CHOP/GADD153在血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞凋亡中的表达及作用

目的:离体观察CHOP/GADD153蛋白表达变化与血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞凋亡的关系,并探讨CHOP/GADD153反义寡核苷酸抗凋亡作用。方法:对体外培养的乳鼠心肌细胞,单用AngⅡ刺激或预加不同浓度CHOP/GADD153反义寡核苷酸干预后,再加入AngⅡ刺激。用MTT法检测细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒测定培养上清液中LDH含量,AnnexinV流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blotting法检测CHOP/GADD153、Bcl-2及Bax表达变化。结果:AngⅡ组,心肌细胞CHOP/GADD153表达(0.75±0.06)显著高于对照组(0.20±0.02),P<0.01;心肌细胞活性(66.32±2.09)%显著低于对照组(100.00±0.00)%,P<0.05;培养上清液中LDH含量(79.36±5.69)U/L显著高于对照组(20.23±2.83)U/L;细胞凋亡率(16.62±2.09)%显著高于对照组(3.33±0.28)%,P<0.05;Bcl-2表达(0.44±0.05)显著低于对照组(0.73±0.05),P<0.01;Bax表达(0.90±0.10)显著高于对照组(0.69±0.08),P<0.01;Bax/Bcl-2比值(2.00±0.22)显著高于对照组(0.93±0.09),P<0.01。预加CHOP/GADD153反义寡核苷酸干预,可显著逆转AngⅡ的以上作用,虽对Bax蛋白表达无显著影响,但对照组Bax/Bcl-2的比值显著低于AngⅡ组(P<0.01),而错义寡核苷酸无此效应。脂质体组与对照组无显著差异。结论:CHOP/GADD153表达升高可能是AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡机制之一,CHOP/GADD153反义寡核苷酸能抑制AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡。

子痫前期内质网应激相关蛋白CHOP/GADD153的表达及其意义

目的:研究内质网应激相关蛋白CHOP/GADD153在子痫前期患者胎盘组织中的表达及其意义。方法:选择2009年6月～2010年6月在南京医科大学第一附属医院产科住院分娩的子痫前期患者30例(子痫前期组),以同期正常孕妇35例为对照组。采用RT-PCR技术、蛋白印迹(western-blot)法和免疫组化检测两组孕妇胎盘组织中CHOP/GADD153的mRNA与蛋白表达水平差异。结果:子痫前期组患者胎盘组织中CHOP/GADD153的mRNA与蛋白表达水平均显著高于相应孕周正常妊娠组。结论:CHOP/GADD153表达的增高与子痫前期的发病相关。

吸氧预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡及CHOP/GADD153表达研究

目的研究吸氧预处理(oxygen inhalating precondition,OIP)对大鼠局灶脑缺血再灌注后内质网应激反应(Indoplasmic recticulum stress,ERS)导致的细胞凋亡及凋亡相关基因生长停滞及DNA损伤基因153(C/EBPhomologous protein/growth arrest and DNA damage-inducible gene 153,CHOP/GADD153)的关系,探讨OIP的脑保护作用。方法采用线栓法阻塞大鼠大脑中动脉制作局灶脑缺血再灌注模型:(1)Tunel法标记神经细胞凋亡;(2)免疫组化染色法和western-blot法观察GADD153蛋白含量。结果与模型组比较,OIP组海马CA1区的凋亡细胞率明显下降(P<0.05),GADD153阳性细胞平均灰度值和蛋白含量相对值均明显下降(P<0.05)。结论 OIP可通过抑制缺血再灌注后神经细胞凋亡和减少GADD153蛋白的表达发挥脑保护作用。

CHOP/Gadd153在强噪声诱导下豚鼠耳蜗细胞凋亡中的表达和作用

目的:探讨强噪声对豚鼠耳蜗细胞死亡的机制及CHOP/Gadd153在强噪声诱导耳蜗细胞凋亡中的作用。方法:选用健康雄性白色豚鼠32只,将实验组豚鼠暴露在4 kHz窄带噪声120 dB SPL噪声环境中4 h,噪声刺激停止后1,4,14 d组(实验组)及对照组(每组各8只)在处死前测听性脑干反应(ABR)。取每组4只豚鼠耳蜗作石蜡切片,另外4只豚鼠提取耳蜗总蛋白。脱氧核糖核甘酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术(TUNEL)检测耳蜗凋亡细胞,免疫组织化学及Western blot方法检测CHOP/Gadd153、Bcl-2蛋白的表达。结果:实验组耳蜗Corti’s器、血管纹和螺旋神经节细胞(SGC)存在TUNEL阳性细胞,以1 d组最多,而对照组未见阳性细胞。免疫组化、Western Blot检测,实验组CHOP/Gadd153表达明显高于对照组(P<0.01),各实验组CHOP/Gadd153表达没有差异(P>0.05);免疫组织化学观察到实验组CHOP/Gadd153在Corti’s器、螺旋神经节及侧壁有免疫反应阳性,定位于胞核,对照组表达阴性。Western Blot检测实验组Bcl-2蛋白无表达,而对照组Bcl-2的表达明显高于实验组(P<0.01);对照组Corti’s器、螺旋神经节及侧壁的细胞质上有染色程度不等的棕黄色颗粒分布,实验组表达阴性。结论:强噪声可以通过上调CHOP/Gadd153蛋白,进而下调Bcl-2蛋白的表达来诱导豚鼠耳蜗细胞凋亡。

CHOP/GADD153在多囊卵巢综合征患者卵巢黄体颗粒细胞上的表达

目的:探讨内质网应激相关因子CHOP/GADD153在多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢黄体颗粒细胞上的表达。方法:收集因PCOS不孕、行IVF-ET取卵时的黄体颗粒细胞(PCOS组,n=45)及因男方因素不孕、行IVF/ICSI-ET取卵时的黄体颗粒细胞(对照组,n=45),应用RT-PCR和Western blotting方法检测患者卵巢黄体颗粒细胞CHOP/GADD153的表达。结果:PCOS组CHOP/GADD153 mRNA水平(0.45±0.20)及蛋白水平(0.62±0.26)均较对照组(分别为0.40±0.18、0.56±0.17)有增高趋势,但差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:内质网应激标志蛋白CHOP/GADD153在PCOS患者卵巢黄体颗粒细胞上的表达无明显改变,推测PCOS患者卵巢黄体颗粒细胞内质网应激尚处于保护性阶段。

内质网应激相关蛋白CHOP/GADD153在结肠癌组织中的表达及意义

目的:探讨结肠癌组织内质网应激相关蛋白CHOP/GADD153的表达,并分析其与临床病理特征的关系。方法:选择82例结肠癌患者的结肠癌组织与相应的癌旁正常结肠组织(距癌组织>5 cm)制作蜡块后构建组织芯片,分别用免疫组化法及Western blot法检测CHOP/GADD153蛋白的表达,并分析其表达与患者临床病理特征分关系。结果:免疫组化与Western blot结果均显示,结肠癌组织CHOP/GADD153蛋白的表达水平明显癌旁正常结肠组织(P<0.05);与临床病理特征的关系分析显示,结肠癌组织中CHOP/GADD153蛋白的表达水平随结肠癌组织分化程度的降低而增强(P<0.05),而与患者的年龄、性别、肿瘤的大小、肿瘤的浸润深度和淋巴结转移等因素无关(均P>0.05)。结论:结肠癌组织中CHOP/GADD153蛋白的表达增高,并与结肠癌织的分化程度密切相关,提示内质网应激可能参与了肿瘤分化的调控。

内质网应激相关蛋白CHOP/GADD153在胎膜早破中的表达及其意义

目的研究内质网应激相关蛋白CHOP/GADD153在胎膜早破中的表达及其意义。方法选择胎膜早破患者40例(早破组)及相应孕周择期剖宫产孕妇40例(对照组),采用RT-PCR技术和Western blot法检测两组孕妇胎膜组织中CHOP/GADD153的mRNA与蛋白表达。结果早破组胎膜组织中CHOP/GADD153的mRNA[(8.016±0.016)vs.(1.716±0.251)]与蛋白表达水平[(15.210±0.217)vs.(2.710±0.019)]均显著高于对照组(P<0.05)。结论 CHOP/GADD153表达的增高与胎膜早破的发病相关。

褪黑素对大鼠急性脊髓损伤内质网应激蛋白GADD153/CHOP表达的影响

目的探讨褪黑素(MT)对急性脊髓损伤(ASCI)大鼠模型脊髓组织GADD153/CHOP表达的影响。方法选取健康SD大鼠96只,随机分为生理盐水处理组(NS组)、乙醇处理组(ET组)及褪黑素治疗组(MT组)各32只。所有大鼠均以改良Allen法制备脊髓损伤模型;MT组在模型制备的基础上给予褪黑素治疗;ET组在模型制备的基础上给予5%乙醇处理;NS组在模型制备的基础上给予0.9%氯化钠溶液处理。分别于伤后3h、1d、3d、7d时各取8只应用改良Tarlov评分法评价其神经功能;Tarlov评分后处死,取受损节段脊髓行HE染色及免疫组化染色,观察形态学改变和CHOP表达的特点;并应用TUNEL方法检测神经细胞凋亡情况。其量的评定借助于麦克奥迪数码医学图像分析系统A(Motic.med6.0)软件,结果分别用累积光密度(IOD)及细胞凋亡指数(AI)来表示。结果所有实验大鼠脊髓组织均有不同程度出血、水肿、细胞凋亡及坏死。MT组Tarlov评分除3h时间点外,其他各时间点Tarlov评分明显高于ET组及NS组,且差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。MT组与ET、NS组不同时间点CHOP表达、细胞凋亡差异有统计学意义,表现为除3h时间点外,其他各个时间点MT组CHOP表达及细胞凋亡均明显低于其余两组(P<0.05)。而ET、NS组之间各时间点CHOP表达、细胞凋亡比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 MT可抑制CHOP表达,降低脊髓细胞凋亡指数,可能为其发挥急性脊髓损伤保护作用的重要机制之一。

抗肿瘤药物作用的新靶点——CHOP/GADD153凋亡通路

CHOP/GADD153是内质网应激反应特异的转录因子,参与各种细胞活动特别是能量代谢、增殖、分化、凋亡的调节。CHOP在正常情况下表达很低,在内质网应激反应时表达显著升高。CHOP介导的凋亡通路是内质网应激相关凋亡通路中的重要途径。本文综述了CHOP/GADD153介导的细胞凋亡与肿瘤研究的新进展,对于肿瘤的生物治疗具有一定的参考价值。

内质网应激相关蛋白GADD153/CHOP在系膜增生性肾炎肾组织中的表达及中药干预研究

目的:研究系膜增生性肾小球肾炎(Ms PGN)大鼠肾脏组织内质网应激相关蛋白生长停滞及DNA损伤基因153(GADD153)/C-EBP同源蛋白(CHOP)的表达、中药保肾颗粒对GADD153/CHOP表达的干预效果,探讨保肾颗粒治疗系膜增生性肾小球肾炎的作用机制。方法:大鼠随机分为中药组、对照组、模型组、空白组,中药组给予保肾颗粒、对照组给予雷公藤多甙片灌胃、空白组和模型组以等量生理盐水灌胃,连续14周。于造模后给药前1 d及实验结束后,检测各组大鼠血清肌酐(SCr),TUNEL检测大鼠肾脏细胞凋亡情况,实时荧光定量聚合酶链反应(Q-PCR)及Western blot法检测肾组织GADD153/CHOP的表达。结果:与模型组比较,对照组和中药组SCr均显著下降(P<0.05)。空白组肾组织细胞凋亡不明显,模型组有大量的肾组织细胞凋亡,中药组及对照组凋亡较轻。与模型组比较,中药组及对照组GADD153/CHOP及GADD153/CHOPmRNA表达水平下降(P<0.05)。结论:Ms PGN大鼠肾组织GADD153/CHOP表达增高,提示内质网应激可能参与了肾脏损害;而保肾颗粒对Ms PGN大鼠肾组织GADD153/CHOP过度表达有较好的抑制作用,且作用与雷公藤多甙片相当,是减轻肾脏损害的重要机制之一。

大鼠脑缺血再灌注后GRP78和GADD153的表达变化研究

目的观察内质网应激相关因子GRP78和GADD153在大鼠局灶性脑缺血再灌注后的表达,探讨脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的内质网应激机制。方法线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞及再通模型,应用缺口末端标记法检测细胞凋亡;通过RT-PCR、免疫组化和Western-blot方法检测脑缺血再灌注后不同时相缺血周围区GRP78和GADD153的mRNA和蛋白表达。结果模型组GRP78和GADD153表达均高于假手术组,分别于再灌注12h和24h达高峰,GADD153表达与神经细胞凋亡时间趋势一致。结论脑缺血再灌注启动内质网应激反应,前期以GRP78表达上调为主;后期GADD153大量表达,二者表达平衡可能对于神经细胞最后转归具有重要意义。

epoxomicin可诱发前列腺癌细胞内质网应激蛋白GADD153促进细胞凋亡

目的探讨蛋白酶体抑制剂(epoxomicin,EPO)诱导前列腺癌DU145细胞凋亡及其与GADD153/CHOP的关系。方法不同浓度的EPO处理DU145不同时间,MTS检测细胞生长情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率情况;Real-time PCR检测内质网应激的相关分子GADD153、GRP78 mRNA以及Western blot方法检测GADD153、GRP78蛋白表达情况;转染GADD153siRNA从而沉默基因GADD153,通过基因转录水平及蛋白水平检测GADD153证实转染是否成功;转染GADD153后,通过MTS法及流式细胞仪技术检测细胞增殖情况及凋亡情况。结果 EPO抑制DU145细胞生长,并呈现剂量、时间依赖。处理组细胞凋亡率高于未处理组,高剂量组凋亡率高于低剂量组。EPO处理后GADD153,GRP78基因转录水平随时间逐渐升高,72 h最为明显。GADD153、GRP78蛋白在EPO处理后不断增加,均在72 h增加到最高,且低剂量与高剂量组在72 h差异有统计学意义(P<0.05)。转染GADD153siRNA后,GADD153基因转录水平及蛋白表达水平明显降低,其中GADD153siRNA 50 nmol/L最为明显。沉默基因GADD153后,EPO处理DU145细胞,其细胞数目的减少部分被阻断,细胞凋亡部分被阻断。结论蛋白酶体抑制剂epoxomicin能抑制DU145细胞生长,诱导凋亡,其机制可能与激活内质网应激,诱发内质网的相关分子GADD153表达有关。

源水和氯化饮用水中有机提取物对HepG2细胞DNA损伤的诱导作用及对gadd153基因表达的影响

背景与目的研究源水和氯化饮用水有机提取物对DNA的损伤作用以及对gadd153启动子和mRNA表达的影响。材料与方法应用彗星试验检测源水和氯化饮用水有机提取物对HepG2细胞的DNA损伤作用;构建含有gadd153启动子和荧光素酶报告基因的载体pGADD153-Luc,以检测荧光素酶活性(发光检测荧光素酶活性)反映gadd153启动子的活性,RT-PCR检测gadd153基因mRNA的表达。结果彗星试验显示在10、100ml/ml培养基剂量组源水和氯化饮用水有机提取物处理24h后,OTM(Olive尾距)显著高于对照组(P<0.01),并有良好的剂量反应关系(源水r=0.882,P<0.05;氯化饮用水r=0.940,P<0.05);氯化饮用水中有机提取物诱导OTM显著高于源水(P<0.05);荧光素酶表达在源水和氯化饮用水有机提取物各剂量组均显著高于对照组(P<0.01)并有良好的剂量反应关系(源水r=0.814,P<0.05;氯化饮用水r=0.921,P<0.05);相关分析表明荧光素酶活性与OTM呈正相关(源水r=0.980,P<0.01;氯化饮用水r=0.995,P<0.01);RT-PCR结果显示在100ml/ml培养基剂量组,源水和氯化饮用水中有机提取物诱导gadd153mRNA表达显著增加(P<0.05),并与OTM有良好的相关性(源水r=0.864,P<0.05;氯化饮用水r=0.897,P<0.05)。结论源水和氯化饮用水有机提取物可诱导HepG2细胞DNA损伤,导致gadd153启动子区的激活,并进一步调控下游gadd153基因mRNA的表达。

宫内发育迟缓胎儿胎盘三维能量多普勒及GADD153表达的对比研究

目的:探讨宫内发育迟缓(IUGR)胎儿的胎盘三维能量多普勒(3D-PDU)与GADD153表达对比研究的临床意义。方法:选取就诊的胎儿宫内发育迟缓孕妇50例为试验组,正常妊娠孕妇30例为对照组。两组孕妇均行3D-PDU和VOCAL软件三维重建技术检测胎儿胎盘血流参数:血管化指数(VI)、血流指数(FI)和血管化血流指数(VFI),同时观察胎盘一、二、三级绒毛动脉显示率;抽取孕妇血清和分娩后的胎盘组织,采用ELISA和实时荧光定量法,检测两组孕妇血清及胎盘组织中GADD153的蛋白含量和mRNA水平。结果:3D-PDU和免疫学检测可见,与对照组比较,宫内发育迟缓孕妇的VI、FI、VFI均降低,胎盘一、二、三级绒毛动脉显示率低,孕妇血清及胎盘组织中GADD153的蛋白含量和mRNA水平均明显增高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:3D-PDU技术能精确地反映胎盘血流灌注情况,联合孕妇血清中GADD153蛋白含量和mRNA水平的检测,对预判胎盘功能及胎儿宫内发育迟缓具有重要临床意义。

GADD153和Bcl-2在贲门腺癌中的表达及临床意义

目的:探讨GADD153和Bcl-2在贲门腺癌(GCA)中表达的诊断及预后价值。方法:采用免疫组化SP法检测40例GCA及对应的癌旁组织中GADD153和Bcl-2的表达,分析两者表达与GCA临床恶性生物学特性及预后的关系。结果:与贲门癌旁组织相比,GADD153和Bcl-2在GCA组织中的阳性表达率显著下调(P<0.01)。GADD153的表达随GCA临床分期、病理分级的升高及淋巴结的转移而明显下调(P<0.05),而Bcl-2仅与GCA分化程度呈负相关性(P<0.05),与GCA的临床分期及淋巴结转移无关(P>0.05);GAD153和Bcl-2的表达与患者的性别及年龄均无关(P>0.05)。此外,Kaplan-Meier生存分析显示,GADD153的表达下调可作为GCA预后不良的重要指标(P<0.05),而Bcl-2表达阳性和阴性的患者生存率的差异无显著性(P>0.05)。相关性分析发现GADD153和Bcl-2的表达呈正相关(P<0.05)。结论:GADD153和Bcl-2可能参与了GCA的发生、发展过程,有望成为GCA早期诊断及治疗的新靶点;GADD153还可作为GCA预后判断的重要指标。

GRP78和GADD153在Wistar大鼠腭黏膜癌变中的表达及其相关性分析

目的:研究葡萄糖调节蛋白78(Grp78)和生长抑制DNA损伤基因153(GADD153)在Wistar大鼠腭黏膜癌变过程中的表达变化。方法:通过化学诱导法建立大鼠口腔癌模型,采用免疫组化方法检测7例正常黏膜和63例不同癌变发展阶段黏膜细胞中的Grp78和GADD153的表达水平,利用图像分析技术测定阳性细胞的平均光密度值(A值),并对2种指标做相关性分析。结果:Grp78的平均A值随着组织病理学分级增加而逐渐增高,不同程度异常增生组、癌变组与正常黏膜组相比差异有统计学意义(P<0.01)。GADD153的平均A值随着异常增生程度的加重和癌变逐渐降低(P<0.01)。Spearman相关分析显示Grp78与GADD153的表达呈负相关(P﹤0.05)。结论:Grp78和GADD153参与口腔癌的发生发展,联合检测Grp78与GADD153蛋白的表达有利于口腔癌的早期诊断和基因治疗。

阿托伐他汀干预对大鼠心肌缺血再灌注后GRP78和GADD153表达的影响

目的观察阿托伐他汀干预对大鼠心肌缺血再灌注损伤后内质网分子伴侣GRP78（endoplasmic reticulummolecular chaperon）和GADD153（growth arrest and DNA damage-inducible gene 153）表达变化的影响,探讨阿托伐他汀在心肌缺血再灌注损伤后抗凋亡的内质网应激机制。方法将54只SD大鼠随机分为阿托伐他汀干预组24只、模型对照组24只和假手术组6只,制作大鼠心肌再灌注损伤模型。阿托伐他汀干预组和模型对照组再灌注2 h6、h、24 h、48 h分别分为4个亚组,每个亚组动物6只。通过TUNEL检测心肌细胞凋亡,免疫组织化学检测GRP78和GADD153表达变化。结果假手术组大鼠偶可见凋亡细胞,对照组和干预组大鼠缺血再灌注2 h缺血周围区可见少量凋亡细胞,再灌注6 h凋亡细胞有所增多,再灌注24 h凋亡细胞数量达高峰,再灌注48 h凋亡细胞有所减少（P〈0.05或0.01）。相同各时间点比较,干预组大鼠心肌细胞凋亡显著少于对照组（P〈0.05或0.01）。假手术组大鼠心尖部相应区域心肌细胞未见明显GRP78及GADD153阳性表达。对照组和干预组大鼠再灌注2 h后心尖部GRP78表达开始增加,6 h达高峰,24 h时表达水平明显下降（P〈0.01）。在相应时间点,干预组的GRP78蛋白表达水平显著高于对照组（P〈0.01）。对照组和干预组大鼠缺血周围区GADD153从再灌注6 h开始在神经细胞内明显表达,并逐渐增强,于再灌注24~48 h达高峰（P〈0.01）。在相应时间点,干预组的GADD153蛋白表达水平显著低于对照组（P〈0.01）。结论干预心肌缺血再灌注后心肌细胞内质网伴侣GRP78和GADD153的表达可能是阿托伐他汀抑制心肌缺血再灌注损伤后抗凋亡的内质网应激机制之一。

脑出血大鼠血肿周围脑组织GRP78及GADD153动态表达及神经功能缺损

目的研究脑出血大鼠血肿周围脑组织GRP78及GADD153动态表达及神经功能缺损情况。方法 50只SD大鼠被随机分为2组,A组右侧苍白球注入自体非肝素抗凝动脉血制成脑出血模型,B组进行同样的手术,但是定位进针后不注射自体不凝血,造模成功后,两组在术后24h、48h、72h、5d、7d通过Garcia评分法评估大鼠神经功能缺损,然后处死大鼠,用Western blot测定各时间点血肿周围GRP78和GADD153表达情况。结果 1脑出血后出现神经功能缺损,48h症状达高峰,随后逐渐恢复,第7天基本恢复正常,与假手术组相比无统计学差异(P>0.05)。2脑出血后GRP78和GADD153表达增加,呈现先升高后降低的趋势,72小时达高峰,组间各时间点比较具有统计学差异(P<0.05)。结论 GRP78与GADD153在血肿周围脑组织中表达活跃,推测内质网应激可能通过介导细胞凋亡参与并加重了脑出血后神经损伤的病理生理过程。

老年小鼠脾细胞DNA修复能力的变化及gadd45和gadd153基因的可诱导性改变

目的：研究小鼠脾细胞ＤＮＡ修复能力的增龄变化以及这种变化的发生与损伤可诱导的ｇａｄｄ４５、ｇａｄｄ１５３基因表达的关联。方法：以紫外线损伤脾细胞ＤＮＡ，用非程序ＤＮＡ合成和单细胞凝胶电泳试验测定ＤＮＡ修复能力；用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交方法检测紫外线损伤后ｇａｄｄ４５、ｇａｄｄ１５３基因转录水平的变化。结果：老年小鼠脾细胞ＤＮＡ修复能力低于青年鼠，老年鼠ｇａｄｄ４５和ｇａｄｄ１５３基因的紫外线损伤的可诱导性也低于青年鼠。结论：小鼠脾细胞ＤＮＡ修复能力随增龄而下降，这种变化的发生可能与老年小鼠脾细胞在紫外线损伤后ｇａｄｄ４５、ｇａｄｄ１５３ｍＲＮＡ表达的可诱导性下降有关。

gadd153基因对卵巢癌细胞生长抑制作用的研究

目的 研究生长抑制ＤＮＡ损伤基因（ｇｒｏｗ ｔｈ ａｒｒｅｓｔ ａｎｄ ＤＮＡ ｄａｍ ａｇｅ， ｇａｄｄ）对卵巢癌细胞生长抑制和凋亡的作用。 方法 ＲＴ－ＰＣＲ鉴定卵巢癌ＳＫＯＶ３ 和３ＡＯ细胞株ｇａｄｄ１５３ 基因表达。通过目的基因的克隆、载体构建技术，将目的基因ｇａｄｄ１５３ 重组于ｐｌＸＳＮ－ｎｅｏ 逆转录病毒表达载体；构建的ｐＬＸＳＮ－ｇａｄｄ１５３载体采用脂质体（ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ）（ＤＯＴＡＰ）的方法，分别转染ＳＫＯＶ３ 和３ＡＯ细胞株；经Ｇ４１８ 抗性筛选；ＲＴ－ＰＣＲ表达鉴定；足叶乙甙（ＶＰ１６）诱导，采用流式细胞仪分析（ＦＣＭ）的方法检测转染前后肿瘤细胞的生长抑制和凋亡。 结果 ＳＫＯＶ３－ｇａｄｄ１５３ 细胞生长抑制在Ｇ１／Ｇ０ 期，部分细胞进入凋亡的状态；３ＡＯ－ｇａｄｄ１５３ 细胞生长抑制，未引起凋亡。 结论 转染ｇａｄｄ１５３ 基因的肿瘤细胞系，诱导表达后可诱发肿瘤细胞生长抑制在Ｇ１／Ｇ０期，并有细胞进入凋亡状态。证实ｇａｄｄ１５３ 基因参与了细胞生长抑制和凋亡过程。