CHFR基因和PARP-1基因对裸鼠Raji淋巴瘤细胞增殖和凋亡调控的研究

目的CHFR基因是一种抑癌基因,低表达或表达缺失可能促淋巴瘤细胞增殖,PARP-1基因参与其对淋巴瘤细胞增殖的调控,本研究旨在通过过表达CHFR基因及分别沉默CHFR、PARP-1基因,观察其对裸鼠移植瘤Raji细胞的影响,探讨CHFR基因和PARP-1基因调控裸鼠Raji淋巴瘤细胞的增殖和凋亡机制。方法在非霍奇金B细胞裸鼠Burkitt淋巴瘤移植瘤Raji细胞中,用5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dC)过表达CHFR基因,及用慢病毒介导的shRNA分别沉默CHFR、PARP-1基因,测定各组裸鼠移植瘤的肿瘤的大小及重量;采用实时荧光定量PCR技术测定各组CHFR及PARP-1基因mRNA含量;应用MSP方法检测各组CHFR的甲基化状态;分别通过TUNEL试剂盒和免疫组化监测凋亡指数(AI)和微血管密度(MVD)。结果5-Aza-dC组的裸鼠在非霍奇金B细胞Burkitt淋巴瘤移植瘤Raji细胞能增强CHFR基因mRNA的表达,降低PARP-1基因mRNA的表达;在体内环境中,5-Aza-dC能够促进移植瘤Raji细胞的凋亡,抑制移植瘤的生长(P<0.05),这些结果与shRNA-CHFR组结果相反,与shRNA-PARP-1组结果一致。而且实验中可见5-Aza-dC组的裸鼠移植瘤的CHFR基因发生去甲基化。结论CHFR基因低表达促进肿瘤细胞增殖,PARP-1基因低表达促进肿瘤细胞凋亡,而5-Aza-dC可以去甲基化抑制肿瘤细胞增殖。

CHFR基因CpG岛甲基化对食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究CHFR基因启动子甲基化状态与食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的关系。方法:分别用不同浓度(2、5、10μmol/L)5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)处理Eca109细胞,未经药物处理的细胞为对照组。甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测CHRF基因CpG岛的甲基化状态,RT-PCR检测CHFR mRNA的表达情况,MTT法及流式细胞术检测不同浓度5-Aza-CdR处理对Eca109细胞增殖及凋亡的影响。结果:对照组Eca109细胞CHFR CpG岛处于高甲基化状态,5-Aza-CdR处理后CHFR CpG岛可发生不同程度的剂量依赖性的去甲基化。对照组Eca109细胞无CHFR mRNA表达,5-Aza-CdR处理组(2、5、10μmol/L)CHFR mRNA相对表达量显著增加(0.174±0.010、0.221±0.013、0.356±0.014)。不同浓度5-Aza-CdR处理后,Eca109细胞增殖受到抑制[作用72 h时的抑制率分别为(30.87±0.74)%、(44.60±0.79)%、(56.67±0.35)%],细胞凋亡显著增加[(7.46±1.46)%、(16.27±1.61)%、(25.29±2.25)%vs(1.83±0.41)%,P<0.01]。结论:食管癌Eca109细胞经5-Aza-CdR处理后,CHFR基因CpG岛发生部分去甲基化,出现CHFRmRNA表达,并抑制Eca109细胞增殖和促进细胞凋亡。

CHFR测井技术的应用

套管井中,由于套管对电流的强阻隔作用,只有极其微弱的电流可以进入地层,使得过套管电阻率测井很难实现。根据电磁场论和传输线模型研究CHFR测井的测量原理,建立CHFR测井响应方程。应用表明,CHFR测井探测深度大,测量结果受地层环境和井眼的影响小,实现了将已发展成熟的裸眼井电阻率评价储层油气分布方法应用于套管井,可广泛应用于套管井地层评价、注水效果监测及产层动态监测等。

两种方法检测胃癌患者CHFR基因启动子区甲基化的状态

背景与目的:目前认为CpG岛甲基化导致转录抑制是恶性肿瘤发生的重要机制之一。微管抑制剂诱发有丝分裂应激时,CHFR基因能够控制细胞分裂的进行。本研究检测胃癌中CHFR基因启动子区甲基化状态,探讨该基因甲基化状态与胃癌临床病理特征的关系;并比较甲基化特异性PCR方法(methylation-specific polymerase chain reaction,MSP)和结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法(combined bisulfite restriction analysis,COBRA)在检测胃癌组织CHFR基因甲基化状态的差异性。方法:首先采用MSP方法检测64例胃癌患者胃癌组织和相对应的癌旁正常组织中CHFR基因启动子区的甲基化状态,然后采用COBRA方法检测64例胃癌患者胃癌组织中CHFR基因启动子区的甲基化状态,并将检测结果结合各病例的临床特征进行分析。结果:MSP方法检测结果显示,51.6%的胃癌组织和18.8%的癌旁正常组织中存在CHFR基因异常甲基化,两者之间的差异有统计学意义(P<0.001);CHFR基因启动子区异常甲基化状态在不同临床病理学特征(包括年龄、性别、肿瘤大小、病理分期、Borrman分型、肿瘤浸润深度、组织分化程度和淋巴转移程度)的胃癌组织和癌旁组织中的差异无统计学意义(P值均>0.05)。COBRA方法检测结果显示,肿瘤组织CHFR甲基化阳性率为42.2%(27/64),与MSP方法检测结果的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CHFR基因异常甲基化是胃癌发生过程中的频发事件,检测胃黏膜组织中CHFR基因异常甲基化状态可能有助于胃癌的诊断。对于胃癌组织CHFR基因启动子区甲基化的检测,MSP与COBRA两种方法没有明显差异。

5-氮杂-2-脱氧胞苷及曲古抑菌素A对人胃癌SGC-7901细胞生长及CHFR基因表达水平的影响

背景与目的:抑癌基因甲基化具有可逆性,相关药物可逆转甲基化使失活的基因重新表达。本研究观察去甲基化制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-dC)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对体外培养的人胃癌SGC-7901细胞活性及CHFR基因mRNA和蛋白表达水平的影响。方法:使用不同浓度的5-Aza-dC和(或)TSA处理SGC-7901细胞,分为对照组、TSA组(250 nmol/L)、5-Aza-dC组(5μmol/L)及TSA(250 nmol/L)联合5-Aza-dC(5μmol/L)组等4个组,采用台盼蓝染色法检测细胞活性,并利用RT-PCR及蛋白质印迹法(Westernblot)方法检测CHFR基因mRNA和蛋白表达的水平。结果:5-Aza-dC和TSA作用24、48、60和72 h后SGC-7901细胞活性均被抑制,且抑制率呈浓度和时间依赖性,两药联合作用更明显;SGC-7901细胞经5-Aza-dC单独或与TSA联合干预后,能提高CHFR基因mRNA和蛋白表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:5-Aza-dC和(或)TSA均能抑制细胞活性,提高CHFR基因mRNA和蛋白表达水平,两药联合的效果比单药明显增加,为临床胃癌患者的化疗方案提供了实验依据。

过套管电阻率测井(CHFR)在剩余油综合挖潜中的应用

过套管电阻率测井是套后电测油层电阻率的新方法。通过与裸眼井电阻率对比,利用衰竭指数定性评价油层水淹程度。参考碳氧比测井资料,逐一砂体进行论证,综合分析砂体剩余油成因,认为该项新技术能够确定油层剩余油富集部位。萨北开发区采用此新方法测井3口,对方法的适用性有一定的认识。以该测井资料为指导,在聚驱后的北2丁-5-P17井上采取补孔措施挖潜,效果突出,认识到该项技术是高含水后期测试剩余油行之有效的方法之一,将在多学科油藏研究以及指导北三东CHFR试验区措施挖潜中发挥重要作用。

Chfr基因在急性白血病骨髓细胞中表达的研究

为了探讨急性白血病(AL)患者骨髓细胞中有丝分裂早期检查点Chfr基因的表达及其意义,对46例初诊未治疗的AL患者骨髓单个核细胞,用RT-PCR和免疫组织化学的方法检测Chfr基因mRNA及蛋白的表达,并与正常人骨髓单个核细胞进行对照。结果表明:免疫组织化学和RT-PCR分析显示,28例急性髓细胞白血病(AML)中的15例,18例急性淋巴细胞白血病(ALL)中的13例骨髓单个核细胞Chfr基因mRNA和蛋白的表达与正常对照相比显著下降,同时Chfr基因表达异常病例染色体检查存在核型异常。结论:急性白血病骨髓细胞有丝分裂检查点Chfr基因表达受损,可能在白血病发病中具有重要作用。

CHFR基因启动子区超甲基化在食管癌临床意义中的研究进展

CHFR是一个新的有丝分裂早前期检查点基因,在有丝分裂应激时,延迟染色体凝集和中心体分离,阻止细胞进入有丝分裂期,其表达增强细胞对应激的生存能力。研究显示,CHFR在人正常组织中广泛表达,而在肿瘤组织中表达缺失,如胃癌、子宫内膜癌、宫颈癌等。CHFR基因启动子区超甲基化是其表达沉寂的主要原因,并与肿瘤的发生发展有关,在食管癌中已有相关报道。现对CHFR基因启动子区超甲基化在食管癌的发生、诊断、治疗及判断预后上的意义做一综述。

CHFR在子宫内膜癌细胞中的表达和甲基化调控

目的:研究CHFR在人子宫内膜癌细胞株中的表达和甲基化状态,以及去甲基化处理后对子宫内膜癌细胞克隆形成能力的影响。方法:半定量RT-PCR和Western blotting检测CHFR在子宫内膜癌细胞株的表达情况,甲基化特异性PCR检测CHFR的甲基化情况,用5-氨杂胞苷(5-aza)去甲基化处理RL-952细胞后再检测CHFR的表达和及其基因甲基化状态,平板克隆形成实验检测去甲基化对RL-952细胞的克隆形成能力的影响。结果:CHFR在子宫内膜癌细胞株中的表达均比正常成纤维细胞(NF)低,特别在RL-952细胞中表达显著降低。CHFR弱表达的RL-952细胞中CHFR异常高甲基化,而CHFR高表达的NF和ISH细胞均未见甲基化。用5-aza去甲基化处理RL-952细胞后,CHFR甲基化条带消失,其mRNA和蛋白表达明显增加,克隆形成率显著降低。结论:CHFR启动子甲基化是导致子宫内膜癌细胞中CHFR表达降低的主要原因,5-aza能恢复CHFR在子宫内膜癌细胞中的表达,并抑制癌细胞的克隆形成能力。

CHFR基因编码蛋白在食管癌组织中的表达及临床病理学意义

目的观察有丝分裂前期检查点基因CHFR在食管癌、食管上皮内瘤变及正常食管组织中蛋白的表达,了解食管癌中CHFR蛋白表达与患者临床病理资料之间的关系,探讨其在食管癌发生发展过程中的作用及相关的分子机制。方法收集食管癌标本92例以及相配对的食管上皮内瘤变11例,另取正常食管组织27例。采用免疫组化检测92例食管癌及其对应的食管上皮内瘤变、正常食管组织中CHFR蛋白的表达。通过免疫组化半定量积分法判断免疫组化结果。结果食管癌组织中CHFR蛋白阳性表达率为7.61%(7/92),低于正常食管组织的96.3%(26/27)和食管上皮内瘤变组织的54.55%(6/11),且差异有统计学意义(P﹤0.05);食管上皮内瘤变组织中CHFR蛋白阳性表达率也低于正常食管组织,且差异有统计学意义(P﹤0.05)。高分化的食管癌组织中CHFR蛋白表达阳性率的33.33%(6/18)明显高于中-低分化的食管癌组织中CHFR蛋白表达阳性率的1.35%(1/74),差异具有统计学意义(P﹤0.05)。患者的不同年龄、性别以及其他病理资料之间CHFR蛋白表达阳性率比较,差异无统计学意义(P﹥0.05)。结论食管癌中有丝分裂检查点基因CHFR蛋白的表达下调或缺失是频发、早期事件,可能参与食管癌的发生发展,其与食管癌分化程度的关系可能更为密切。

CHFR和mp53基因编码蛋白在胃癌组织中的表达及临床病理学意义

目的:观察CHFR和P53蛋白的表达与胃癌临床病理学特征的关系,探讨其在胃癌发生发展过程中的作用及相关的分子机制.方法:利用组织芯片制作仪(美国),构建成5个包括151例胃癌及101例与其配对的正常胃黏膜、肠化生或不典型增生的组织芯片蜡块.采用Envision免疫组化二步法检测151例胃癌及101例配对癌旁胃黏膜组织中CHFR蛋白和P53蛋白的表达.结果:CHFR蛋白在非癌胃黏膜组织中阳性表达率为85.25%(52/61),在胃癌组织中阳性表达率显著降低(49.67%,75/151,P<0.05);CHFR表达下调或缺失与胃癌患者的性别显著相关,女性患者胃癌组织中CHFR表达缺失率显著高于男性患者(64% vs 43.56%,P<0.05).BorrmanⅢ+Ⅳ型胃癌组织中CHFR表达缺失率显著高于BorrmanⅠ+Ⅱ型胃癌(57.14% vs 34.78%,P<0.05).虽然不同组织学类型胃癌之间CHFR的表达无统计学差异,但本研究发现胃印戒细胞癌组CHFR表达缺失率最高(71.43%).胃癌组织中CHFR蛋白的表达缺失与肿瘤浸润深度、淋巴结转移以及mP53蛋白表达未见显著相关性(P>0.05).结论:有丝分裂前期检查点CHFR基因表达下调或缺失在胃癌中是频发事件.可能参与胃癌的发生,其与女性、弥漫浸润型胃癌发生发展的关系可能更为密切.

CHFR及CHFR/PIK1途径与胃癌发生的关系

目的探讨有丝分裂前期检查点(CHFR)在胃癌中的表达及CHFR/PIK1途径与胃癌细胞生长的关系。方法采用免疫组化法检测64例胃癌及26例癌旁正常组织中CHFR的表达,以CD31标记血管内皮,计数微血管密度(MVD)。利用siRNA干扰胃癌细胞系CHFR基因,观察基因干扰后细胞的生长、增殖情况,以及对信号转导中PIK1的影响。结果 CHFR表达于19.2%(5/64)的胃癌组织;CHFR低表达与浸润深度显著相关(P<0.05)。胃癌组织MVD高于癌旁组织(t=5.614,P<0.05);CHFR基因干扰后较未干扰组细胞增殖增加(P<0.05),同时下游基因PIK1表达下降。结论 CHFR在胃癌的发生中起到了抑制作用,且与CHFR/PIK1途径有关。

CHFR基因与消化道肿瘤关系的研究进展

CHFR(checkpoint with FHA and ring finger),一种在人类癌症中灭活的新的细胞周期检查点基因,在有丝分裂应激时,延迟染色体的浓集、阻止细胞进入有丝分裂中前期.研究表明,CHFR在爪蟾中是P1k1的泛素连接酶,在哺乳动物细胞中主要通过抑制Cyclin B_1进入细胞核、调节Aurora-A的水平及与P38应激激酶相互作用,阻止细胞进入有丝分裂前期.USP7介导的CHFR去泛素化致其累积可能对于CHFR激活是一个关键的调节步骤.在消化道肿瘤中,CHFR表达由于CPG岛甲基化而沉默.本文对CHFR基因的结构、编码蛋白的功能及其与消化道肿瘤关系的研究进展作一综述.

有丝分裂前期检查点Chfr基因作用的研究进展

细胞在长期进化过程中发展出了一套保证细胞周期中DNA复制和染色体分配质量的检查机制 ,通常被称为细胞周期检查点 (checkpoint)。有丝分裂前期检查点Chfr(checkpointwithFHAandringfinger)蛋白在正常组织中广泛表达 ,其结构和功能都十分保守 ,许多研究表明Chfr在细胞分裂过程中发挥着重要作用 ,细胞分裂存在有丝分裂应激时 ,Chfr通路激活引起Plk1的泛素化并降解 ,控制Cdc2激酶的活性 ,延迟染色体凝集和中心体分离 ,阻止细胞于有丝分裂前期 ,它的表达增强细胞对应激的生存能力。本文对Chfr基因的结构 ,Chfr蛋白质的作用和功能研究进展作一综述。

CHFR介导的蛋白PAR化参与肝纤维化DNA损伤应答的分子机制研究

目的 探讨泛素连接酶蛋白(CHFR)介导的蛋白PAR化参与肝纤维化DNA损伤应答的分子机制。方法制备和野生型C57BL/6小鼠同背景的CHFR基因敲除(CHFR-/-)小鼠构建四氯化碳肝纤维化(CCl4)模型,饲养4周后处死,通过免疫组化方法以及Western blotting方法验证小鼠肝纤维模型中DNA的损伤标记物γH2AX表达变化以及对小鼠肝星状细胞(HSC)进行激光照射诱导DNA双链断裂(DSBs)损伤,在荧光显微镜下观察CHFR和γH2AX的定位,采用sh RNA降低小鼠HSC中CHFR蛋白表达,进行放射线照射后,进行单细胞凝胶电泳(Comet)实验。结果 ①Western blotting和免疫组化结果均显示,正常肝组织中未见γH2AX,肝纤维化组织表达明显;②荧光显微镜下显示,HSC细胞核出现γH2AX与CHFR荧光表达,CHFR显著定位于DNA损伤部位,且CHFR与γH2AX表达趋势一致,同时表达于细胞核相同部位;③与野生型C57BL/6小鼠对比,CHFR-/-小鼠γH2AX阳性细胞数明显增多,放射线照射后,CHFR-/-小鼠“彗星尾巴”增加,DNA修复减弱。结论 CHFR可能通过参与DNA损伤修复过程介导HSC活化继而参与肝纤维过程。

CHFR基因在人肝癌HepG2细胞中的表达与作用

目的:研究CHFR基因在人肝癌细胞株HepG2中的表达,以及CHFR基因甲基化对HepG2细胞生长与集落形成的影响。方法:采用去甲基化剂5-氮-2-脱氧胞苷处理人肝癌细胞株HepG2,半定量RT-PCR检测CHFR在HepG2细胞中的表达变化,CCK法和平板集落形成试验分析HepG2细胞生长增殖情况的改变。结果:CHFR在HepG2细胞中表达缺失;经Aza去甲基化处理后,CHFR在HepG2细胞中逐渐恢复表达,肿瘤细胞抑制率和集落形成抑制率都逐渐增高,均存在剂量-反应关系;且CHFR表达水平与HepG2细胞抑制率、集落形成抑制率均呈正相关。结论:CHFR对于肝癌细胞的生长增殖能力发挥负向调控作用。

5-氮杂-2′-脱氧胞苷对胃癌AGS细胞CHFR基因去甲基化作用及意义

目的观察5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对胃癌AGS细胞CHFR基因去甲基化的作用,并探讨其临床意义。方法分别采用BSP和RT-PCR技术检测5-Aza-CdR处理前后胃癌AGS细胞CHFR基因启动子甲基化状态及其mRNA。结果 AGS细胞CHFR基因启动子在5-Aza-CdR处理前呈现高甲基化状态(甲基化率≥60%),其mRNA表达完全缺失;5-Aza-CdR处理后则表现为低或无甲基化状态(甲基化率≤20%),其mRNA表达恢复正常。结论 CHFR基因启动子在AGS细胞中呈高甲基化状态,5-Aza-CdR能显著逆转其CHFR基因异常甲基化,诱导CHFR基因表达,为胃癌的治疗提供新思路。

CHFR甲基化与晚期食管癌患者含紫杉醇方案化疗疗效相关性的研究

目的研究CHFR甲基化水平与晚期食管癌对紫杉醇化疗的关系。方法 100例晚期食管癌患者以紫杉醇方案化疗,最终92例患者按要求完成并进行临床疗效评价。检测CHFR基因甲基化水平与缓解率、无进展生存时间之间的关系。结果 CHFR基因在食管癌患者外周血中呈高频率的甲基化,其甲基化频率为21.7%。甲基化的患者缓解率高于非甲基化的患者(70.0%/41.7%),甲基化的患者无病进展时间长于非甲基化患者(6.3个月/5.7个月)。ECOG评分亦会影响无病进展时间。其他临床因素与缓解率和无进展生存时间无显著相关性。结论 CHFR甲基化水平可能与晚期食管癌患者对紫杉醇化疗疗效和无病进展生存时间相关。

CHFR基因与胃癌关系研究新进展

CHFR(Checkpoint with FHA and ring finger),是Scolnick和Halazonetis于2000年新发现的一种能够检测分裂期正常细胞的分裂情况及控制分裂进行的基因,是一个新的有丝分裂前期检查点基因,同时也是一种新发现的抑癌基因。CHFR编码一种具有FHA和RING区的蛋白,当微管抑制剂诱发有丝分裂应激时,这种蛋白具有延迟染色体的浓集、阻止细胞进入有丝分裂中前期的作用,在正常人组织中普遍表达,而在多种肿瘤组织中发现其表达缺失,而CpG岛的甲基化是导致CHFR表达缺失或沉默的重要机制。胃癌是世界上发病率最高的肿瘤之一,在肿瘤引起的死亡原因中占第二位。胃癌的发生过程涉及到许多基因和复杂的步骤,相关基因包括癌基因,抑癌基因,DNA修复基因,抑癌基因的功能由于基因突变、启动子的甲基化而丢失。甲基化发生于基因的启动子区时会导致基因的沉默,由此而引发肿瘤的发生。启动子区异常甲基化已经作为细胞恶变的一个独立的途径而被许多文献所报道,有研究显示胃癌的发生发展过程中也涉及许多抑癌基因的甲基化现象,其中包括CHFR基因。本文对CHFR基因的结构、编码蛋白的功能及其与胃癌关系的研究进展作一综述。

过套管电阻率测井(CHFR)在剩余油综合挖潜中的有效性研究

过套管电阻率测井是套后电测油层电阻率的新方法.通过与裸眼井电阻率对比,利用衰竭指数定性评价油层水淹程度.参考碳氧比测井资料,逐一砂体进行论证,综合分析砂体剩余油成因,认为该项新技术能够确定油层剩余油富集部位.