CITED2基因SGJ序列插入突变与先天性心脏病发病

目的分析先天性心脏病(congenital heart defects,CHD)患者的CITED2基因编码链基因突变的情况。方法收集101例散发型CHD患者和104例正常健康新生儿血液进行DNA抽提、PCR扩增,应用变性高效液相色谱仪进行CITED2基因全部编码序列的突变检测,对有异常峰型的DNA进行直接测序,并与GeneBank进行比较。结果首次在动脉导管未闭的患者发现CITED2基因的一种新的插入突变,在CITED2基因编码链碱基483位起始处插入一个重复9肽(c483_484ins27),导致蛋白的丝氨酸-甘氨酸富含区(SGJ)插入9个氨基酸p.Ser161-Gly162ins9。对照组中未检测到此突变。在CITED2基因的EP300结合基序未发现突变。结论中国先心病患者中存在CITED2基因突变,新发现的CITED2基因的重复9肽插入突变c483_484ins27可能是导致动脉导管未闭发生的原因之一。

多囊卵巢综合征CITED2基因表达变化的临床意义

目的:探讨多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)与CITED2基因表达变化的相关性。方法:收集新疆维吾尔自治区人民医院北院2014年5月至2016年12月收治的PCOS患者114例,另取新疆维吾尔自治区人民医院北院正常月经周期的健康育龄期女性80例作为对照组。使用电化学发光法测定卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(luteotropic hormone,LH)、睾酮(testosterone,T)及雌二醇(estradiol,E2)水平。稳态模型测定胰岛素分泌指数(homeostasis model assessmentβ,HOMA-β)和胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment-insulin resistance,HOMA-IR)。荧光定量PCR检测CITED2基因表达。结果:PCOS患者CITED2基因的2^(-△Ct)值为0.146±0.032,对照组为0.097±0.022,两组间差异具有统计学意义(t=3.135,P=0.032)。CITED2基因表达与PCOS患者FSH呈负相关(r=-0.216,P=0.041),与LH(r=0.382,P=0.022),T(r=0.394,P=0.016),E2(r=0.375,P=0.026),HOMA-β(r=0.351,P=0.031)和HOMA-IR(r=0.326,P=0.033)呈正相关。结论:PCOS患者CITED2基因高表达,这可能是PCOS患者性激素紊乱和胰岛素抵抗的主要影响因素。

新疆地区维吾尔族先天性心脏病患者CITED2基因突变分析

目的 分析新疆维吾尔族先天性心脏病（CHD）患者与CITED2基因突变的关系.方法 收集150例散发型维吾尔族CHD患者和150例健康维吾尔族人群血液样本进行DNA提取、目的基因聚合酶链反应及测序,与GeneBank进行比较以识别基因突变,并分析氨基酸序列.结果 一例室间隔缺损患者发现1个新的纯合突变c.574A＞G,并导致相应氨基酸序列错义突变（p.Ser192Gly）,该突变在CITED2基因丝氨酸-甘氨酸富含区,而在健康对照组中未发现此突变.结论 新疆维吾尔族CHD患者中首次发现了CITED2基因纯合突变,Serl92GIy突变所在序列呈现一定保守性,可能与CHD发生有关.

CITED2基因在内脏反位患者中的突变分析

目的·研究CITED2 基因突变与内脏反位的关系。方法·选取24 例内脏反位的患者和100 名健康儿童对照,从外周血提取基因组DNA,使用PCR 扩增技术和Sanger 测序技术来检测CITED2 的外显子区域;通过软件Sift、PolyPhen-2、PROVEAN 和MutationTaster 预测突变是否存在致病性;使用Y. Zhang 实验室服务器构建蛋白质的三维结构,导入SWISS-PdbViewer 查看突变对蛋白质结构的影响。结果·在1 例内脏反位的患者中发现了1 个新发的杂合错义突变c.418C>T(p.P140S),此突变在对照组中未发现。软件SIFT 和Mutation Taster 预测此突变具有致病性。SWISS-PdbViewer 显示,第140 位脯氨酸突变为丝氨酸后,第137 位天冬氨酸上的3个氢键全部断开,第140 位丝氨酸和第142 位丙氨酸重新建立了一个异常弱氢键。结论· CITED2 基因c.418C>T(p.P140S)突变可能影响CITED2 的生物学活性,与内脏反位的发生有关。

CITED2基因CpG岛甲基化与先天性心脏病的关系

目的研究先天性心脏病患儿CITED2基因启动子区CpG岛的甲基化情况,并探讨其在该病发病中所起的作用。方法收集43例先天性心脏病患儿及2例意外死亡儿童右心耳组织,对CITED2基因进行突变筛查,同时利用生物信息学筛选,分别用亚硫酸氢盐修饰结合测序(BSP)及甲基化特异性PCR(MSP)检测CITED2基因启动子区CpG岛的甲基化情况,并运用实时荧光定量PCR检测CITED2基因mRNA的表达。结果先天性心脏病组启动子区存在4例杂合子突变(均为-341 T>G),此突变对CITED2基因mRNA的表达无影响。其中BSP法成功检测到先天性心脏病组甲基化阳性率为83.3%(10/12),MSP法分析发现甲基化阳性率为84.2%(16/19),同时CITED2基因异常甲基化使其mRNA的表达明显减低(P<0.05)。结论先天性心脏病中存在CITED2基因CpG岛的异常甲基化,此甲基化下调了CITED2基因mRNA的表达。

人野生型和突变型CITED2真核表达质粒的构建与表达

目的构建人转录辅助因子CITED2突变型(c.573-578del6)及野生型真核表达质粒并检测两种重组质粒CITED2蛋白的表达情况。方法分别以健康儿童和CITED2基因突变的先天性心脏病患儿血细胞DNA为模板,PCR定向克隆扩增野生型和突变型CITED2编码链,分别T/A克隆至pMD19-T simple质粒上,筛选出野生型和突变型CITED2的T载体重组质粒。应用DNA重组技术将T载体重组质粒上的CITED2基因片段亚克隆入真核表达载体pEGFP-C1,构建pEGFP-C1-wtCITED2和pEGFP-C1-mtCITED2真核表达质粒,并分别转染至HEK293细胞,24h后在荧光显微镜下观察质粒转染情况,48h后应用流式细胞仪检测转染效率,Western blotting检测CITED2蛋白的表达。结果成功构建了人野生型pEGFP-C1-wtCITED2和突变型pEGFP-C1-mtCITED2真核表达质粒。转染至HEK293细胞后24h,在荧光显微镜下可观察到各转染组EGFP的表达,转染后48h流式细胞仪检测转染效率为50%～60%,Western blotting检测可见CITED2蛋白与EGFP的融合表达。结论成功构建了人转录辅助因子CITED2突变型及野生型真核表达质粒,并检测到CITED2蛋白的表达。

外显子捕获-高通量测序技术用于法洛四联症胎儿遗传学检测

目的用外显子捕获-高通量测序(exon-capture high-throughput sequencing,EC-HTS)技术寻找法洛四联症(tetralogy of fallot,TOF)胎儿可能存在的遗传学致病性证据,并探讨其在产前分子遗传学诊断中的价值。方法选择经超声心动图发现且G显带和微阵列比较基因组杂交(array-based comparative genomic hybridization,a CGH)分析结果均正常的9例TOF胎儿作为研究对象,以63个人类已知的先天性心脏病致病基因作为检测靶点制作捕获芯片,用EC-HTS技术进行检测,数据经过Calling、数据库比对、软件分析得到最终病理性突变位点;并用Sanger测序对其进行验证。结果在9例胎儿中共检测到单核苷酸多态性(SNP)位点732个,结果经过生物信息学分析得到致病性突变位点3个:CITED2 c.574_579 del AGCGGC(p.S192_G193del纯合突变,CHD7c.2550_2554 del GAGAA(p.K850Nfs*6)杂合突变,NOTCH2 c.4918T>C(p.F1640L)杂合突变。Sanger测序结果验证了这3个突变位点的真实存在,父母溯源检测发现这3个点突变均为新发突变。结论用靶向性EC-HTS技术发现了3例TOF胎儿存在病理性基因突变,可能为其致病的遗传学病因。

地西他滨体外对小鼠急性粒-单核白血病细胞WEHI-3的抗肿瘤作用及机制探讨

目的探讨去甲基化药物地西他滨对于小鼠急性粒-单核白血病细胞WEHI-3的凋亡、细胞周期的影响及其作用机制。方法急性粒-单核白血病细胞(WEHI-3)采用小剂量地西他滨0.25μmol/L连续体外处理3 d。采用瑞氏吉姆萨染色法观察细胞形态变化,AnnexinV-PI法检测WEHI-3不同时间的凋亡情况,流式细胞术检测细胞周期变化情况,Q-PCR检测处理前后mRNA的表达情况。结果地西他滨处理后,WEHI-3细胞体积明显增大,胞质增多,形态不规则,染色质浓缩、边缘化;PBS处理的WEHI-3细胞G1期占39.64%,S期占49.43%,G2期占8.74%,地西他滨处理后WEHI-3细胞G1期增加至78.02%,S期减少至15.86%,G2期减少至2.91%,可见地西他滨处理后WEHI-3被阻滞于G1期;经地西他滨处理后WEHI-3细胞中MMD、TSG101、TAF7L、CITED2 mRNA表达水平显著提高(P均<0.01)。结论地西他滨可上调MMD、CITED2、TAF7L、TSG101基因表达,诱导小鼠急性粒-单核白血病WEHI-3细胞凋亡、细胞周期阻滞。

缺血性心肌病患者外周血MicroRNA-182、CITED2及HIF-1的表达及相关性研究

目的:探讨microRNA-182(miR-182)、cAMP应答元件结合蛋白反式作用因子(CITED2)及低氧诱导因子-1(HIF-1)在缺血性心肌病(ICM)患者外周血中的表达及相关性。方法:收集本院46例ICM患者设为ICM组,同期选择32例健康者为对照组。分析2组一般资料及心脏功能指标[氨基末端B型脑钠肽前体(NTproBNP)、左室射血分数(LVEF)、6min步行实验(6MWT)距离];用实时荧光定量聚合酶链式反应法(qRT-PCR)检测血浆miR-182的含量,采用ELISA法测定血清CITED2和HIF-1水平,并观察ICM组治疗前及治疗3个月后上述指标的变化;分析ICM患者血浆miR-182水平与有关因素的相关性。结果:ICM组治疗前CITED2、LVEF及6MWT距离明显低于对照组,NT-proBNP、HIF-1及miR-182表达明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。与ICM组治疗前比较,ICM组治疗后CITED2、LVEF及6MWT距离明显升高,NT-proBNP、HIF-1及miR-182显著降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。ICM组治疗前血浆miR-182的水平与CITED2、LVEF及6MWT距离成负相关(r=-0.427、-0.351、-0.298,P<0.05);ICM组治疗前血浆miR-182水平与HIF-1成正相关(r=0.337,P<0.05)。结论:外周血miR-182水平可作为ICM诊断及进行风险评估的生物标志物。miR-182可能通过其靶蛋白CITED2上调HIF-1,参与调控ICM的发生及发展。

CITED2基因突变与先天性心脏病关系研究

目的研究CITED2基因突变与先天性心脏病(CHD)的关系。方法 2013年1月至2015年1月山东大学齐鲁儿童医院收集368例散发型CHD患儿和200名健康儿童血液样本进行DNA抽提,PCR扩增CITED2外显子区,Sanger测序后,进行Gene Bank对比和氨基酸序列分析。结果发现4例杂合突变。病例1室间隔缺损患儿为c.399C>T同义突变(p.His133His);病例2室间隔缺损患儿为SGJ区c.574A>G的错义突变(p.Ser192Gly);病例3房间隔缺损患儿为已知SNP位点(rs191856368);病例4动脉导管未闭患儿为新发现的错义突变(p.Ser96Phe)。这些突变在对照组中均未检测到。结论 CITED2基因Ser192Gly和p.Ser96Phe突变可能与CHD发生有关。

先天性心脏病患儿Citecl2基因突变分析

目的探讨先天性心脏病（CHD）患儿Cited2基因编码链的突变情况。方法收集120例非同源多种种类的特发性CHD患儿和100例健康儿童血液样本进行DNA抽取、目的基因聚合酶链反应及测序，并与GeneBank进行比较以识别基因突变，对伴有突变者行家系调查，并用ClustalW软件分析突变氨基酸的保守性。结果在4例CHD患儿发现3个新的Cited2编码链突变，首次在1例镜面右位心伴法洛四联症、1例主动脉瓣狭窄患儿各自发现1个新的点突变（c．550G〉A；c．574A〉G），首次在1例室间隔缺损伴房间隔缺损及1例主动脉瓣狭窄伴肺动脉瓣狭窄患儿发现相同的缺失突变（c．573-578del6），这3种突变均导致了相应蛋白质的结构改变（P．Gly184Ser；P．Ser192Gly；P．Ser192s），这些突变均未在对照组发现。结论在不同类型的CHD患儿中发现了新的Cited2基因突变，丝氨酸一甘氨酸富含区（SGJ）是突变的热点区域，这些突变可能是导致人类CHD发生的原因之一。