CIAPIN1基因RNA干扰载体的构建及其对乳腺癌细胞耐药性的影响

目的:构建针对CIAPIN1基因的慢病毒siRNA表达载体并稳定转染人乳腺癌多柔比星耐药细胞MCF-7/ADM,观察该基因对乳腺癌细胞耐药性的影响。方法:设计合成针对CIAPIN1的siRNA重组质粒表达载体,并筛选出最有效的干扰序列,使用病毒包装系统进行慢病毒颗粒的包装和生产,获取ADM-CIAPIN1 RNAi稳定表达细胞株;MTT法检测CIAPIN1基因干扰前后细胞对于不同化疗药物IC50值的变化。结果:测序验证针对CIAPIN1的siRNA重组质粒构建成功,并筛选CIAP-IN1-siRNA1为最佳干扰序列;以慢病毒为载体将干扰表达质粒稳定转染入乳腺癌细胞MCF-7/ADM后,抑制CIAPIN1表达水平超过88%。RNA干扰后紫杉醇、多柔比星及吉西他滨3种抗肿瘤药物对于MCF-7/ADM细胞的IC50值均显著下降[(7.12±0.31)、(11.21±1.79)、(49.72±4.52)vs(1.13±0.06)、(4.51±0.20)、(18.30±1.27)μg/ml,P<0.01],说明该细胞的耐药性明显减弱。结论:针对CIAPIN1基因的慢病毒siRNA表达载体可以有效抑制MCF-7/ADM细胞中该基因的表达,CIAPIN1基因表达下调可使乳腺癌细胞的多药耐药性发生逆转。

CIAPIN1和Fibulin-3在膀胱尿路上皮癌中的表达及其临床意义

目的探讨细胞因子诱导的凋亡抑制因子1(CIAPIN1)基因和Fibulin-3在膀胱尿路上皮癌中的表达及其与临床病理特征之间的关系。方法收集膀胱癌及同一患者的癌旁标本98例,以癌旁组织作为对照,分别用实时定量PCR(qRT-PCR)检测组织样本中CIAPIN1和Fibulin-3基因的mRNA变化,利用Western blot检测组织样本中CIAPIN1和Fibulin-3蛋白表达情况;分析两者在膀胱癌临床病理表达特征之间的关系及两个基因的相关性。结果CIAPIN1和Fibulin-3的mRNA水平在膀胱癌组织中的表达显著高于癌旁组织(P<0.01),CIAPIN1在膀胱癌组织和癌旁组中的表达分别为4.223±0.986和2.054±0.866(P<0.05);而Fibulin-3在膀胱癌组织和癌旁组中的表达率分别为5.284±1.586和1.981±0.937(P<0.05);Western blot结果显示,与癌旁组织相比,CIAPIN1和Fibulin-3的蛋白水平在膀胱癌组织中的表达显著上调(P<0.05)。CIAPIN1和Fibulin-3基因在膀胱癌中的表达与病理分级、临床分期和淋巴转移相关(P<0.05),两者均与患者年龄和性别无关(P>0.05)。膀胱癌组织中CIAPIN1和Fibulin-3的mRNA表达呈正相关(r=0.2577,P<0.05)。结论CIAPIN1和Fibulin-3在膀胱癌中的表达均显著上调,联合检测可能增加膀胱癌诊断的准确率。

CIAPIN1基因在白血病患者骨髓单个核细胞中表达的研究

本研究旨在检测CIAPIN1基因在白血病患者中的表达,探讨其在白血病中的作用。收集112例初治白血病患者的新鲜骨髓,用TRIzoL一步法提取细胞总RNA、合成cDNA、以β-actin为内参,应用实时定量PCR方法检测CIAPIN1mRNA的表达;实验中选择10例正常人的骨髓作为对照。结果表明:骨髓单个核细胞(MNC)中CIAPIN1mRNA在急性髓系白血病(AML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)和慢性髓系白血病(CML)患者中的表达均高于正常人(p<0.05);在慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者中的表达与正常人相比差异无统计学意义(p>0.05)。结论 :CIAPIN1基因在初治白血病患者MNC中表达升高,其表达上调在白血病的发病中可能有一定的作用。

CIAPIN1基因对K562细胞增殖能力的影响

本研究旨在探讨CIAPIN1基因对慢性髓系白血病(CML)细胞系K562细胞增殖能力的影响。针对CIAPIN1基因构建shRNA真核表达载体并稳定转染K562细胞,用real-time PCR和Western blot技术验证干扰效率,采用MTT法检测K562细胞的增殖活性的改变,利用甲基纤维素集落形成实验观察K562细胞集落形成大小和数量的变化,通过体内实验观察K562细胞在小鼠体内的成瘤能力。结果表明,与对照组相比,K562细胞的CIAPIN1基因表达被有效抑制;干扰CIAPIN1基因后K562细胞的增殖活性明显下降,集落形成数量减少和集落大小显著减小,小鼠体内成瘤能力明显降低。结论:干扰CIAPIN1基因表达能抑制K562细胞在体内及体外的增殖能力。

shRNA干扰CIAPIN1基因表达促进K562细胞粒系分化

目的探讨靶向干扰CIAPIN1基因表达对慢性粒细胞白血病(CML)细胞系K562粒系分化的影响。方法针对CIAPIN1基因设计并构建短发卡RNA(shRNA)真核表达载体,转染K562细胞并作为干扰组,以无关序列shRNA处理的K562细胞作为对照组。采用Real-time PCR及Western blot技术鉴定干扰效率;采用瑞氏染色和电镜分别观测K562细胞形态学和超微结构的改变;采用Real-time PCR方法检测粒系分化标志基因中性粒细胞胞浆因子1(NCF1)、血清黏蛋白1(ORM1)以及粒系分化转录因子CCAAT/增强子结合蛋白(C/EBPα)、低氧诱导因子1α(HIF1α)mRNA水平的改变;流式细胞术检测K562细胞表面分化抗原CD11b表达的改变;Western blot技术检测ERK1/2、JNK、p38MAPK及Akt磷酸化水平的改变。结果与对照组相比,干扰组的CIAPIN1基因表达被有效抑制(P<0.05);K562细胞的形态和超微结构趋向成熟粒细胞阶段;NCF1、ORM1、C/EBPα及HIF1αmRNA表达水平升高(P<0.05);CD11b表达升高(P<0.01);ERK1/2磷酸化水平升高(P<0.05),而JNK、p38MAPK及Akt磷酸化水平未见明显改变。结论抑制CIAPIN1基因表达能促进K562细胞向成熟的粒细胞阶段分化,ERK1/2磷酸化水平的升高可能参与了该分化过程。

细胞因子介导的凋亡抑制因子1基因研究进展

细胞因子介导的凋亡抑制因子1（CIAPIN1）初步被证实在正常组织中可能发挥重要作用，并与肿瘤的发生、发展、预后、多药耐药有着密切的关系。针对CIAPIN1的靶向治疗可能为治疗恶性肿瘤提供新的思路。