卵巢上皮性肿瘤中c-myc和CD44v6的表达及其临床意义

目的探讨c-myc及CD44v6蛋白在卵巢上皮性肿瘤中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化法检测67例卵巢上皮性肿瘤及10例正常卵巢组织中c-myc、CD44v6的表达。结果恶性卵巢上皮性肿瘤中c-myc和CD44v6基因蛋白的阳性表达率分别为62.2%和26.7%,c-myc蛋白基因的表达在卵巢良性、交界性及恶性肿瘤间差异显著(P<0.05);但CD44v6的表达差异不显著(P>0.05)。不同组织学类型、分化程度及临床分期的卵巢癌中c-myc的表达差异不显著(P>0.05)。CD44v6的表达与卵巢肿瘤的组织学类型及临床分期无关,但与肿瘤的分化程度有关,且随分化程度的降低而增强。c-myc与CD44v6的表达具有相关性(P<0.05)。结论卵巢肿瘤组织中c-myc的表达与卵巢癌的发生有密切关系,提示c-myc可作为卵巢癌的肿瘤标记物;而CD44v6参与卵巢肿瘤的发生、发展。c-myc与CD44v6在卵巢肿瘤的发生、发展中可能起协同作用。

重组质粒pBud-CD44v6的构建及其在胃癌细胞内的表达

目的构建含人的肿瘤侵袭和转移的特异性抗原CD44v6编码基因的真核表达的重组载体,进行核苷酸序列分析,并在肿瘤细胞中表达。方法①以pBud作为真核表达载体,选择CD44v6编码基因进行RT-PCR扩增,构建重组表达质粒,进行酶切鉴定和测序分析。②在Lipofectamine 2000的介导下,将构建成功的pBud-CD44v6重组表达质粒转染到肿瘤细胞中,通过免疫组织化学方法检测CD44v6的表达。结果经酶切鉴定和测序分析表明,插入的目的基因片段为CD44v6的编码基因,长为129bp,与GenBank中登录的cDNA相比较,同源性高达100%,且方向正确;重组质粒pBud-CD44v6转染对数生长期胃癌细胞株SGC-7901,进行免疫组织化学检测结果显示,与空质粒转染组对比,重组质粒组肿瘤细胞的细胞质中可见大量CD44v6基因编码的表达,其蛋白呈棕黄色,而对照组呈阴性。结论成功构建了pBud-CD44v6真核表达的重组载体,并在肿瘤细胞中表达。

山仙颗粒对Lewis肺癌转移过程中E-cadherin CD44V6及nm23-H1表达影响的实验研究

目的:探讨山仙颗粒对Lewis肺癌转移过程中E-cadherin、CD44V6及nm23-H1表达的影响。方法:将45只C57BL/6小鼠随机分成空白对照组、荷瘤对照组、山仙颗粒组。给后两组接种瘤细胞,山仙颗粒组用0.5g/mL的山仙颗粒悬液0.4mL(只.天)灌胃,其他两组用生理盐水灌胃。采用免疫组化S-P法测45只小鼠肺组织、瘤组织内E-cadherin、CD44v6和nm23-H1表达情况。结果:荷瘤对照组与山仙颗粒组比较,出瘤时间短,瘤重及肺转移灶数高,差异有显著性(P<0.05);与山仙颗粒组、空白对照组比较,E-cadherin和nm23-H1的阳性表达率低,CD44V6的阳性表达率高,差异有显著性(P<0.05,P<0.01)。结论:E-cadherin、CD44V6和nm23-H1异常表达在Lewis肺癌形成和转移过程中发挥着重要作用,山仙颗粒能提高E-cadherin和nm23-H1的表达,降低CD44V6的表达。山仙颗粒有抗恶性肿瘤形成和转移的作用。

CD44v3基因蛋白在鼻咽癌中的表达以及与肿瘤转移的关系

目的研究粘附分子CD44变异型-3(CD44v3)在鼻咽癌中的表达和肿瘤浸润、转移的关系。方法采用免疫组化两步法检测鼻咽癌组中CD44v3蛋白在鼻咽癌和正常组中的表达差异,以及和鼻咽癌临床特征的关系。结果鼻咽癌组中CD44v3蛋白阳性表达率高于对照组(P<0.001),表达强度随着鼻咽癌的局部浸润程度、淋巴结转移扩大及TNM临床分期增加而增强,相关系数在0.303以上(P<0.05)。结论CD44v3可能和鼻咽癌的浸润、淋巴结转移及临床分期有关。

大肠癌细胞标志物CD44V6对大肠癌预后评估作用的研究

目的:使用流式细胞术检测大肠癌细胞CD44V6抗原表达、并对其分选后测定癌细胞增殖活性,评估临床大肠癌预后。方法:使用流式细胞术测定30例大肠癌组织(T)、癌旁2 cm(P2)、癌旁5 cm(P5)、远癌切端正常组织(N)单细胞悬液CD44V6阳性细胞百分率,并与免疫组化方法比较;使用流式细胞术测定CD44V6分选前后大肠癌细胞DNA指数(DI),S期细胞百分比(SPF)、细胞分裂增殖指数(PI)。结果:(1)大肠癌组织中CD44V6阳性细胞百分率明显升高,且在淋巴结转移组中升高更为明显。(2)流式细胞计检测效率明显高于传统的免疫组化方法。(3)流式细胞术分选CD44V6前后检测大肠癌细胞DI、PI值有明显差异。结论:流式细胞术检测大肠癌细胞CD44V6、并于分选后测定其DI、PI值,可作为临床评估大肠癌预后的有效检测指标。

基质金属蛋白酶-13和CD44V6在大肠癌中表达的研究

目的:观察人大肠癌中基质金属蛋白酶-13的表达情况,探讨其与大肠癌分化、浸润及转移的关系。同时观察大肠癌中基质金属蛋白酶-13和CD44V6表达的相关性,以进一步探讨黏附分子及基质金属蛋白酶对肿瘤浸润转移的影响,为临床完善治疗大肠癌的方法提供理论依据。方法:将60例大肠癌石蜡标本进行分组。根据病理分级分为三组:高分化组20例,中分化组32例,低分化组8例;根据浸润深度分为两组:≥浆膜41例,≤肌层19例;根据Ducks分期分成两组:A+B期24例,C+D期36例;根据是否有淋巴结转移分为两组:淋巴结转移(+)33例,淋巴结转移(-)27例。HE染色,光镜观察病变;通过S-P免疫组织化学染色及图像分析系统对组织内的阳性抗原进行定位及定量分析。结果:基质金属蛋白酶-13在大肠癌组织间质细胞中表达,主要在纤维细胞胞核及胞浆中染色,棕黄色,大体呈条索状,环绕癌组织腺体走形,肿瘤细胞中表达不明显或无表达。基质金属蛋白酶-13表达量与大肠癌的病理分化程度不相关,而与肿瘤细胞的浸润深度、Ducks分期及淋巴结转移情况密切相关。CD44V6主要表达在肿瘤细胞胞浆和细胞膜上,呈强阳性表达。其表达量也与大肠癌的病理分化程度不相关,同样与肿瘤细胞的浸润深度、Ducks分期及淋巴结转移情况密切相关。Spearman相关性分析结果显示大肠癌中基质金属蛋白酶-13和CD44V6的表达可能具有相关性。结论:基质金属蛋白酶-13在大肠癌基质中有表达;其表达与大肠癌的部位及分化程度无关,而与大肠癌浸润深度、Ducks分期、淋巴结转移密切相关;基质金属蛋白酶-13和CD44V6在大肠癌中的表达可能具有相关性。

转移性肾细胞癌中RSK4、CD44及MMP-9的表达及意义

目的检测核糖体S6蛋白激酶4(ribosomal S6 protein kinase 4,RSK4)、CD44和MMP-9在原发性肾细胞癌(primary renal cell carcinoma,pRCC)及转移性肾细胞癌(metastatic renal cell carcinoma,mRCC)中的表达,探讨三者表达水平及与临床病理特征的相关性。方法采用免疫组化En Vision法检测52例pRCC及48例mRCC中RSK4、MMP-9和CD44蛋白的表达,并分析三者表达的相关性及与临床病理特征的关系。结果 48例mRCC中RSK4、CD44及MMP-9的阳性率分别为75%(36/48)、68.75%(33/48)及91.7%(44/48),而三者在52例pRCC中的阳性率分别为44.2%(23/52)、34.6%(18/52)及69.2%(36/52)。RSK4、CD44及MMP-9在mRCC中的表达高于pRCC(PRSK4=0.002;PMMP-9=0.002;PCD44=0.001);RSK4、CD44及MMP-9表达与mRCC患者年龄、性别和肿瘤Fuhrman分级、转移部位之间未见明确相关性(P>0.05)。在mRCC中,三者之间的表达呈正相关(P=0.008);两两相关分析发现RSK4与CD44(P=0.019)、MMP-9与CD44(P=0.05)的表达之间存在正相关,而RSK4与MMP-9(P=1.00)未见明确相关性。结论 RSK4、CD44及MMP-9在mRCC中的表达高于pRCC,提示三者可能介导肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)的转移,而其具体作用机制尚有待进一步研究。

CD44剪接变异体在乳腺癌中的表达

目的观察乳腺癌细胞系及原发性乳腺癌组织中CD44剪接变异体种类及其表达情况。方法 RT-PCR法检测乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-435和20例原发性乳腺癌组织中CD44变异体表达情况,分析其与临床病理参数之间的关系。结果 RT-PCR分析显示,在已知的8种剪接变异体、乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-435和所检测的全部乳腺癌组织标本中,检测到CD44剪接变异体1、2、3、4、5、6、8,其中CD44剪接变异体4、5表达水平较高。CD44剪接变异体与临床病理参数分析显示CD44剪接变异体与患者年龄、TNM分期、淋巴结转移、ER、PR表达无关。CD44剪接变异体1和CD44剪接变异体2 mRNA的高表达与较小的肿瘤直径有关;CD44剪接变异体4的mRNA高表达与组织学高级别有关;CD44剪接变异体2、6的mRNA高表达与Her-2低表达相关;CD44剪接变异体5的mRNA低表达和Her-2高表达相关。结论 MDA-MB-231、MDA-MB-435及所检测的乳腺癌组织标本中,CD44剪接变异体为异质性表达,以标准型CD44表达水平最高。

悬浮培养与贴壁培养对乳腺癌MCF-7细胞形态及CD44、CD24表达的影响

目的采用悬浮培养和贴壁培养两种方法分别孵育人乳腺癌MCF-7细胞株,观察细胞形态及干细胞标志物CD44、CD24的变化。方法将乳腺癌MCF-7细胞株同时进行第一代悬浮培养和贴壁培养,用倒置显微镜观察悬浮细胞及贴壁细胞形态及生长方式,收集贴壁细胞及第二代悬浮细胞,对其表面分子CD24及CD44进行免疫荧光染色,荧光显微镜下观察细胞表面标志物的表达,同时采用流式细胞术检测不同亚群的细胞数量。结果悬浮细胞以大小不等的微球方式进行生长,并在第二代悬浮培养中维持此生物学特性;贴壁细胞呈单层贴壁簇状生长。与贴壁细胞相比,CD44分子在悬浮细胞中表达含量增高,CD24分子表达含量减少。CD44+/CD24-/low表型细胞在悬浮细胞和贴壁细胞中所占比例分别为(87.0±0.43)%和(40.1±1.05)%(P<0.05);CD44+/CD24+表型所占比例分别为(11.7±0.39)%和(57.2±0.75)%(P<0.05)。结论悬浮培养法可使乳腺癌MCF-7细胞株贴壁细胞去分化,可富集CD44+/CD24-/low表型的乳腺癌干细胞。

盐霉素通过TGFβ1/Smad信号通路抑制MMP-2、9降低CD44+/CD24-/low表型乳腺癌干细胞迁移和侵袭能力

目的分析盐霉素对CD44^+ /CD24^(-/low)表型乳腺癌干细胞迁移和侵袭能力的影响,并初步探讨其影响机制。方法通过有血清和无血清培养技术培养人乳腺癌MCF-7细胞株,收集两种细胞,对其CD24、CD44标志物进行荧光染色,采用流式细胞仪检测CD44^+ /CD24^(-/low)亚群细胞的比例;盐霉素培养MCF-7细胞株和CD44^+ /CD24^(-/low)表型乳腺癌干细胞,MTT法筛选出引起CD44^+ /CD24^(-/low)表型乳腺癌干细胞细胞凋亡低于IC50的浓度;Transwell技术检测MCF-7和CD44^+ /CD24^(-/low)表型乳腺癌干细胞的迁移和侵袭能力,以筛选出的浓度诱导CD44^+ /CD24^(-/low)表型乳腺癌干细胞,以排除盐霉素对该细胞增殖抑制作用的影响,Transwell技术检测该细胞迁移和侵袭能力的变化;Western blot技术检测TGFβ1、Smad2、Smad3、p-Smad2、pSmad3、MMP-2、MMP-9蛋白水平的变化。结果 CD44^+ /CD24^(-/low)表型乳腺癌干细胞在无血清培养和有血清培养中的比例分别为(86.93±0.53)%和(19.98±0.62)%(P<0.01),CD44^+ /CD24^+ 表型细胞的比例分别是(12.68±0.59)%和(79.90±0.57)%(P<0.01);MTT法筛选出低于IC50的浓度是1、3、5、7μmol/L;Transwell技术检测CD44^+ /CD24^(-/low)表型乳腺癌干细胞迁移和侵袭能力明显高于MCF-7细胞株,并随盐霉素浓度的上升呈下降趋势(P<0.05)。Western blot技术检测TGFβ1、Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3、MMP-2、MMP-9蛋白水平下调(P<0.01)。结论盐霉素可能通过TGFβ1/Smad信号通路下调MMP-2、MMP-9蛋白水平,从而降低CD44^+ /CD24^(-/low)表型乳腺癌干细胞迁移和侵袭能力。

P-选择素、CD44v6及nm23的表达与乳腺癌转移的关系

乳腺癌是危害女性健康最常见的恶性肿瘤。远处转移是危及患者生命的主要原因。目前认为，肿瘤的转移是肿瘤细胞与机体组织和细胞间复杂的相互作用，是一个多分子参与的高度有序的连续过程。我们收集93例乳腺癌组织标本，利用免疫组织化学技术检测了病变中P-选择素、CD44v6及nm23的表达状况，以期为临床抗癌研究提供科学依据。

CD44v9 mRNA和MMP-2在PSTT中的表达及其相关性研究

目的:探讨CD44v9 mRNA和MMP-2在PSTT中的表达及相关性。方法:应用组织芯片分别结合原位杂交和免疫组化方法检测PSTT中CD44v9 mRNA和MMP-2的表达情况。结果:CD44v9 mRNA在正常绒毛,良性PSTT,恶性PSTT的阳性表达率分别是:16.7%,30.3%,100%。其中恶性PSTT与正常绒毛,良性PSTT相比差异有统计学意义(P<0.05);而MMP-2的阳性表达率分别为:6.6%,30.7%,100%,其中恶性PSTT与正常绒毛、良性PSTT相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CD44v9 mRNA和MMP-2的过表达促进PSTT的浸润、转移,二者具有正协同作用,联合检测CD44v9 mRNA和MMP-2蛋白可作为PSTT的浸润、转移及评价预后的生物学指标。

食管鳞癌中Ezrin和CD44-v6的表达及其临床意义

目的探讨ezrin和CD44-v6在食管鳞癌中的表达及其与淋巴结转移,病理学分级等的关系。方法应用组织芯片技术进行免疫组化S-P法染色,检测71例食管鳞癌患者癌组织标本及癌旁正常上皮中ezrin和CC44-v6的表达情况,并结合临床相关因素进行统计学分析。结果71例癌旁正常上皮中,ezrin表达阳性33例,CD44-v15表达阳性18例;71例食管鳞癌组织中,ezrin表达阳性64例,CD44-v6表达阳性58例。Ezrin的表达与淋巴结转移关系密切,有淋巴结转移组ezrin强阳性率明显高于无淋巴结转移组(P<0.05);CD44-v6的表达与肿瘤组织的病理学分级、淋巴结转移关系密切,在淋巴结转移组CD44-v6表达阳性率显著高于无淋巴结转移组(P<0.05)。CD44-v6阳性表达组的ezrin表达阳性率显著高于CD44-v6阴性表达组(P<0.05)。Ezrin与CD44-v6同时表达的48例患者中,淋巴结转移率高达60.0%,而ezrin与CD44-v6同时不表达的6例患者中,均无淋巴结转移。结论联合检测ezrin和CD44-v6的表达有助于综合判断食管鳞癌的恶性程度和转移潜能,ezrin有望成为判断肿瘤预后的新指标。

加味三棱丸对子宫内膜异位症黏附分子ICAM-1，CD44表达的影响

目的:研究加味三棱丸(SLW)对子宫内膜异位症移植物的抑制作用和探讨对黏附分子ICAM-1,CD44表达的影响。方法:采用子宫内膜自体移植法建立大鼠子宫内膜异位症模型,用游标卡尺、HE染色和免疫组化分别检测子宫内膜异位症移植物体积变化、异位内膜组织形态学改变和黏附分子ICAM-1,CD44的表达。结果:SLW 0.11,1.02 g.kg-1均可以明显减小子宫内膜异位症移植物的体积;显微形态显示:给药组与模型组比较其病理改变程度减轻,异位内膜为薄单层细胞排列而非腺体数目多,细胞呈多层排列,腺上皮呈扁平或矮立方形,未见假腺体改变;SLW 1.02,0.11 g.kg-1均能明显降低了异位子宫内膜黏附分子ICAM-1,CD44的蛋白表达。结论:SLW可显著抑制子宫内膜异位症移植物生长,其作用机制可能与抑制黏附分子ICAM-1,CD44的蛋白表达水平有关。

CD44在儿童肝母细胞瘤中的表达及临床意义

目的研究儿童肝母细胞瘤中CD44表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学方法,检测30例肝母细胞瘤组织和10例正常肝脏组织中CD44表达。应用Spss 11.0软件分析,分级数据采用卡方检验。结果 CD44在肝母细胞瘤组中表达率(66.7%),明显高于正常肝脏组(20.0%),差异具有统计学意义(χ2=4.848,P<0.05);CD44表达率在肝母细胞瘤Ⅲ期和Ⅳ期(83.3%)明显高于Ⅰ期和Ⅱ期(41.7%),差异具有统计学意义(χ2=5.625,P<0.05)。结论 CD44在儿童肝母细胞瘤发生、进展及预后方面可能有重要作用。

舌鳞状细胞癌组织中CD44和CD133的表达及临床意义

目的探讨舌鳞状细胞癌组织中肿瘤干细胞标志物CD44和CD133的表达与临床病理特征及预后的关系。方法应用免疫组化法观察67例舌鳞状细胞癌组织中CD44和CD133的表达状况。结果 CD44和CD133在舌鳞状细胞癌患者中的阳性表达率分别为58.21%(39/67)和65.67%(44/67);CD44,CD133的表达均与患者年龄、性别无关(P>0.05),但与组织分化程度、临床分期及淋巴结转移相关(P<0.05);单因素分析显示:CD44的阳性表达和CD133的阳性表达均与患者5年生存率存在相关性(P<0.05);Cox多因素分析显示:组织分化程度、CD44的阳性表达及CD133的阳性表达是患者生存的独立预后影响因素(P<0.05)。结论CD44,CD133在舌鳞状细胞癌中的表达与患者的恶性生物学行为有关,可作为预后评价的参考标准。