苗药花蝴蝶回调CIA模型大鼠脂肪细胞变化的研究

目的探讨苗药花蝴蝶回调牛二型胶原蛋白诱导关节炎(CIA)模型鼠脂肪细胞变化的相关指标及其机制。方法将40只雄性SD大鼠随机分为正常组(8只)及建模组(32只),建模组大鼠建模成功后分为CIA模型组、氨甲蝶呤组及花蝴蝶高剂量组、低剂量组,各8只,根据相关文献资料结合民间用药经验分别灌胃给药(正常组:生理盐水;氨甲蝶呤组:1.04 mg/kg氨甲蝶呤,每周2次;花蝴蝶高、低组:每天7.6、3.8 mg/kg花蝴蝶药液),35 d后停止。观察各组大鼠足肿胀情况,检测血液甘油三酯(TG)、类风湿因子(RF)、免疫球蛋白A(IgA)、IgG、IgM等指标,采用酶联免疫吸附测定法检测脂联素(ADPN)、白细胞介素-10(IL-10)等细胞因子,研究足关节病理切片等。采用SPSS25.0软件对实验数据进行统计学处理。结果CIA模型组大鼠关节肿胀指数评分及RF、IgM水平均明显高于其他组,IgG水平低于花蝴蝶低组而高于其他组,差异均有统计学意义(P<0.05),TG、ADPN、IL-10水平明显低于其他组,差异均有统计学意义(P<0.05)。CIA模型组大鼠足关节骨髓腔内现低度脂肪细胞,而白细胞弥漫性增生,与其他组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论苗药花蝴蝶可能通过回调CIA模型鼠脂肪细胞的减少,保证了正常的能量代谢(如TG等)和免疫调节因子分泌(如ADPN、IL-10等),促进了免疫调节作用(如回调了RF、IgG、IgM等),缓解了足关节炎症等。

三痹颗粒对CIA模型大鼠血清CXCR3、CXCR4mRNA的影响

观察三痹颗粒对Ⅱ型胶原诱发类风湿关节炎(CIA)模型大鼠病变关节细胞趋化因子受体的影响,探讨其抗炎作用机制。方法:将CIA模型大鼠随机分为模型组、三痹颗粒高剂量组、三痹颗粒中剂量组、三痹颗粒低剂量组、另取空白组。三痹颗粒高、中、低剂量组于初次免疫第15天分别给予三痹颗粒蒸馏水溶液灌胃,模型组和空白对照组灌服同体积的生理盐水,连续灌服20天,观察大鼠足踝关节肿胀度以及关节炎指数的变化,RT-PCR法测定大鼠外周血趋化因子受体3(CXCR3)、趋化因子受体4(CXCR4)mRNA含量。结果:第21天,与空白组比较,模型组及三痹颗粒各组足容积明显增大,差异有统计学意义(P<0.05);第35天时,与模型组比较,三痹颗粒高、中剂量组足容积的上升程度减慢,进一步减轻关节炎症反应程度,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,中药各剂量组大鼠关节炎评分指数明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,三痹颗粒各组大鼠外周血CXCR3mRNA、CXCR4mRNA的表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:三痹颗粒能够抑制CIA模型大鼠外周血CXCR3、CXCR4的表达,从而减慢CIA模型大鼠足容积的上升程度,降低关节炎指数,抑制炎症反应。

加味犀角地黄汤对大鼠CIA急性关节肿胀与滑膜组织中VEGF表达的影响

目的通过测定大鼠关节滑膜组织中血管内皮生长因子(VEGF)在大鼠胶原诱导性关节炎(CIA)模型形成及应用加味犀角地黄汤(XDD)治疗过程中的表达水平,探讨加味XDD对类风湿关节炎(RA)的治疗作用。方法用SD大鼠制作Ⅱ型胶原蛋白诱导的CIA大鼠模型,实时荧光定量PCR法检测正常组、模型组和实验组大鼠在第42d关节滑膜组织中VEGF的表达情况。结果模型组大鼠关节滑膜组织中VEGF的表达明显高于正常组,加味XDD治疗组VEGF的表达低于模型组。结论加味XDD可降低大鼠关节滑膜组织中VEGF的表达,可能会对RA急性期有一定的治疗作用。

健脾活血补肾汤对CIA大鼠血清IL-17及OPG/RANKL表达的影响

目的通过观察健脾活血补肾汤对关节炎(collagen induced arthritis,CIA)模型大鼠血清中炎性细胞因子白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)、骨保护蛋白(osteoprotegerin,OPG)及核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)表达水平的影响,探索健脾活血补肾汤保护强直性脊柱炎关节骨质破坏潜在的分子药理机制。方法利用弗氏完全佐剂和牛Ⅱ型胶原建立大鼠关节炎(CIA)模型,自造模成功后第3天起分别按健脾活血补肾汤高、中、低剂量给药组及生理盐水给予大鼠灌胃处理,每天1次,连续灌胃30d,处死大鼠,心脏采血取血清,用ELISA夹心法检测大鼠血清中IL-17、OPG及RANKL表达水平。结果健脾活血补肾汤高、中、低各剂量组CIA大鼠血清IL-17及RANKL水平均较模型组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);而OPG水平较模型组显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论健脾活血补肾汤可能通过降低CIA模型大鼠血清中IL-17及RANKL表达水平,升高OPG表达水平,而起到延缓关节炎性损伤所致的骨质破坏的作用。

黑龙骨茎叶抗类风湿性关节炎作用研究

目的:研究苗药黑龙骨茎叶对胶原诱导性关节炎(Collagen-induced Arthritis,CIA)模型大鼠类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)作用,探究黑龙骨茎叶抗RA作用的潜在开发利用度。方法:SD大鼠随机选取8只作为正常组,其余大鼠建立CIA模型。造模成功后随机分为模型组,黑龙骨茎叶高剂量组(100 mg·kg^(-1))、低剂量组(25 mg·kg^(-1)),雷公藤多苷(TG)组(10 mg·kg^(-1)),每组8只。在试验因素干预后,对各组大鼠AI评分、足趾厚度及病理形态变化进行分析比较。结果:给药前后,正常组与模型组比较有极显著差异(P<0.01),说明造模成功。给药后,大鼠左、右足趾厚度测量值显示,模型组与黑龙骨茎叶高、低剂量组相比均有显著性差异(P<0.05);AI评分显示,黑龙骨茎叶高、低剂量组与模型组相比,存在显著差异,组内比较中,黑龙骨茎叶低剂量组的消肿效果优于高剂量组(P<0.05)。病理切片结果显示,与正常组相比,模型组大鼠滑膜组织内见大量、弥漫性炎性细胞浸润;与模型组相比,黑龙骨茎叶低剂量组大鼠滑膜组织内炎性细胞浸润减少。结论:黑龙骨茎叶表现出了良好的抗RA效果,具有潜在的抗RA开发利用价值。

乌骨藤对胶原诱导性关节炎大鼠IL-33/ST2信号通路的影响

目的探讨乌骨藤对胶原诱导性关节炎(CIA)模型大鼠白细胞介素-33(IL-33)/生长刺激表达基因2蛋白(ST2)信号通路的影响。方法60只雌性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、来氟米特和乌骨藤低、中、高剂量组,后5组建立CIA大鼠模型;建模成功后,除空白组和模型组外,其余各组均予相应药物剂量灌胃4周,观察各组大鼠关节炎指数(AI);采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-17A(IL-17A)、白细胞介素-33(IL-33)及γ干扰素(INF-γ)的水平;通过荧光定量PCR检测膝关节滑膜组织中促生长表达基因2(sST2)、跨膜型ST2(ST2L)、IL-33的mRNA表达;用蛋白质印迹(Western blot)检测大鼠滑膜组织中sST2、ST2L、IL-33蛋白表达。结果CIA大鼠成功建模,与模型组比较,来氟米特组、乌骨藤各剂量组大鼠血清中IL-17A、IL-33及INF-γ表达降低、L-4表达升高,膝关节滑膜组织sST2、ST2L、IL-33mRNA及蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,从治疗第3周开始,各给药组AI均有不同程度下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论乌骨藤可能通过调控IL-33/ST2信号相关蛋白和细胞因子的表达而发挥对CIA大鼠抗炎作用。

滑膜血管新生在类风湿关节炎早期诊断及治疗中的应用

目的:血管新生是形成和维持血管翳的重要因素。本研究探讨了滑膜血管新生在类风湿关节炎早期诊断及治疗中的应用。方法:构建胶原诱导的关节炎大鼠模型,检测类风湿关节炎疾病发展过程中滑膜血管新生及血管翳的变化。通过压力型小动脉测量仪观察血管管径-压力变化关系、血管管径-血管收缩剂浓度变化关系,以了解血管肌源性紧张度以及动脉收缩反应性间的关系。结果:在胶原诱导的大鼠膝关节中滑膜血管增生明显,关节结构被破坏。结论:滑膜血管新生可作为类风湿关节炎早期诊断的病理指征,并可能发展为一种新型的类风湿关节炎的治疗手段。

雷公藤多苷片和雷公藤片对CIA模型大鼠干预的量毒效比较研究

从量-效-毒角度观察并比较雷公藤多苷片和雷公藤片口服后对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠的干预作用。将SD大鼠随机分为8组:正常组,模型组,雷公藤多苷片给药组(1倍等效剂量0.009 g?kg^-1,4倍等效剂量0.036 g?kg^-1,16倍等效剂量0.144 g?kg^-1)和雷公藤片给药组(1倍等效剂量0.007 5 mg?kg^-1,4倍等效剂量0.030 mg?kg^-1,16倍等效剂量0.120 mg?kg^-1)。首次免疫后当天开始灌胃给药,每天1次。二次免疫后观察大鼠关节红肿和畸形症状,评价关节炎临床积分,分别在第21,42天取材并进行相关观察:HE和Masson染色法检查关节组织病理学变化;ELISA法检测血清中抗Ⅱ型胶原抗体IgG的表达量;常规检测血液成分;血清酶学方法检测血清中碱性磷酸酶(ALP)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷氨酰转移酶(GGT)、总胆红素(TBiL)、肌酐(CRE)和尿素(UREA)含量;光镜评估附睾中精子畸形率,HE染色法分析睾丸及卵巢组织的损伤程度。结果显示,雷公藤多苷片和雷公藤片高、中、低剂量均能不同程度改善CIA模型大鼠炎症关节的红、肿和畸形症状,降低临床积分,抑制关节滑膜炎症、血管翳、软骨侵蚀和骨破坏的病理变化,降低血清IgG含量,且有一定的剂量依赖关系,其中同倍剂量组相比,4倍雷公藤多苷片的效果明显优于雷公藤片(P<0.05),16倍更显著(P<0.01)。雷公藤多苷片和雷公藤片高剂量能明显升高CIA大鼠肝和脾脏的脏器系数(P<0.01)并降低RBC和HGB,严重者可致死亡,其中雷公藤多苷片比雷公藤片作用更显著(P<0.01);2种制剂高、中、低剂量给药均未见大鼠胃黏膜损伤以及肝肾形态学变化,但4倍和16倍能明显升高血清ALT和GGT并降低CRE水平(P<0.05或P<0.01);2种制剂均可不同程度造成CIA雄性大鼠精子畸形率并损伤睾丸曲细精管,其严重度随剂量和时间增加而增加,其中16倍雷公藤多苷片比同倍量雷公藤片作用更显著。雷公藤多苷片和雷公藤片口服均能有效延缓CIA大鼠发病并降低疾病严重度,但同时也能造成雄性生殖损伤,高剂量尚影响造血功能,极高剂量可致死,2种制剂均具有量-效-毒依赖关系,其中,雷公藤多苷片抗类风湿关节炎药效更好,高剂量毒性反应也更明显。相关结论为雷公藤制剂的临床合理用药提供实验参考,也有待进一步的临床研究去证实。

日龄对Ⅱ型胶原诱导的大鼠关节炎模型成功率的影响

为了研究大鼠日龄对Ⅱ型胶原诱导性关节炎模型(CIA模型)成功率的影响,试验利用鸡Ⅱ型胶原与弗氏完全佐剂制成的乳剂,皮内免疫不同日龄Wistar大鼠,建立类风湿关节炎的大鼠模型,2周后开始测量四肢的足趾部厚度,每周测量1次,根据肿胀程度进行评分。结果表明:31日龄大鼠CIA造模成功率为50%,37日龄大鼠CIA造模成功率为58%,42日龄大鼠CIA造模成功率为92%,49日龄大鼠CIA造模成功率为83%。说明日龄对CIA模型的构建起到关键作用。

基于TLR4/MAPKs/NF-κB炎症信号通路探讨三痹颗粒对Ⅱ型胶原性关节炎大鼠的治疗作用及机制研究

目的探讨三痹颗粒对Ⅱ型胶原性关节炎大鼠的治疗作用以及对TLR4/MAPKs/NF-κB信号通路的影响。方法将60只Wistar大鼠随机分为空白对照组(CTL)、模型组、阳性对照组(地塞米松片,DXM)和受试药物低、中、高剂量组,每组各10只。建立胶原性关节炎(CIA)大鼠模型,各组于初次免疫2周后开始灌胃。连续灌服20 d,至免疫后35 d处死大鼠,观察大鼠状态、足肿胀度、关节炎指数(AI)、踝关节病变观察。采用ELISA法检测白介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。采用qRT-PCR法和Western blot法检测Toll样受体4(TLR4)、核转录因子-κB(NF-κB)(p65)、p-NF-κB(p65)、p38、p-p38、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、p-ERK1/2、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p-JNK mRNA和蛋白的表达水平。结果实验结束时,DXM组、受试药物高、中、低剂量组大鼠足踝关节肿胀程度和AI值均低于模型组(P<0.05)。经H&E染色和肉眼观察,受试药物可明显减轻足水肿以及滑膜组织病理学变化。DXM组和受试药物低、中、高剂量组大鼠外周血IL-1β、IL-6、TNF-α水平均明显低于模型组大鼠(P<0.05);而受试药物高剂量组大鼠外周血IL-1β、IL-6、TNF-α水平与DXM组大鼠比较未见统计学差异(P>0.05)。另外,模型组大鼠足踝关节滑膜组织TLR4、p-NF-κB(p65)、p-p38、p-ERK1/2、p-JNK mRNA和蛋白表达量明显高于CTL组(P<0.05);而且DXM组以及受试药物低、中、高剂量组较模型组明显降低(P<0.05);尤其以DXM组和受试药物高剂量组降低最为明显,与CTL组比较,无统计学差异(P>0.05)。结论三痹颗粒可能通过负性调控TLR4/MAPKs/NF-κB信号通路保护胶原性关节炎大鼠模型足踝关节炎症损伤。