应用RT-PCR检测乳腺癌患者外周血CEA mRNA和CK-19 mRNA的研究及意义

目的:检测乳腺癌患者外周血中CEAmRNA和CK-19mRNA的表达,建立取材于外周血早期诊断乳腺癌微转移的方法。方法:65例乳腺癌和37例乳腺良性疾病患者的外周血,分离其有核细胞后进行细胞总RNA的抽提,运用巢式RT-PCR技术进行CEAmRNA和CK-19mRNA的检测。结果:以巢式RT-PCR终产物出现131bp为CEAmRNA阳性,460bp为CK-19mRNA阳性。65例乳腺癌患者CEAmRNA和CK-19mRNA分别有26例和24例表达,总阳性率分别为40.0%和36.92%。37例乳腺良性疾病者无1例CEAmRNA和CK-19mRNA表达,两组有统计学意义(P<0.001)。结论:RT-PCR可以用于临床检测乳腺癌患者外周血中微转移。

用荧光定量RT-PCR检测鼻咽癌病人外周血CK-19 mRNA的表达

【目的】探讨鼻咽癌病人外周血中CK-19 mRNA表达与鼻咽癌临床的关系。【方法】用荧光定量RT-PCR方法检测97例鼻咽癌病人及26例正常人外周血中CK-19 mRNA的表达量。【结果】鼻咽癌病人外周血中CK-19 mRNA阳性表达94％(91/97),健康对照组阳性表达8％(2/26);T4期病人及远处转移病人外周血中CK-19 mRNA拷贝数显著升高,CK-19 mRNA拷贝数与鼻咽癌临床分期呈正相关。【结论】荧光定量RT-PCR方法检测鼻咽癌病人外周血CK-19 mRNA表达,方法简单、准确,在预测鼻咽癌远处转移及准确临床分期方面有一定可行性。

CK-19 mRNA对乳腺癌的微转移诊断价值的Meta分析

目的：评价CK-19mRNA对乳腺癌的微转移诊断的价值。方法：计算机检索维普、CNKI和万方数据库,收集已公开发表的有关CK-19 mRNA对乳腺癌的微转移诊断的文献,按Meta分析的要求对原始文献的质量进行评估,采用RevMan5.0软件对各研究的原始数据进行统计分析。结果：共纳入7篇中文文献,样本量为777例,其中经病理学诊断为II、I期的乳腺癌患者为258例,III、Ⅳ期的有62例。乳腺癌组与乳腺良性疾病组的Meta分析结果：合并OR=7.30,95%CI=2.48~21.44,P=0.0003;I、Ⅱ期与III、Ⅳ期癌症组的Meta分析结果：合并OR=0.20,95%CI=0.11至0.38,P〈0.00001。结论：CK-19 mRNA可以作为检测乳腺癌患者外周血微转移的分子标志物,对乳腺癌的指导治疗和评估预后具有重要的意义。

RT-PCR检测乳腺癌患者外周血CK-19 mRNA的表达

目的 探讨乳腺癌患者外周血中 CK- 19m RNA的表达 ,建立检测外周血早期诊断乳腺癌微转移的方法。方法 采取 6 5例乳腺癌和 37例乳腺良性疾病患者的外周血 ,分离其有核细胞后进行细胞总 RNA的抽提 ,运用巢式 RT- PCR技术进行 CK- 19m RNA的检测。结果 以巢式 RT- PCR终产物出现 4 6 0 bp带定为阳性。 6 5例乳腺癌患者 CK- 19m RNA有 2 4例表达 ,总阳性率为 36 .92 %。37例乳腺良性疾病者 CK- 19m RNA无一例表达。两组有统计学意义 (χ2 =7.4 1,P<0 .0 0 1)。结论 RT- PCR可以用于临床检测乳腺癌患者外周血中微转移 。

CK-19 mRNA与肿瘤标志物联合检测对肺癌的诊断价值

目的:评价外周血CK-19 mRNA与肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇酶(NSE)和细胞角蛋白19血清片段21-1(CYFRA21-1)联合检测对肺癌临床诊断的价值和意义。方法:分别应用RT-PCR与放射免疫分析法、免疫放射分析法测定64例肺癌患者、40例肺部良性疾病患者和30例健康人CK-19 mRNA、CEA、NSE和CYFRA21-1的表达情况,并分析它们在不同临床病理类型和不同分期肺癌患者中的表达和联合检测的灵敏度、特异度和准确性。结果:肺癌患者CK-19 mRNA、CEA、NSE和CYFRA21-1的阳性率均高于肺部良性疾病组和健康对照组。不同病理类型的肺癌组织中CK-19 mRNA阳性率差异无统计学意义,Ⅰ-Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期肺癌组织中CK-19mRNA的阳性率呈明显的上升趋势。肺鳞癌组织中CYFRA21-1的阳性率最高(78.5%),小细胞肺癌组织中NSE的阳性率最高(81.3%),肺腺癌组织中CEA的阳性率最高(79.2%)。4者联合检测灵敏度和准确性为90.6%和86.2%。结论:肺癌患者外周血CK-19 mRNA和肿瘤标记物CEA、NSE、CYFRA21-1联合检测可提高肺癌的诊断率,并可为肺癌病理类型的诊断提供重要的参考。

实时荧光定量RT-PCR检测肝卵圆细胞Alb和CK-19 mRNA的表达

目的建立Alb和CK-19 mRNA表达量检测的实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)系统,检测Lewis大鼠肝卵圆细胞(HOC)及其分化细胞中Alb和CK-19 mRNA表达量并分析其意义。方法用实时荧光定量RT-PCR技术检测分别检测HOC、分化细胞、胆道及肝脏标本中Alb和CK-19 mRNA的表达情况,以上标本各20例。结果Alb mRNA在HOC(-1.820±0.614)中的表达水平明显低于其在肝脏(-1.139±0.588)中的表达水平(P<0.05);CK-19 mRNA在HOC(-3.852±0.974)中的表达水平明显低于在胆道(-1.739±0.704)、肝脏(-1.926±0.653)、分化细胞(-1.492±0.634)中的表达水平(P<0.05);HOC Alb mRNA表达水平高于CK-19mRNA表达水平(P<0.05),分化细胞Alb mRNA(-1.758±0.543)表达水平同ck-19 mRNA表达水平差异不明显(P>0.05)。结论使用实时荧光定量RT-PCR检测HOC Alb和CK-19 mRNA的表达克服了传统PCR只能定性不能定量的缺点,为研究Alb和CK-19 mRNA在HOC中的表达提供了相对定量的方法,成功地进行该项实验需要掌控好几个关键环节;HOC中Alb mRNA和CK-19 mRNA表达量低,经过诱导分化后两者表达量明显升高,证实HOC具有分化为肝细胞和胆管上皮细胞的双向分化特性,在本研究的诱导分化条件下HOC主要向胆管上皮细胞分化。

乳腺癌患者外周血CK-19 mRNA检测的临床意义

目的探讨外周血CK-19mRNA表达与乳腺癌的关系,评价其在乳腺癌诊断上的价值。方法应用RT-PCR技术检测200例乳腺癌患者外周血中CK-19mRNA表达情况,并以66例乳腺良性疾病和60例正常健康女性作为对照。结果200例乳腺癌患者48例外周血CK-19为阳性,66例乳腺良性疾病患者中3例阳性,而同时检查的60位健康者,他们的外周血CK-19均为阴性;不同年龄病人的CK-19检测阳性率对比,彼此之间差异无统计学意义;肿瘤不同分期CK-19阳性率对比差异有统计学意义。结论RT-PCR法检测CK-19mRNA可作为乳腺癌诊断的指标。

应用RT-PCR检测乳腺癌患者外周血CK-19mRNA的临床意义

目的:探索取材于乳腺癌患者外周血诊断微转移的方法。方法:66例乳腺癌和37例乳腺良性疾病患者的外周血,分离其有核细胞后进行细胞总RNA的抽提,运用RT-PCR技术进行CK-19 mRNA的检测。结果:以RT-PCR终产物出现460bp条带定为阳性。66例乳腺癌患者CK-19mRNA有24例表达,总阳性率为36.36％。37例乳腺良性疾病者CK-19mRNA无一例表达。两组有统计学意义(x2=17.54,P<0.001)。结论:RT-PCR检测CK-19 mRNA可以用于临床诊断乳腺癌患者外周血中微转移。

外周血CK-19mRNA检测对乳腺癌预后的影响

目的:探讨外周血CK-19mRNA对乳腺癌患者预后的影响。方法:对86例初治乳腺癌患者根治手术后的外周血用RT-PCR方法检测了CK-19mRNA的表达,并采用S-P免疫组化法检测了手术标本的c-erbB-2、ER、PR蛋白的表达情况。结果:手术后患者外周血CK-19mRNA阳性率为52.3%;外周血CK-19mRNA状况与临床分期呈显著相关(P<0.05),而与肿瘤大小、腋淋巴结转移、c-erbB-2、ER、PR蛋白的表达均无显著相关(P>0.05);外周血CK-19mRNA阴性病例与阳性病例相比,无病生存期和总生存期显著延长(P<0.05)。结论:乳腺癌患者术后外周血CK-19mRNA的检测有助于评估预后。

乳腺癌外周血CK-19mRNA的表达及临床意义

目的：研究外周血CK-19 mRNA表达与乳腺癌临床生物学指标的关系,探讨其作为乳腺癌微转移标志物的可能性,并判断手术和化疗对血液微转移的影响。方法：应用RT-PCR技术检测50例乳腺癌患者（乳腺癌组）术前、术后第2天、第1次化疗结束后以及术后9～12个月外周血中CK-19 mRNA的表达情况,并以20例乳腺良性疾病（良性对照组）和20例正常健康女性（正常对照组）作为对照。结果：术前乳腺癌组外周血CK-19 mRNA阳性率为24.00%（12/50）,其中0～Ⅰ期15.38%（2/13）Ⅰ,Ⅰ期20%（6/30）Ⅰ,Ⅱ期57.14%（4/7）Ⅰ,Ⅱ期乳腺癌CK-19 mRNA阳性表达率明显高于0～Ⅱ、Ⅰ期（P〈0.05）;有淋巴结转移者42.11%（8/19）表达阳性,无淋巴结转移者12.94%（4/31）表达阳性,二者差异有统计学意义（P〈0.05）。良性疾病组CK-19 mRNA的阳性率为5.00%（1/20）,正常对照组均阴性,乳腺癌组与良性疾病组和正常对照组比较差异有统计学意义（P均〈0.01）。乳腺癌组术后第2天CK-19 mRNA阳性率为26%（13/50）,与术前比较差异无统计学意义（P〉0.05）。术后首次化疗结束后CK-19 mRNA阳性率为12%（6/50）,化疗前后差异有统计学意义（P〈0.01）。综合治疗9～12个月后CK-19 mRNA阳性率为10%（5/50）,与术前比较差异有统计学意义（P〈0.01）。外周血CK-19 mRNA阳性率与雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、CerbB2、p53状态无关。结论：CK-19 mRNA可作为检测乳腺癌患者外周血微转移的分子学标志物,有助于早期预测乳腺癌发生血道微转移,对指导治疗和评估预后具有重要意义。

CK-19、CK-20、CEA mRNA检测在乳腺癌患者外周血微转移的意义

目的:探讨外周血细胞角蛋白(cytokeratin CK)-19、CK-20以及CEA mRNA检测在乳腺癌诊治中的意义。方法:应用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测40例乳腺癌患者外周血CK-19、CK-20、CEAmRNA在术前、术后3d、术后14d(化疗前)、术后35d(化疗后)的表达,以健康志愿者及乳腺良性肿瘤各10例作为对照,统计分析手术及化疗后乳腺癌患者血循环肿瘤标志物的表达状况,同时根据CK-19的表达水平,分析影响乳腺癌外周血微转移的相关临床病理因素。结果:术前,乳腺癌组CK-19、CK-20、CEA mRNA阳性者分别为26例(65%)、20例(50%)、16例(40%),与对照组相比,3组P值均<0.01;手术后,3组阳性者分别为14例(35%)、10例(25%)、8例(20%),3组阳性率均较术前明显下降(P=0.013,P=0.037,P=0.023);化疗前3组阳性者分别为19例(47.5%)、15例(37.5%)、10例(25%);化疗后则为6例(15%)、2例(5%)、2例(5%),3组化疗后的阳性率亦有显著降低(P=0.003,P=0.001,P=0.025)。根据CK-19 mRNA表达水平,Logistic相关性分析,乳腺癌外周血微转移与淋巴结转移(P=0.0087)、TNM分期(P=0.0125)和病理类型(P=0.0451)有相关性。结论:CK-19、CK-20、CEA在乳腺癌患者外周血中有高表达,其表达状况高低与肿瘤负荷相关。乳腺癌外周血微转移相关性因素为淋巴结转移、TNM分期和肿瘤类型。

宫颈癌外周血CK-19mRNA的表达及临床意义

目的 以角蛋白CK 19为标记 ,测定宫颈癌患者外周血CK 19mRNA的表达和相关循环癌细胞的存在及其临床意义。方法 4 5例病理诊断为Ⅰ Ⅲ期的宫颈癌患者 ,以 35例妇科良性病变患者为对照组 ,用RT PCR分析其外周血CK 19mRNA的表达。结果 4 5例宫颈癌患者 ,其中 31例外周血CK 19mRNA表达阳性 ,35例对照组中无 1例表达CK 19mRNA。结论 宫颈癌外周血中的CK 19mRNA来自恶性宫颈细胞 ,外周血中CK 19mRNA的阳性表达是循环宫颈癌细胞的敏感指标之一 ,可作为宫颈癌预后的有价值的指标 ,对宫颈癌的合理治疗具有重要临床指导意义。

检测CK19 mRNA、CEA mRNA诊断非小细胞肺癌外周血微转移

目的 探讨检测细胞角蛋白 (cytokeratin 19,CK19)mRNA、癌胚抗原 (cancerembryonicantigen ,CEA)mRNA诊断非小细胞肺癌 (non smallcelllungcancer ,NSCLC)患者外周血微转移的临床意义。 方法 应用RT PCR法检测 3 5例NSCLC患者外周血中的CK19mRNA、CEAmRNA ,并以 2 0例良性病变、2 0例健康人作对照。结果 3 5例NSCLC患者外周血CK19mRNA、CEAmRNA阳性表达率分别为 40 %和 5 7%,两者均阳性者 40 %,两者均阴性者 43 %;肺良性疾病患者 2 0例 ,CK19mRNA阳性 2例 ( 10 %) ,无CEAmRNA阳性者 ;2 0例健康对照 2个指标检测结果均为阴性。随访发现CK 19mRNA阳性、CEAmRNA阳性和二者均阴性患者的远处转移率分别为 5 0 %、5 6%和 2 7%。结论 CEAmRNA和CK19mRNA是检测肺癌患者外周血微转移的良好标志物 。

检测胃癌患者腹腔冲洗液CK19 mRNA和CEA mRNA用于预测腹膜微转移

目的探索检测胃癌患者腹膜微转移的方法。方法收集67例胃癌和9例胃良性病变患者腹腔冲洗液以及临床病理资料,分别采用巢式RT PCR检测腹腔冲洗液中角蛋白19(CK19)mRNA、癌胚抗原(CEA)mRNA、角蛋白20(CK20)mRNA表达;采用时间分辨荧光(TRF)检测腹腔冲洗液上清液中CEA蛋白(P CEA)含量;采用H E染色进行腹腔冲洗液细胞学(PLC)检查。结果患者腹腔冲洗液中CK19mRNA和CEAmRNA的阳性检出率分别为62.7%和52.2%,明显高于P CEA(35.8%)、CK20mRNA(34.3%)和PLC(31.3%)(P<0.01),且阳性率随肿瘤浸润深度、TNM分期及腹膜受累程度增加而增加。结论巢式RT PCR联合检测胃癌患者腹腔冲洗液中CK19及CEA基因,可提高检测腹腔游离肿瘤细胞的灵敏性,适用于预测胃癌患者腹膜微转移。

CK19 mRNA在45例乳腺癌患者外周血中的表达

目的检测CK19 mRNA在乳腺癌外周血中的表达情况,并探讨其与临床病理因素的相关性。方法采用RT-PCR技术检测45例术前乳腺癌患者、30例乳腺良性病变患者外周血中CK19 mRNA的表达情况。结果 CK19 mRNA在乳腺癌患者中阳性率为62.2%,在30例乳腺良性患者中阳性率为3.3%。乳腺癌患者和良性病变患者比较差异有统计学意义(P<0.01)。CK19 mRNA阳性率与临床分期、淋巴结转移均有关,二者表达呈正相关(P<0.01)。与ER、PR无显著相关性。结论乳腺癌患者外周血中CK19 mRNA显著高于乳腺良性病变者。

胸腔积液中hTERT mRNACEA CA19-9检测及其意义

目的:探讨人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)、CEA、CA19-9在鉴别诊断良恶性胸腔积液的意义。方法:采用全自动化学发光法检测胸腔积液中CEA、CA19-9含量及RT-PCR检测胸腔积液中hTERT mRNA表达。结果:恶性组中hTERTmRNA、CEA、CA19-9阳性率显著高于良性组(P<0.05)。三者在恶性胸腔积液的敏感性(%)、特异性(%)和诊断符合率(%)分别为:hTERT mRNA:81.8/90.5/86.1,CEA:52.3/92.9/72.1,CA19-9:34.1/90.5/61.6。hTERT mRNA+CEA在恶性胸腔积液中诊断阳性率97.7%。结论:三者均有助于良恶性胸腔积液的鉴别诊断,而hTERT mRNA对于鉴别良恶性胸腔积液有更大的临床价值,CA19-9不宜作为首选指标;hTERT mRNA和CEA联合检测可以进一步提高恶性胸腔积液的阳性检出率,有助于提高其诊断价值。

宫颈癌患者淋巴结CK19mRNA的检测及其临床意义

背景与目的：采用RT—PCR技术检测CK19（cytokeratin 19）mRNA的转录，可在部分恶性肿瘤患者中检测到常规病理学方法不能检测到的隐性微转移。本研究旨在检测宫颈癌患者盆腔淋巴结组织特异性标志物（CK19mRNA）的表达，并探讨其临床意义。方法：采用RT—PCR技术检测Ⅰ～Ⅱ期宫颈癌患者盆腔淋巴结CK19 mRNA的转录。生存曲线用Kaplan—Meier转录。生存率比较采用Log—rank检验。结果：32例宫颈癌患者共检测淋巴结标本206枚，经常规病理组织学方法检测到24枚淋巴结有癌转移，阳性率为12％（24／206）；经RT—PCR法检测到44枚淋巴结表达CK19 mRNA，检出率为21％（44／206）。RT—PCR法与常规病理组织学方法比较，差异有显著性（P〈0．01）。常规HE染色阴性的182枚淋巴结中，29枚检测到CK19mRNA的特异性条带，微转移的检出率为15．9％（29／182）。低分化患者的淋巴结CK19检出率为87．5％（7／8）显著高于中～高分化患者的检出率33．3％（8／24）（P〈0．05）。而淋巴结CK19的检出率与年龄、临床分期、组织学类型、宫颈肿瘤大小、肌层浸润深度、宫旁浸润、脉管癌栓均无明显关系（P〉0．05）。淋巴结CK19 mRNA阳性患者的4年无瘤生存率为58％；而淋巴结CK19 mRNA阴性患者的4年无瘤生存率为76．5％，差异无显著性（P〉0．05）。结论：与传统的病理组织学比较，采用RT—PCR技术检测CK19 mRNA转录能显著提高淋巴结微转移的检出率，预后判断有待增大病例数进一步研究。

早期宫颈癌患者外周血CK19和CK20mRNA的检测及临床意义

目的:研究早期宫颈癌患者外周血中CK19、CK20 mRNA的表达及其临床意义.方法:采用RT-PCR法术前检测250例ⅠA～ⅡA期宫颈癌患者和50例妇科良性肿瘤患者及18名健康自愿者外周血中CK19、CK20 mRNA的表达,并分析其与临床病理因素的关系.结果:250例早期宫颈癌患者外周血中CK19、CK20 mRNA的阳性表达率分别为36%和24%,而在妇科良性肿瘤中分别为3.0%和0%,18例健康自愿者无一例表达CK19、CK20 mRNA阳性(P<0.01);CK19、CK20 mRNA的单独阳性表达率除与脉管瘤栓显著相关外(P<0.01),与宫颈癌的预后因素如分期、分化、组织类型、淋巴结转移、肿瘤大小均无关(P>0.05),而CK19、CK20mRNA双阳性表达与淋巴结转移和脉管浸润及近期盆腔外的转移显著相关(P<0.01).结论:外周血中CK19、CK20 mRNA的表达可以作为检测早期宫颈癌微转移的生物学指标,但对预后的意义有待于进一步研究.

肺癌患者外周血CK19mRNA、CEA、NSE、TPA联合检测的意义

背景及目的:细胞角蛋白作为检测循环癌细胞的指标,越来越得到人们的重视。CK19mRNA作为微转移检测的基因标记有较高的应用价值,但其特异性及敏感度都不够理想。本实验旨在评价外周血CK19mRNA与肿瘤标记物癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇酶(NSE)和组织多肽抗原(TPA)水平的联合测定对肺癌临床诊断的价值。方法:用逆转录多聚酶链反应法(RT-PCR)检测外周血有核细胞CK19mRNA的表达水平,采用酶联免疫吸附法(ELISA)和时间分辨荧光法(TRF)测定91例肺癌、33例良性肺病患者和50例健康人的血清CEA、NSE和TPA水平,数据统计用t检验和χ2检验分析。结果:肺癌组外周血CK19mRNA和血清CEA、NSE、TPA的阳性检出率(分别为49.5%、65.9%、67.0%、83.5%)明显高于良性肺病组(分别为24.2%、9.0%、15.2%、9.0%)和健康对照组(分别为10.0%、4.0%、8.0%、6.0%)(P<0.01)。在不同的组织类型中CK19mRNA阳性检出率无统计学差异。随着临床分期逐步升高,Ⅰ+Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期CK19mRNA的阳性检出率分别为44.4%、48.4%、54.2%呈上升趋势,但无显著性差异(P>0.05)。在Ⅰ+Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期血清CEA水平犤(μg/L)/阳性率(%)犦分别为3.5/27.8、5.1/35.5、8.5/58.3,血清NSE水平犤(μg/L)/阳性率(%)犦分别为12.5/33.3、15.3/41.9、24.7/58.3,血清TPA?