Cyclin-CDK-CKI及UPP参与生殖调控及在甲壳动物性腺发育中的研究进展

Cyclin-CDK-CKI是参与真核细胞周期调控的3个重要的调节因子。泛素蛋白酶体途径(ubiquitin proteasome pathway,UPP)是真核细胞内非溶酶体途径的蛋白质选择性降解的重要途径。细胞周期中许多时相特异性周期蛋白通过泛素化被周期性的降解对于细胞分裂的调控进程具有重要的作用。主要综述了Cyclin-CDK-CKI和UPP的组成、生理生化特性及其参与生殖调控的作用机制,同时阐述了这两大系统之间的联系及其在甲壳动物性腺发育中的研究进展。

CDKs和CKIs在胃癌细胞周期调控中的相关性

研究 CDKs和 CKIs在调节胃癌细胞周期进程中的作用表明 ,全反式视黄酸 ( ATRA)通过诱导细胞滞留在 G1/G0 期而抑制胃癌细胞生长 .Western blot分析显示 ,ATRA可上调 p2 1 waf1/ cip1的表达 ,而抑制 p1 6ink4 的表达 .免疫沉淀及活性测定表明 ,CDK2 激酶活性可被 ATRA抑制 ,而CDK4 活性先被诱导上升 ,2 4 h后逐渐下降 .另外 ,ATRA可以调节 Rb蛋白的磷酸化和 c- myc蛋白的表达 .由此证实 ,ATRA诱导胃癌细胞滞留于 G1/G0 期与其上调 p2 1 waf1/ cip1的表达和抑制CDK2 和 CDK4 激酶活性 ,进而抑制 Rb蛋白的磷酸化和 c- myc的表达有关 . Rb蛋白是 ATRA抑制胃癌细胞生长的下游调节因子 .另外 ,p1 6ink4 的功能在胃癌细胞中可能丧失 .

CKIp15^(INK4B)高表达对人黑色素瘤细胞cyclinD1和c-myc表达的影响及生长特性的改变

通过 DNA体外重组和转染技术 ,将已构建好的含有 p1 5基因的质粒 p XJ- 41 - p1 5转染 p1 5缺失的人黑色素瘤细胞 A 375,经 G 41 8筛选出阳性单克隆 ,并经 PCR、Western等检测 ,证明建立了 p1 5稳定高表达的细胞模型 .生长曲线和 FCM实验表明 ,与对照组细胞相比 ,实验组细胞增殖能力减弱 ,G1期细胞增加 ,S期细胞减少 .同时 ,细胞血清依赖性有所恢复 ,在软琼脂的集落形成能力下降 ,显示出细胞部分恶性表型逆转 .进一步免疫印迹实验表明 ,癌基因 c- myc的蛋白表达水平明显下降 .Cyclin D1的表达受到抑制 ,而 CDK4的表达则基本不变 .以上结果显示出 ,p1 5基因高表达能够抑制人黑色素瘤细胞的增殖及部分恶性表型 ,负调细胞周期进程 ,而 c- Myc蛋白和 G1期引擎分子 Cyclin D1表达的被抑制可能是 p1

CKIs蛋白在视黄酸诱导HL-60细胞分化中的作用研究

从细胞周期调控这一途径探讨视黄酸抑制细胞增殖、诱导细胞分化的分子机制。结果显示：５×１０－６ｍｏｌ／Ｌ全反式视黄酸（ＡＴＲＡ）及芳维甲（ＡＥ）处理的ＨＬ－６０细胞生长受抑，４ｄ后９０％细胞停滞于Ｇ０／Ｇ１期，Ｇ１→Ｓ期转换受阻，同时ＮＢＴ还原反应增强，ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ分析及免疫细胞化学染色表明处理后的细胞ｐ１６、ｐ２１两种细胞周期素依赖激酶抑制物（ＣＫＩｓ）表达增加，而ＣｙｃｌｉｎＤ１和ｐＲｂ蛋白则降低，其中尤以ＡＴＲＡ作用为明显。结果提示，细胞周期调控相关蛋白可能在视黄酸及其衍生物抑制细胞增殖、诱导细胞分化过程中起重要作用。

细胞周期的网络调控系统cyclins-CDKs-CKIs及其与肿瘤的关系

近年研究表明,CDK活性调节在细胞周期调控中起关键作用。CKI对CDK起抑制作用,因而在细胞周期调控中也起负性调控因子的作用。cyclins-CDKs-CKIs共同构成了一个对细胞周期进行调控的网络系统。在肿瘤发生机制中,CDK与CDK调节亚基cyclin有可能作为癌基因,而CKI有可能作为抑癌基因起重要作用。

细胞周期素依赖蛋白激酶抑制蛋白(CKIs)与肿瘤

细胞增殖失和细胞凋亡障碍癌变的根本原因。由细胞周期素（Ｃｙｃｌｉｎｓ）、细胞周期素依赖蛋白激酶（ＣＤＫｓ）、细胞周期素依赖蛋白激酶抑制蛋白（ＣＫＩｓ）等组成的细胞周期调控系统决定着细胞增殖周期中Ｇ１、Ｓ、Ｇ２、Ｍ期的转换，其异常便有可能导致恶性增殖。...

CKIs对人乳腺癌细胞侵袭转移的影响

目的利用CKI肽类似物抑制CDK激酶活性,以明确CKI对人乳腺癌细胞的作用,探讨其对乳腺癌细胞体外侵袭转移的影响。方法利用作用于CDK4/CDK6的CKI肽类似物p20和p21,分别干预人乳腺癌MDA-MB-231细胞株24h。然后应用细胞与纤维连结蛋白黏附实验测定肿瘤细胞黏附率,通过单层细胞划痕实验观察细胞转染前后迁移能力的变化,Transwell侵袭实验检测细胞体外侵袭力。结果人乳腺癌MDA-MB-231细胞株经CKI肽类似物p20和p21分别干预后,细胞黏附、迁移及侵袭能力明显减弱。结论 CDK4/CDK6激酶对乳腺癌侵袭转移过程具有重要的作用。CKI肽类似物可以抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的黏附、侵袭和迁移。因此CKI肽类似物可能阻抑肿瘤细胞的转移,显示此类细胞穿膜肽在恶性肿瘤治疗上的潜在作用。

拟南芥CKI1基因上游转录调控因子筛选及鉴定

拟南芥CKI1(cytokininindependent 1)是双组分信号系统中一个组氨酸激酶蛋白,通过作用于下游组氨酸磷酸转移蛋白激活双组分信号通路,在调控胚囊中央细胞命运分化和发育过程中具有重要作用。然而目前对于CKI1基因上游转录调控因子还知之甚少。本研究分析了不同长度的CKI1启动子在拟南芥胚囊中的活性,并利用酵母单杂交技术对CKI1上游转录调控因子进行了筛选和鉴定。结果表明,位于内含子区域中的F5/R2片段表现出与CKI1启动子全长相一致的表达活性。进一步选取3个串联重复的F5/R2片段用于构建诱饵表达载体,同时,选取拟南芥雌蕊构建cDNA文库,通过酵母单杂交筛选获得226个阳性克隆。去除低质量及冗余重复的序列后共获得66条可读序列,其中8条序列对应的基因编码具有DNA结合功能的蛋白。研究结果为进一步揭示CKI1基因的转录调控机制提供了重要参考信息。

从Cyclin E1-CDK2-CKIs通路探讨芪灵扶正清解方抑制肝癌细胞株Hep1-6增殖的作用机制

目的从周期蛋白Cyclin E1-细胞周期依赖性蛋白激酶2(CDK2)-CDKs抑制因子CKIs(Cyclin E1-CDK2-CKIs)信号通路角度探讨芪灵扶正清解方(QL)调控小鼠肝癌Hep1-6细胞株增殖的机制.方法体外培养Hep1-6细胞,分别给予不同剂量的QL醇提物(0、31.25、62.5、125、250、500、1000μg/mL)干预Hep1-6细胞株24h、48h和72h.MTT法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞周期各个时相的比例;Western blot检测CDK2、周期蛋白Cyclin E1、视网膜母细胞瘤Rb、磷酸化Rb(p-Rb)以及CDKs抑制因子(CKIs)p57^(KIP2)和p27^(KIP1)的蛋白水平.结果QL醇提物能显著抑制Hep1-6细胞的生长活力,呈剂量依赖性;Hep1-6细胞周期被阻滞在G0/G1期,S期的DNA合成被抑制;QL醇提物下调了CDK2、Cyclin E1、p-Rb的蛋白水平,上调了p57^(KIP2)和p27^(KIP1)的蛋白水平.结论QL方通过抑制CDK2与Cyclin E1的结合,同时正向调控CKIs抑制Cyclin E1-CDK2复合物的激酶活性,从两方面抑制下游Rb的磷酸化水平,进而有效抑制肝癌Hep1-6细胞的增殖.

CKI大连设立软件开发公司

CKI公司近日宣布，日冲信息（大连）有限公司正式成立并运营。新成立的日冲信息（大连）有限公司是冲信息株式会社在海外的第一个软件开发公司，除了从事面向中国打印机市场的产品开发，以及从事面向全球销售产品的软件开发外，同时还负责面向亚洲、大洋洲地区的彩色页式打印机、多功能一体机的本地化语言对应以及对特定用户的定制开发。

毫米波干预软骨细胞β-catenin活性作用机制研究

为了探讨毫米波干预软骨细胞β-catenin活性的作用机制,采集雄性4周龄SD大鼠膝关节软骨,采用机械-II型胶原酶消化,建立体外培养软骨细胞,甲苯胺蓝染色鉴定。第2代软骨细胞培养48h,用不含血清DMEM饥饿24h,更换为10%FBSDMEM,随机分为4组:正常组、实验1组(毫米波干预30min)、实验2组(毫米波干预60min)和实验3组(毫米波干预120min)。各实验组毫米波干预后,培养24h,II型胶原免疫组化观察各组软骨细胞的功能,RT-PCR检测β-catenin、GSK-3β、CKIεmRNA表达,WesternBlot检测β-catenin、GSK-3β、CKIε蛋白表达水平。结果表明,机械-II型胶原酶消化法,能够成功建立体外培养的软骨细胞,第2代软骨细胞培养3d,甲苯胺蓝染色可见软骨细胞内呈紫红色异染颗粒,细胞周围也出现紫红色异染颗粒,细胞核呈深蓝色,以圆形、椭圆形为主;干预前后,各组软骨细胞II型胶原免疫组化均可见胞浆呈棕黄色,核呈圆形不着色;实验2组、实验3组软骨细胞β-catenin、CKIεmRNA表达显著高于正常组(P<0.01),实验2组、实验3组软骨细胞β-catenin、CKIεmRNA表达显著高于实验1组(P<0.01),实验2组、实验3组软骨细胞β-catenin、CKIε蛋白表达水平显著高于正常组(P<0.01),实验2组、实验3组软骨细胞β-catenin、CKIε蛋白表达水平显著高于实验1组(P<0.01);实验2组、实验3组软骨细胞GSK-3βmRNA表达显著低于正常组(P<0.01),实验2组、实验3组软骨细胞GSK-3βmRNA表达显著低于实验1组(P<0.05),实验2组、实验3组软骨细胞GSK-3β蛋白表达水平显著低于正常组(P<0.01),实验2组、实验3组软骨细胞GSK-3β蛋白表达水平显著低于实验1组(P<0.01)。毫米波的能量可通过生物体的谐振而被吸收,生物系统谐振吸收电磁能量后又产生了不属于温度变化的生物学效应,干扰生物体的信号传导,动态调节软骨细胞的生物学功能,毫米波作用机制可能是通过诱导软骨细胞转录合成β-catenin、CKIε,抑制GSK-3β表达,从而促进β-catenin合成、抑制分解,提高软骨细胞内β-catenin的活性,并且能维持软骨细胞表型的稳定。

复方中药白龙对G_1期人胃癌细胞中抑癌基因的影响及与PKA信号通路的相关性

目的 :探讨复方中药白龙 (简称白龙 )对人胃癌BGC82 3G1期细胞周期蛋白激酶抑制因子(CKI) p16INK4a、p2 1以及Rb、c myc等基因转录的影响和cAMP PKA信号通路的调节关系。 方法 :通过实验室常规分子生物学手段 (细胞同步化、分子杂交———Northern杂交、Western杂交等 )检测相关基因的表达变化。结果 :白龙对G1期细胞p16INK4a表达有强烈促进作用 ,mRNA和蛋白水平均显著升高 ;处理细胞的同时加入PKA抑制剂阻断该信号通路后 ,白龙作用丧失 ,p16INK4a mRNA和蛋白水平明显下降 ;白龙还可以促进抑癌基因Rb、p2 1的mRNA表达和抑制癌基因c mycmRNA的表达 ;同样在白龙作用的同时阻断该信号通路 ,则白龙的上述作用随之丧失。结论 :白龙可以通过影响BGC82 3G1期细胞中众多抑癌基因 (包括p16INK4a、p2 1、Rb)和癌基因 (包括c myc)的转录发挥其抑瘤生理效应 ,而这种变化发生的机理是与cAMP PKA信号通路的调节机制密切相关的。

NGX6基因对人结肠癌细胞HT-29细胞周期的影响

NGX6基因是新克隆的候选抑瘤基因,研究表明NGX6重表达可抑制结肠癌细胞的增殖.为进一步研究NGX6对细胞周期的影响,采用流式细胞仪检测NGX6重表达对结肠癌细胞HT-29细胞周期的影响,发现NGX6重表达可增加HT-29细胞在G0/G1期的分布比例,减少了S,G2,M期细胞数.利用蛋白质印迹和流式细胞术分析NGX6转染前后HT-29细胞周期素(cyclins)和细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制物(cyclin-dependentkinaseinhibitor,CKI)的表达变化,发现NGX6可下调HT-29细胞中cyclinE、cyclinD1的表达及上调p27的表达,对cyclinA和cyclinB的表达无明显影响,p16在三组结肠癌细胞中均无表达.研究结果表明,NGX6在HT-29细胞中通过下调cyclinE、cyclinD1和上调p27的表达,阻滞细胞周期于G0/G1期,从而发挥其在结肠癌中的抑瘤作用.

知识与资本的互动:国际产学研战略联盟新模式

产学联盟已经成为国际关注的焦点之一,被认为是一种重要的创新模式。与全球著名的大学进行广泛合作是西门子的重要创新战略,使西门子形成了其独特的产学合作模式。本文通过对西门子与德国亚琛工业大学、慕尼黑工业大学合作CKI产学合作模式的分析,提出产学战略联盟的新模式——知识与资本的互动模式。在此基础上,提出了对我国产学战略联盟发展的启示和建议。

苯并芘对HELF细胞周期及相关基因表达的影响

背景与目的:探讨苯并芘(benzo[a]pyrene,BaP)影响人胚肺成纤维细胞(HELF)周期的途径和作用机制。材料与方法:用5μmol/L的BaP处理HELF细胞后,采用细胞计数,流式细胞仪检测BaP对细胞生长和周期的影响,用PCR和Western_blotting检测BaP对细胞周期相关基因mRNA和蛋白的影响。结果:BaP处理HELF细胞后,显著促进细胞的生长,在处理后第8d时细胞数目约增加50%(P<0.01),细胞体积增大,促进细胞由G1期向S期和G2/M期的转换。mRNA和蛋白检测结果显示:BaP处理细胞后可以促进p53、cyclinD1、CDK2、CDK4和p21mRNA及蛋白的表达(P<0.05或P<0.01),抑制cyclinEmRNA及蛋白的表达(P均<0.01),而对cyclinA和p27mRNA及蛋白表达没有明显影响(P均>0.05)。结论:BaP对HELF细胞周期的调控逃脱了p53_p21的关卡作用,而通过诱导cyclinD1、CDK2和CDK4的表达来加快细胞周期的进程,该途径为cyclinA和p27非依赖型。

细胞周期调控与白血病

细胞周期是细胞生命活动的基本过程,由细胞周期素(cyclin)依次激活相应的细胞周期蛋白激酶(CDK)推动,而多种细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(CKI)通过在不同的作用点抑制CDK活性,对细胞周期起着负调控的作用。本文就以上各个因素在细胞周期中的作用和白血病发病中以上各细胞周期因子的改变进行综述。

颌骨骨肉瘤中p^(27)的表达及意义

目的 :分析细胞周期素依赖激酶抑制物 (CKI)p2 7蛋白在颌骨骨肉瘤的表达及意义。方法 :采用免疫组织化学ABC法检测p2 7蛋白在 2 0例颌骨骨肉瘤和 8例骨软骨瘤中的表达。结果 :2 0 % (4 2 0 )的骨肉瘤中p2 7呈阳性表达 ,87 5 % (7 8)的骨软骨瘤呈p2 7阳性 ,阳性表达率与骨肉瘤相比有显著性差异 (p <0 0 5 )。结论 :p2

血管紧张素Ⅱ和血小板源生长因子对心肌细胞周期素和p27蛋白表达量的调节

目的：细胞周期素（ｃｙｃｌｉｎ）和ＣＤＫ抑制蛋白（ＣＫＩ）是对细胞周期起正性和负性调节作用的两类物质。ｐ２７蛋白是ＣＫＩ的一种，主要对细胞外部促进或抑制增殖的信号起反应。本文观察血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）和血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）对心肌细胞细胞周期素和ｐ２７蛋白表达量的影响。方法：培养的心肌细胞除血清２４ｈ使其处于静止状态，加入ＡｎｇⅡ１０－６ｍｏｌ／Ｌ、ＰＤＧＦ－ＢＢ２０ｎｇ／ｍＬ后不同时间收集细胞，用碘化丙啶（ＰＩ）标记细胞ＤＮＡ，以确定细胞所处的周期。用细胞周期素或ｐ２７蛋白的单抗和标记ＦＩＴＣ的二抗标记细胞，用流式细胞仪测定被激发出的荧光量来测定细胞周期素和ｐ２７蛋白表达的相对量。结果：ＡｎｇⅡ可促进细胞周期素的表达，但对ｐ２７蛋白的表达没有影响，不能促进心肌细胞增殖；ＰＤＧＦ明显促进心肌细胞细胞周期素的表达，也不能明显抑制ｐ２７的表达，也不能促进心肌细胞增殖。结论：细胞周期素的表达增加与心肌细胞能否进入细胞周期并不一致，ｐ２７蛋白是心肌细胞能否进入细胞周期并进行有丝分裂的重要调节因子。

细胞周期与抗肿瘤治疗展望

各类cyclins、CDKs、CKIs和chk等因素作为细胞周期的调控机制,对细胞的增殖、分化和凋亡具有关键的作用。肿瘤是一类细胞周期性疾病,它们可能会成为抗肿瘤药物的新靶点,达到治疗肿瘤的目的。