不同剂量瑞舒伐他汀治疗急性缺血性脑卒中患者的临床疗效及对血hs—CRP sCD40L PAF水平的影响

目的对比不同剂量瑞舒伐他汀治疗急性缺血性脑卒中的临床疗效及安全性。方法选择我院50例急性缺血性脑卒中患者，随机分为A、B两组，A组30例，B组20例，在常规治疗的基础上，分别给予瑞舒伐他汀钙片10、20mg，疗程均为2周。对照组为20例健康体检者，不予干预。评价受试患者神经功能缺损程度（用NIHSS评分表示），并检测血超敏C反应蛋白（hs—CRP）、人可溶性CD40配体（sCD40L）、血小板活化因子（PAF）的水平。结果瑞舒伐他汀钙片治疗2周后，A、B两组TC、TG、LDL、hs—CRP、sCD40L、PAF水平及NIHSS评分均较用药前显著降低，HDL水平较用药前显著升高，两组比较差异有统计学意义。结论10、20mg瑞舒伐他汀治疗急性缺血性脑卒中都是安全的，20mg瑞舒伐他汀治疗效果更好。

CD40-CD40L与肿瘤

CD40和其配体CD40L（又称CDl54）是体内特异性免疫反应系统重要的一对共刺激分子，分别属于TNF受体和TNF超家族成员。CIM0／CD40L参与细胞免疫及体液免疫，在炎症反应，自身免疫性疾病，心血管疾病中起重要作用。不仅如此，CD40还表达于多种肿瘤细胞表面，可利用CD40L与其结合用于肿瘤治疗。我们就CD40-CD40L在肿瘤中的应用进行了综述。

CD40L^+肺癌细胞抗原负载DC诱导同源肺癌免疫

目的:探讨CD40L^+肺癌细胞抗原负载由人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)诱导的DC对同源肺癌的免疫增强作用及其机制。方法:常规方法从正常成人外周血中分离PBMC、诱导分化成DC,以重组载体p DNA3.1-CD40L^+转染A549肺癌细胞,制备已转染肺癌细胞抗原对DC进行负载刺激,通过流式细胞术检测DC的CD83、CD86及HLA-DR分子表达,ELISA法检测DC的IL-12分泌水平,再以MTT法检测DC对同源T淋巴细胞增殖状态以及A549肺癌细胞增殖影响,并与空载转染的A549细胞抗原诱导DC的相同功能进行对比。结果:将PBMC成功诱导分化出成熟的DC。重组CD40L诱导组DC的CD83、CD86及HLA-DR分子表达水平明显高于空载组[(4.78±1.5)%vs(3.38±1.5)%、(9.79±5.27)%vs(5.53±2.17)%和(11.84±8.31)%vs(5.37±5.48)%,均P<0.05];IL-12分泌水平也高于空载组和未转染组(P<0.05)。CD40L^+DC可促进T淋巴细胞的增殖(P<0.05),并导致同源T细胞对肺癌A549细胞增殖的抑制作用强于对照组、未转染组和空载组(P<0.05)。结论:CD40L转染肺癌细胞抗原诱导成熟的DC可以增强同源肺癌细胞的特异免疫能力。

梅毒血清固定患者外周血单一核细胞CD40和CD40L的表达

近年来梅毒患者血清固定（sero-resistance）发病率显著增高，梅毒血清固定的确切原因目前尚不清楚，认为与机体细胞免疫功能受抑制有关。本研究对梅毒血清固定患者外周血单一核细胞（PBMC）中CIM0和CD40L的表达进行检测，探讨CD40和CD40L与梅毒血清固定的关系。

急性心肌梗死患者血清炎性因子水平及二级预防状况的随访观察

目的观察急性ST段抬高心肌梗死(ST segment elevation myocardial infarction,STEMI)患者血清炎性因子水平3年的动态变化及二级预防的情况。方法选择初次发病且发病6 h内就诊的急性STEMI患者84例,其中男性70例,女性14例,平均年龄59岁。随访3年,记录患者临床资料,采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定血清白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、可溶性白细胞分化抗原40配体(CD40 ligand,sCD40L)、基质金属蛋白酶-9(metalloproteinase-9,MMP-9)以及基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)的水平。结果在心肌梗死3年随访期与急性期比较,IL-6、sCD40L水平显著降低(P均<0.001),MMP-9水平轻度降低,TIMP-1水平升高(P=0.001),MMP-9/TIMP-1比值降低(P<0.001)。3年随访时,STEMI患者应用血管紧张素转换酶抑制剂或血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂、β受体阻滞剂及他汀类药物的比例较住院期间显著降低,分别为54.8%、73.8%及57.1%,血压、低密度脂蛋白胆固醇及体质量指数达标率较低,分别为39.9%、27.4%及45.2%。结论 IL-6、sCD40L、MMP-9水平升高以及MMP-9/TIMP-1平衡失调与STEMI急性期斑块不稳定乃至破裂有关;心肌梗死患者出院后二级预防水平下降,应强化随访,积极规范进行降压、调脂等治疗。

AG490对大鼠脑损伤后CD40和CD45表达及神经功能的影响

目的探讨AG490对大鼠创伤性脑损伤后脑组织CD40、CD45表达以及神经功能状态的影响。方法取健康雄性SD大鼠180只,随机分为假手术组、创伤组和AG490干预组,每组大鼠60只;各组根据脑损伤时间再分为6、12、24及72h亚组(各15只)。应用液压冲击法制备大鼠脑损伤模型,采用流式细胞术检测脑组织CD40、CD45的表达,采用大鼠神经功能缺损评分系统对神经功能状态进行评估。结果①创伤组伤后各时间点神经功能缺损评分均高于假手术组(P<0.05或P<0.01),其中6 h为高峰期,后呈现逐渐下降趋势。AG490干预组大鼠神经功能缺损评分均较创伤组低,24和72 h时间点差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。②创伤组脑组织CD40表达水平逐渐升高,24 h达高峰,然后开始降低;CD45表达持续增高,72 h最高。与假手术组比较,各时间点CD40、CD45表达差异均有统计学意义(P<0.01)。AG490干预组各时间点CD40、CD45表达水平均低于创伤组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论创伤性脑损伤后,AG490可能通过降低脑组织CD40、CD45的表达促进神经功能的恢复。

Tfh通过CD40／CD40L轴在介导儿童过敏性紫癜发病中的作用与机制初探

目的探讨滤泡辅助性T细胞（Tfh）通过CD40/CD40L轴参与过敏性紫癜（HSP）及紫癜性肾炎（HSPN）发生发展的免疫学机制。方法选取急性期初发HSP患儿和健康体检儿童共55例，HSP患儿根据肾脏累及情况分3组：无肾脏累及组22例（A组）、纯血尿组11例（B组）、血尿合并蛋白尿组11例（C组）；另设正常对照组11例。用流式细胞术检测外周血CD19＋B细胞及亚类比例，分泌不同Ig的CD19＋B、CD19＋CD38＋B细胞比例，及CD19＋B细胞及亚类上CD40和Tfh上CD40L表达水平。结果与对照组相比，C组中CD19＋CD86＋B、CD19＋CD138＋B细胞、CD40L＋Tfh比例增加，差异有统计学意义（P〈0.05），A、B组中上述指标有增加趋势，但差异无统计学意义（P〉0.05）。与对照组相比，A、B、C组中CD19＋B、CD19＋CD27＋B细胞、表达CD40的CD19＋B细胞及其亚类、分泌IgG和IgM及IgD的CD19＋B、CD19＋CD38＋B细胞比例差异无统计学意义（P〉0.05），而A、B、C组中分泌IgA和IgE的CD19＋B、CD19＋CD38＋B细胞比例增加，差异有统计学意义（P〈0.05）。分泌IgA的CD19＋B、CD19＋CD38＋B细胞与CD40L＋Tfh呈显著正相关（P〈0.05）。结论Tfh介导CD40/CD40L信号通路异常可能是影响HSP发生及HSPN肾脏损害严重程度的免疫学机制。

CD40-CD40L相互作用在诱导树突状细胞成熟中的作用

树突状细胞（dendritic cells，DCs）的功能与其成熟与否密切相关。成熟DCs表现为表面MHCⅡ分子水平升高、共刺激分子的表达上调以及促炎性因子产生增加。CD40和CD40L（CD40 ligand）均表达于各种免疫细胞表面，二者相互作用可参与T细胞活化、B细胞增殖分化及抗体的转换等过程，此外，还可以激活多种信号通路诱导DCs的成熟从而参与免疫应答，在固有免疫和适应性免疫的发生发展中发挥重要作用。

CD40不同形式的活化对CD40突变的RPMI48226细胞增殖和表型的影响

目的分析CIM0抗体或配体不同形式刺激对RPMI8226细胞增殖及表面共刺激分子和黏附分子表达的影响，探讨RPMI8226细胞CIM0基因突变在其生物学行为中的作用。方法用RT—PCR方法和DNA序列测定检测RPMI8226细胞CIM0基因突变体，分析RPMI8226细胞经CIM0抗体或配体四种不同方式（CD40单抗、CD40单抗包板、rhsCD40L和CIMOL转基因细胞）刺激后，其体外生长曲线、细胞表型及细胞周期的变化，并利用激光共聚焦显微镜对RPMI8226细胞表面CIM0信号转导体的形成进行初步分析。结果RPMI8226细胞表达CIM0突变体（TCA→TTA，Ser→ku），但是该点突变并未影响hmuCD40的抗原表位。三种激发CD40活化的分子（CD40单抗、rhsCD40L和CD40L转基因细胞）并不影响RPMI8226细胞的体外增殖，但是CIM0单抗包板能明显抑制RPMI8226细胞的增殖[（2．5±0．6）×10^5vs（7．8±1．2）×10^5，P〈0．05]，并产生明显的G．期阻滞[（58．0±3．6）％vs（42．0±2．3）％，P〈0．05]。RPMI8226细胞上黏附分子和共刺激分子的表达无明显变化。激光共聚焦显微镜分析结果显示，在CD40被激活后能形成CD40信号传导的复合体。结论RPMI8226细胞高表达一种CIM0基因突变体，该突变体能在被激活后形成相应的信号传导复合体。

阻断CD40／CD40L共刺激通路延长大鼠移植肝脏存活时间

T细胞介导的免疫应答在移植排斥反应中起重要作用，共刺激信号在T细胞活化中是不可或缺的，CIM0／CD40L可提供共刺激信号。我们利用腺病毒介导CD40Ig融合基因阻断CIM0／CIMOL通路，探讨其延长移植肝脏存活的机制。

磁性纳米颗粒MR靶向诊断乳腺癌的体外实验观察

目的探讨CD40突变体抗体标记的磁性纳米颗粒与乳腺癌细胞结合在体外MR成像的可行性。方法采用化学交联法将单克隆抗体交联与超微超顺磁氧化铁（USPIO）粒子合成分子探针。通过流式细胞术、共聚焦显微镜及体外MR成像技术对探针与高表达CD40突变体乳腺癌细胞（M231）的靶向结合进行研究。MR信号变化数据组间比较采用单因素方差分析和LSD—t检验。结果携带磁性纳米颗粒的抗CIM0突变体分子探针被成功构建并分离，合成的探针同USPIO相比具有相似的磁学特性，具有良好的稳定性。分子探针能够特异性识别表达与乳腺癌细胞表面的CIM0突变体分子。体外磁共振成像显示探针同乳腺癌细胞结合后T2、T2值明显缩短[5H6-USPIO、5C11-USPIO、USPIO的T，分别为（51．66±5．31）、（92．89±4．72）、（64．56±3．85）ms]，T2图像较对照组明显变暗。实验组T2弛豫时间短于对照组，R弛豫时间差异有统计学意义。结论靶向CD40突变体的分子探针能够特异性识别乳腺癌细胞M231，可进一步用于动物体内靶向诊断成像。CD40突变体有望为乳腺癌MR分子成像提供新的靶点。

CD40基因特异性沉默对脑胶质瘤细胞株U87增殖和迁移的影响

目的探讨CD40基因特异性沉默对脑胶质瘤细胞增殖和迁移等恶性生物学行为的影响。方法构建特异性沉默CD40基因的重组表达载体(pSilencer3.1/shRNA-CD40)和随机对照载体(pSilencer3.1/shRNA-control),转染脑胶质瘤细胞株U87。采用RT-PCR和流式细胞术分别在mRNA和蛋白水平的检测CD40基因沉默效率,进而采用细胞计数法和Transwell法观察下调CD40分子表达后的U87细胞在sCD40L作用下增殖能力和迁移能力的改变。结果成功构建了特异性沉默CD40基因的稳定细胞株U87/shRNA-CD40,可显著下调U87细胞CD40 mRNA和蛋白质表达水平(P<0.05)。采用sCD40L激发CD40信号,结果显示,与野生型U87和对照组U87/shRNA-control相比,U87/shRNA-CD40细胞株增殖速率和迁移能力明显下降(均P<0.01)。结论特异性沉默脑胶质瘤细胞CD40分子表达,可以有效削弱肿瘤微环境中CD40信号导致的脑胶质瘤细胞增殖和迁移能力,这为临床治疗脑胶质瘤提供了新的线索。