引量:5
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作者 吴国军 蔡雪辉 +6 位作者 刘永刚 王洪峰 王淑杰 石文达 马平 张琪 李成君 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期665-670,共6页
将猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-1a株在Marc-145细胞上传代,用85代(S85)病毒对35日龄的仔猪进行人工感染试验,证实该毒株已经被致弱,将其命名为CH-1R株。利用RT-PCR扩增10个不同代次的CH-1a株和CH-1R株病毒的ORF5基因,并与9株参考毒株进行R... 将猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-1a株在Marc-145细胞上传代,用85代(S85)病毒对35日龄的仔猪进行人工感染试验,证实该毒株已经被致弱,将其命名为CH-1R株。利用RT-PCR扩增10个不同代次的CH-1a株和CH-1R株病毒的ORF5基因,并与9株参考毒株进行RFLP分析,发现了一个特异性的内切酶酶切位点-TspEⅠ。根据该酶切位点,可以区分CH-1R株、CH-1a株、其它野生型毒株和参考毒株。ORF5基因的变异分析显示,该致弱毒株与CH-1a株以及其它8株参考毒株存在着差异,并且它们的氨基酸同源性在88.5%~97.0%之间。系统进化树研究表明该弱毒株仍属于CH-1a亚支。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 CH—1r OrF5 变异分析
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短肽佐剂对猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗CH-1R株的免疫增强作用研究 被引量:6
2
作者 徐磊 陈晟生 +9 位作者 张如梅 詹先强 陈樨 林拱阳 曾亮明 黄艺珠 林伯全 邓衔柏 黄瑜 张渊魁 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期495-499,共5页
为评价一种短肽佐剂对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1R弱毒疫苗的免疫增强效果,本研究分别采用CH-1R疫苗株单独(单独免疫组)、CH-1R疫苗株与短肽佐剂共同(共同免疫组)及生理盐水(对照组)免疫仔猪,4周后以高致病性PRRSV(H P-PRRSV)TJ... 为评价一种短肽佐剂对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1R弱毒疫苗的免疫增强效果,本研究分别采用CH-1R疫苗株单独(单独免疫组)、CH-1R疫苗株与短肽佐剂共同(共同免疫组)及生理盐水(对照组)免疫仔猪,4周后以高致病性PRRSV(H P-PRRSV)TJ-F5攻毒,并采用流式细胞术对攻毒前后淋巴细胞亚类T、Th、Tc及N K进行绝对和相对计数。结果显示攻毒后共同免疫组仅在第3 d淋巴细胞亚类数量显著下降后回升,28 dTc/T显著高于单独免疫组,临床症状和各组织器官病理变化轻微;单独免疫组在攻毒后第3 d淋巴细胞亚类数量显著下降后回升,之后于第14和15 d再次显著下降后又回升,临床症状和各组织器官病理变化比共同免疫组严重,但比对照组明显减轻。单独免疫组、共同免疫组及对照组的攻毒保护率分别为40%、80%、0。研究结果表明,短肽佐剂配合CH-1R弱毒疫苗具有缓解H P-PRRSV TJ-F5的免疫抑制、增强细胞免疫及提高免疫保护力的作用;在抵抗H P-PRRSV TJ-F5攻击时,共同免疫组的免疫保护力明显高于单独免疫组。 展开更多
关键词 PrrSV ch-1r弱毒疫苗 短肽佐剂 免疫效力 淋巴细胞亚类
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猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(CH-1R株)工厂化生产培养条件的研究 被引量:4
3
作者 赖志 黄锡琴 +3 位作者 龚建培 钮雪根 高俊锋 杨汉春 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期615-618,共4页
为提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)活疫苗CH-1R株的产量和疫苗的质量,本实验探索了PRRSV活疫苗CH-1R株在MARC-145细胞中大规模生产培养的最佳条件。将CH-1R株分别在3L和10L转瓶培养的MARC-145细胞中进行增殖试验,分析CH-1R株在不同... 为提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)活疫苗CH-1R株的产量和疫苗的质量,本实验探索了PRRSV活疫苗CH-1R株在MARC-145细胞中大规模生产培养的最佳条件。将CH-1R株分别在3L和10L转瓶培养的MARC-145细胞中进行增殖试验,分析CH-1R株在不同接种病毒量和不同接种病毒时间的TCID50变化规律。结果表明,在3L和10L转瓶中,病毒的TCID50最高可达到107.0TCID50/mL以上。CH-1R株通过转瓶在MARC-145细胞中大规模增殖,为PRRSVCH-1R株的工厂化生产奠定了基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征PrrS活疫苗(ch-1r株) 细胞培养Marc-145细胞
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猪脾转移因子对猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(CH-1R株)免疫抗体的影响
4
作者 陈上永 《福建畜牧兽医》 2022年第5期50-52,共3页
本研究旨在明确猪脾转移因子(TF)对猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)活疫苗(CH-1R株)免疫抗体的影响,采用具有自主知识产权的中国发明专利制备3批猪脾TF,将PRRS活疫苗(CH-1R株)单独或分别与3批TF联合(单独免疫组、联合免疫组1、联合免疫组2和... 本研究旨在明确猪脾转移因子(TF)对猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)活疫苗(CH-1R株)免疫抗体的影响,采用具有自主知识产权的中国发明专利制备3批猪脾TF,将PRRS活疫苗(CH-1R株)单独或分别与3批TF联合(单独免疫组、联合免疫组1、联合免疫组2和联合免疫组3)免疫PRRS抗体阴性仔猪,并设立非免疫空白组,采用ELISA方法检测PRRS抗体水平。结果显示,免疫后第7 d、14 d、28 d、42 d和56 d,联合免疫组1、联合免疫组2和联合免疫组3的PRRS抗体阳性率均比单独免疫组高20%~40%。结果表明,TF可以提高PRRS活疫苗(CH-1R株)的免疫抗体水平,为PRRS防控提供参考。 展开更多
关键词 转移因子 猪繁殖与呼吸综合征 ch-1r 免疫抗体 阳性率
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猪繁殖与呼吸综合征CH-1R弱毒株低血清培养工艺研究
5
作者 张如梅 陈樨 《福建畜牧兽医》 2013年第1期1-3,共3页
Marc-145细胞是用于猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)培养的易感细胞。通过对PRRSV CH-1R高敏感Marc-145/D2克隆细胞株培养特性的研究,以及分析病毒在不同血清浓度细胞维持液中的增殖水平,筛选出最佳培养条件。结果表明,以Marc-145/D2克... Marc-145细胞是用于猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)培养的易感细胞。通过对PRRSV CH-1R高敏感Marc-145/D2克隆细胞株培养特性的研究,以及分析病毒在不同血清浓度细胞维持液中的增殖水平,筛选出最佳培养条件。结果表明,以Marc-145/D2克隆细胞株无血清转瓶培养PRRSV CH-1R的抗原效价可达到108.0TCID50/mL以上。 展开更多
关键词 PrrSV ch-1r MArC-145 D2克隆细胞 无血清培养 过敏反应
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羰基还原酶与甲酸脱氢酶偶联催化制备(R)-苯基乙二醇 被引量:2
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作者 张荣珍 徐岩 +2 位作者 耿亚维 王珊珊 孙莹 《过程工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期801-805,共5页
以重组菌E.coli Rosetta/pETDuet-rcr-fdh全细胞为催化剂,2-羟基苯乙酮和甲酸钠为双底物,研究了生物催化反应体系中温度、pH值、底物2-羟基苯乙酮的初始浓度、反应时间、细胞浓度和状态等对产物(R)-苯基乙二醇生成效率的影响规律.结果表... 以重组菌E.coli Rosetta/pETDuet-rcr-fdh全细胞为催化剂,2-羟基苯乙酮和甲酸钠为双底物,研究了生物催化反应体系中温度、pH值、底物2-羟基苯乙酮的初始浓度、反应时间、细胞浓度和状态等对产物(R)-苯基乙二醇生成效率的影响规律.结果表明,在温度35℃和pH7.0、底物初始浓度6g/L、时间36h、湿细胞浓度10%(ω)的条件下,产物的光学纯度高达98.37%e.e.,得率达79.14%.在上述反应体系中添加5mmol/LZnSO4后,重组菌催化的不对称还原反应效率显著提高,产物(R)-苯基乙二醇光学纯度达到100%e.e.,得率高达86.3%. 展开更多
关键词 重组大肠杆菌 生物催化 (r)-苯基乙二醇 光学纯度 得率
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THE ANALYSES OF THE THREE-DIMENSIONAL STRESS STRUCTURE NEAR THE CRACK TIP OF MODE Ⅰ CT SPECIMENS IN ELASTICPLASTIC STATE(Ⅱ)--THE ANALYSES OF THE STRESS STRUCTURE
7
作者 Yue Zhu-feng Zheng Chang-qing 《Applied Mathematics and Mechanics(English Edition)》 SCIE EI 1993年第9期817-828,共12页
Based on[1],the stress structures of the smooth region and shear lip of the specimens have been investigated in the paper.The characteristics of the stress structure in the smooth region have been found that the varia... Based on[1],the stress structures of the smooth region and shear lip of the specimens have been investigated in the paper.The characteristics of the stress structure in the smooth region have been found that the variable z can separated out;the stresses in the midsection can be obtained by the plane strain FEM results or HRR structure modified by the stress triaxiality.The effects of load level and thickness on the stress structure can be reflected by the distribution of CTOD along the thickness direction.The obtained expressions of the stresses are very simple and visualized.The analyses of the stress structure in the shear lip show that the stresses can be obtained by different methods of interpolation to a certain precise degree.A new degree parameter of the plane strain state has been put forward and studied.The parameter can reflect relatively well the variation of the kind and thickness of the specimen as well as the load level.The fracture parameter has also been investigated to be sure that it can be obtained by modified CTOD with the stress triaxiality. 展开更多
关键词 stress structure SINGULArITY Z_(1)region stress triaxiality rσ CTOD shear lip interpolative method degree parameter of the plane strain state
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PRRSV CH-1R疫苗株N蛋白的克隆及原核表达
8
作者 孙斯娴 陈奥运 +2 位作者 李晓白 陆相嵩 任晓明 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第5期177-180,共4页
为了区分猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原是来自疫苗株还是野毒株,试验采用RTPCR和PCR方法从PRRSV CH-1R株中扩增出ORF7基因,通过T4连接酶将ORF7基因与p ET-28a(+)载体连接,导入E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,并以20%IPTG进行诱导表... 为了区分猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原是来自疫苗株还是野毒株,试验采用RTPCR和PCR方法从PRRSV CH-1R株中扩增出ORF7基因,通过T4连接酶将ORF7基因与p ET-28a(+)载体连接,导入E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,并以20%IPTG进行诱导表达。结果表明:重组菌可表达分子质量为16.0 ku的融合蛋白,且20%IPTG诱导3 h的表达效果最好;表达产物纯化后可得到纯度较高的目的蛋白,经Western-bolt分析可确认该蛋白为PRRSV CH-1R株N蛋白。说明在原核表达系统中可表达出PRRSV CH-1R株N蛋白,并且能够使其携带上多聚组氨酸(6×His-tag)标签,形成N-His融合蛋白,使该蛋白与其他PRRSV经典株的N蛋白形成差异化。 展开更多
关键词 PrrSV ch-1r N蛋白 His标签 N-His融合蛋白 克隆 原核表达
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猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗和变异株灭活疫苗的免疫效果评价 被引量:37
9
作者 胡守萍 张卓 +4 位作者 蔡雪辉 田志军 刘永刚 安同庆 吴东来 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期392-396,共5页
分别采用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1R致弱毒疫苗株和变异毒株灭活疫苗免疫接种40日龄~45日龄仔猪,免疫接种后4周,用高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)HuN-4变异株强毒攻毒,攻毒后21 d剖检,取主要器官作病理组织学观察... 分别采用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1R致弱毒疫苗株和变异毒株灭活疫苗免疫接种40日龄~45日龄仔猪,免疫接种后4周,用高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)HuN-4变异株强毒攻毒,攻毒后21 d剖检,取主要器官作病理组织学观察和病毒抗原定位。结果显示变异毒株灭活疫苗免疫攻毒后导致的病理变化和病毒抗原分布程度均明显高于CH-1R弱毒疫苗免疫组。免疫病理学研究结果表明CH-1R弱毒疫苗对HU-4株强毒免疫保护效果好于变异毒株灭活疫苗。 展开更多
关键词 PrrSV ch-Ir致弱疫苗 PrrSV变异毒株灭活疫苗 免疫效果评价
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厄斯考维菌产羰基还原酶的发酵条件优化 被引量:2
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作者 何军邀 白东亚 王普 《浙江工业大学学报》 CAS 北大核心 2018年第4期467-472,共6页
从土壤中筛到一株产羰基还原酶的菌种骚动厄斯考维菌(Oerskovia turbata)ZJPH1604,利用该微生物细胞可不对称催化3-氯苯乙酮合成(R)-1-(3-氯苯基)乙醇,对映体过量值>99.9%.通过单因素试验发现:酵母提取物、(NH_4)_2SO_4和KH_2PO_4为... 从土壤中筛到一株产羰基还原酶的菌种骚动厄斯考维菌(Oerskovia turbata)ZJPH1604,利用该微生物细胞可不对称催化3-氯苯乙酮合成(R)-1-(3-氯苯基)乙醇,对映体过量值>99.9%.通过单因素试验发现:酵母提取物、(NH_4)_2SO_4和KH_2PO_4为影响酶活的显著影响因子,继而采用响应面法对产酶条件进行了优化.结果表明:最优发酵培养基组成为葡萄糖15.0g/L,酵母提取物30.0g/L,(NH_4)_2SO_4 2.6g/L,KH_2PO_4 2.8g/L,NaCl 0.6g/L,MgSO_4 0.8g/L.在最适培养条件下,菌体羰基还原酶的酶活力达到32.0U/g,较优化前提高了166.7%.为高效合成(R)-1-(3-氯苯基)乙醇提供了新途径,丰富了生物不对称合成手性药物中间体的手段. 展开更多
关键词 厄斯考维菌 羰基还原酶 菌种筛选 (r)-1-(3-氯苯基)乙醇 培养基优化
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恶臭假单胞菌产羰基还原酶的发酵条件优化 被引量:1
11
作者 何军邀 白东亚 王普 《发酵科技通讯》 CAS 2017年第4期243-248,共6页
从土样中筛选得到一株产羰基还原酶的菌种恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)ZJPH1606,该菌能不对称催化2'-三氟甲基苯乙酮合成(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇,对映体过量值超过99.0%.通过单因素考察产酶培养基组成发现:葡萄糖、牛肉膏... 从土样中筛选得到一株产羰基还原酶的菌种恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)ZJPH1606,该菌能不对称催化2'-三氟甲基苯乙酮合成(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇,对映体过量值超过99.0%.通过单因素考察产酶培养基组成发现:葡萄糖、牛肉膏和MgSO_4·7H_2O对酶活的影响较为明显,进一步采用响应面法对产酶培养基进行了优化.结果表明:最优发酵培养基组成为葡萄糖38.5g/L,牛肉膏32.7 g/L,MgSO_4·7H_2O 1.1 g/L.在最适培养条件下,菌体酶活力达0.31 U/g,较优化前提高了71.0%.该研究结果丰富了羰基还原酶数据库的基因序列,为高效合成(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇提供了新途径. 展开更多
关键词 恶臭假单胞菌 羰基还原酶 菌种筛选 (r)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇 培养基优化
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猪高致病性蓝耳病弱毒活疫苗免疫试验
12
作者 冯开容 钱慧慧 +9 位作者 陆巧芬 曹建伟 林长沾 谭文盛 胡启传 冯秀红 李瑞亭 陈修邓 谢东 关建新 《广东畜牧兽医科技》 2012年第6期32-34,共3页
为了更好地指导养殖户应用高致病性蓝耳病活疫苗(JXA1-R株),本中心从淋巴细胞计数、病毒核酸检测、免疫抗体检测等方面,分析了高致病性蓝耳病弱毒活疫苗免疫应答情况。本次试验选取30天龄的杜长大三元断奶仔猪20头,随机分成A、B两组,每... 为了更好地指导养殖户应用高致病性蓝耳病活疫苗(JXA1-R株),本中心从淋巴细胞计数、病毒核酸检测、免疫抗体检测等方面,分析了高致病性蓝耳病弱毒活疫苗免疫应答情况。本次试验选取30天龄的杜长大三元断奶仔猪20头,随机分成A、B两组,每组10头。A组注射J XA1-R株活疫苗,B组头注射生理盐水作对照。结果显示该疫苗免疫仔猪28天后,淋巴细胞由7.585×109/L上升到15.28×109/L,免疫抗体阳性率由0%上升到100%,免疫猪病毒核酸检出率由0%上升到90%。揭示了PRRS活疫苗(JXA1-R株)能使仔猪产生较好的免疫应答,疫苗毒感染持续时间多数超过28天。 展开更多
关键词 PrrS JXA1-r 活疫苗 免疫应答
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(JXA1-R株)免疫效力及安全性试验报告
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作者 李婷婷 陶明新 +6 位作者 张伟 殷健 赵益超 朱寅彪 糜飞 高瑞金 沈晓东 《当代畜牧》 2016年第12期36-39,共4页
笔者检验了国药集团扬州威克生物工程有限公司制备的高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(JXA1-R株)免疫效力,对SY-007批苗、国内市售某同类疫苗和进口苗进行比较,包括外观、溶解性、病毒含量和安全性和攻毒保护率。结果显示,国药集团扬... 笔者检验了国药集团扬州威克生物工程有限公司制备的高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(JXA1-R株)免疫效力,对SY-007批苗、国内市售某同类疫苗和进口苗进行比较,包括外观、溶解性、病毒含量和安全性和攻毒保护率。结果显示,国药集团扬州威克生物工程有限公司疫苗与市售某国产苗和进口苗在外观上稍有颜色差异,但溶解性无明显差异;国药集团扬州威克生物工程有限公司疫苗与市售某国产苗病毒含量相同,均高于进口苗;3种疫苗对裸鼠和仔猪均具有较好的安全性;国药集团扬州威克生物工程有限公司疫苗的免疫效力与进口苗效果基本一致,且明显好于市售某国产苗。系列试验结果表明,国药集团扬州威克生物工程有限公司生产的高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(JXA1-R株)产品质量与进口苗相当,优于市售某国产苗。 展开更多
关键词 高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗 JXA1r 安全性试验 效力试验
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感染PRRSV弱毒株后仔猪病毒血症和抗体产生规律
14
作者 王冬梅 李闻 +9 位作者 孙杨杨 李想通 许瑞勤 魏凤灵 张留君 冯延 马思续 杨国宇 夏平安 张改平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期2123-2128,共6页
为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1R弱毒株在仔猪体内的增殖及其诱导抗体产生的规律。本试验将PRRSV CH-1R弱毒株肌肉注射免疫9头45日龄健康仔猪,于免疫后0,7,14,28,35和42d通过前腔静脉采取新鲜血液,利用实时荧光定量PCR方法检... 为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1R弱毒株在仔猪体内的增殖及其诱导抗体产生的规律。本试验将PRRSV CH-1R弱毒株肌肉注射免疫9头45日龄健康仔猪,于免疫后0,7,14,28,35和42d通过前腔静脉采取新鲜血液,利用实时荧光定量PCR方法检测PRRSV在猪体内的增殖,ELISA方法检测抗PRRSV抗体,并利用基于PAM细胞建立的中和试验检测中和抗体。结果显示:PRRSV CH-1R弱毒株免疫仔猪后7d病毒在100%仔猪体内开始复制,免疫后7~14d时100%仔猪出现病毒血症,且病毒拷贝数达到最高,28~35d时56%仔猪病毒血症消失,42d时67%仔猪病毒血症消失;ELISA检测发现免疫后7~14d仔猪均未产生抗PRRSV抗体,28d时44%仔猪开始产生抗PRRSV抗体,42d时78%仔猪抗PRRSV抗体水平达到最高,有2头猪在0~42d一直未检测到抗PRRSV抗体;利用基于PAM细胞上建立的检测中和抗体的方法检测,免疫后7~14d均未产生中和抗体,28d时仅有22%仔猪产生低水平的中和抗体,35d时78%仔猪产生中和抗体,且在42d时其中和抗体水平达到最高。结果表明,PRRSV CH-1R弱毒株免疫仔猪后病毒血症在7~14d达到高峰,免疫接种后28~42d大部分仔猪病毒血症逐渐消失,即病毒增殖随时间呈递减趋势;抗PRRSV抗体及中和抗体均在免疫接种后28d开始出现且在42d抗体水平达到顶峰,即抗体水平随时间呈递增趋势。抗PRRSV的ELISA抗体与中和抗体水平呈正相关,而抗PRRSV中和抗体水平与病毒增殖呈负相关,但是有33%仔猪体内一直存在病毒,表明PRRSV CH-1R弱毒株免疫仔猪后,可诱导较低水平的抗体免疫保护反应,同时也可引起较低水平的病毒血症。 展开更多
关键词 PrrSV ch-1r弱毒株 仔猪 病毒血症 中和抗体
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