1例Ⅲ型Bartter综合征患儿CLCNKB基因复合杂合变异功能分析

目的分析1例Ⅲ型Bartter综合征患儿CLCNKB基因复合杂合变异的功能特性,探索囊性纤维化跨膜传导调节剂VX-809化合物对CLCNKB基因错义突变的挽救作用。方法回顾性分析2019年9月2日至南京医科大学附属儿童医院肾脏内科就诊的1例Ⅲ型Bartter综合征患儿的临床表现、生长发育情况、实验室检查结果及CLCNKB基因变异情况等。在人胚胎肾293细胞(HEK293)中分别转染野生型和变异型CLCNKB基因,并运用蛋白免疫印迹法检测各组ClC-Kb蛋白的表达水平,运用非配对t检验比较野生型与突变型之间蛋白表达的差异。同时,利用免疫荧光技术检测ClC-Kb的亚细胞定位,并使用囊性纤维化跨膜传导调节剂VX-809化合物处理过表达突变体的细胞。结果患儿为2岁个8个月的女性,表现为低钾血症、低氯血症、代谢性碱中毒、肾性盐消耗,高血压四项及血压均正常。基因检测结果显示患儿为CLCNKB基因复合杂合型变异。在HEK293细胞中转染2种突变(p.F213C和p.Y466Mfs*13)质粒,发现突变型ClC-Kb蛋白表达均低于野生型(P均<0.01),其中移码突变导致了一个低分子量带(~5.5×10^(4))。免疫荧光定位实验示p.F213C和p.Y466Mfs*13变异体滞留于细胞质内。VX-809处理p.F213C突变转染后的HEK293细胞后,可呈剂量依赖性地显著增加ClC-Kb蛋白的膜表达。结论CLCNKB基因2种变异体导致ClC-Kb蛋白表达降低和定位出现异常,VX-809化合物可在一定程度上纠正Ⅲ型Bartter综合征患儿CLCNKB基因变异体的蛋白表达缺陷,可能对于治疗Ⅲ型Bartter综合征有新的应用前景。

Ⅲ型Bartter综合征一家系遗传学分析和产前诊断

目的联合运用多种遗传学技术对1例Ⅲ型Bartter综合征家系进行致病突变分析和产前诊断。方法应用高通量捕获测序技术、MLPA、PCR-Sanger测序法对先证者进行Bartter综合征相关致病基因的检测及家系分析;明确遗传学病因后对已妊娠4个月的先证者母亲抽取羊水应用MLPA、PCR-Sanger测序法进行产前诊断。结果先证者CLCNKB基因存在c.del1389(A)纯合突变合并1-18号外显子杂合性缺失。家系分析显示这两种突变分别源自父亲和母亲。产前诊断结果显示胎儿与先证者基因型一致。结论 CLCNKB基因的c.del1389(A)纯合突变合并1-18号外显子杂合性缺失为先证者的病因,产前诊断可以预防该家系Bartter综合征患儿的再次出生。

经典型巴特综合征1例家系的临床及基因检测分析

目的报道1例临床诊断为巴特综合征病人的临床资料,进行基因检测明确诊断,同时检测其父母及妹妹的相关基因,并文献复习。方法分析2017年6月29日安徽医科大学第一附属医院内分泌科收治1例并诊断为巴特综合征(经典型)病人的临床特征、实验室检查结果以及基因全外显子组测序分析结果,并对该病人家属进行基因分析验证。检索并查阅相关文献,对巴特综合征的临床及突变基因类型进行总结。结果病人编码氯通道蛋白CLC-Kb的CLCNKB基因存在c.228A>C (外显子3)的纯合突变,结合该病人临床及基因检测结果明确诊断为巴特综合征(经典型)。家系分析显示其父亲母亲均存在该致病基因的杂合突变,病人的妹妹为该基因的野生型。结论对于临床拟诊为巴特综合征的病人,应积极对病人及家庭成员进行基因筛查,以求明确诊断和指导治疗。

CLCNKA和CLCNKB基因突变致婴儿巴特综合征1例报告及文献分析

巴特综合征(Bartter syndrome, BS)是由遗传基因突变或缺失引起的一种伴有电解质和内分泌紊乱的遗传代谢疾病,临床表现为呕吐、便秘、喂养困难、体重不增、生长发育迟缓等,实验室检查存在低钾血症、代谢性碱中毒、高肾素血症、醛固酮增多症等。BS属于常染色体隐性遗传病,发病率极低,所以诊断及治疗较为困难。近年来,随着基因检测等技术的进步,我国对BS的研究已取得了长足进步,越来越多的BS得以精准诊断。按照已知基因突变类型可将其可分为1型、2型、3型、4型、5型及Gitelman综合征,共6种类型,其中4型又分4a型及4b型。目前临床上的BS患儿以3型即经典型BS最常见。本文报告1例4b型巴特综合征(Bartter syndrome type 4b, BS4b)患儿,经过2次3人家系基因测序,发现患儿除Alport综合征外,还存在双等位基因CLCNKA和CLCNKB共同变异,患儿父母均为该类型基因缺陷携带者。患儿最终诊断为BS4b、Alport综合征,结合其患者特点、诊治经过等临床资料以及相关文献分析,以期为认识及诊治该病提供经验。

成人经典型Bartter综合征家系CLCNKB基因突变的研究

目的 分析1个成人经典型Barrier综合征家系CLCNKB基因突变特点.方法 用PCR方法对先证者CLCNKB基因19个外显子及侧翼序列进行扩增,PCR产物纯化后直接测序或构建T-A克隆测序检测其基因变异.结果 先证者CLCNKB基因表现为G433E和cDNA 753delG复合杂合突变.家系分析表明,杂合错义突变G433E来自父亲,杂合缺失突变cDNA 753delG来自母亲.患者弟弟携G433E,其妹妹正常.正常对照100条染色体中未发现同样变异.结论 在1个成人迟发经典型Bartter综合征家系中发现了CLCNKB基因2个突变位点,经检索文献及人类基因突变库（HGMD）,cDNA 753delG为新发现突变位点.

经典型Bartter综合征家系CLCNKB基因突变分析

目的研究一个经典型Bartter综合征家系CLCNKB基因突变情况。方法提取该家系各成员患者外周血淋巴细胞基因组DNA，应用PCR扩增CLCNKB基因全部外显子及侧翼序列，并直接测序检测突变。选取50例无亲缘关系的健康人作为对照。结果在患者中检测到1个杂合（错义）突变，其第4号外显子，第482位碱基T—G突变，造成第161位氨基酸由亮氨酸变为精氨酸（482T〉G，L161R）；家系中母亲为杂合突变（L161R杂合突变），父亲未发现突变；查阅国内外文献及人类基因突变数据库，L161R未见报道，属新发现的突变。结论发现了一种新的CLCNKB基因突变：L161R。

42例3型巴特综合征CLCNKB基因变异分析和基因型/表型研究

目的分析中国42例3型巴特综合征(Bartter syndrome type 3,BS3)患儿的CLCNKB基因变异,探讨基因型与临床表型的特点。方法42例经基因检测确诊的BS3病例来自2012年6月至2018年10月青岛大学附属医院和青岛大学附属市立医院收治的患儿,分别来自40个汉族家系和1个回族家系。采用二代测序和多重连接酶探针依赖扩增(MLPA)技术分析BS3患儿的CLCNKB基因变异及其特点。收集患儿临床资料,观察和随访药物治疗疗效和生长发育改善的情况。根据基因变异的严重程度将患儿分为2组:严重变异基因型组(严重变异组,n=26)和轻度变异基因型组(轻度变异组,n=12)。比较两组患儿的临床表型特征。结果42例BS3患儿的二代测序和MLPA分析共确定CLCNKB基因36个变异,其中16个为新发现变异。CLCNKB基因大片段缺失频率高达55%,全基因缺失达40%,全基因缺失是最常见的基因突变类型。患儿最常见的临床表现为生长迟缓(38/42)、多饮多尿(35/42)、便秘(31/42)和呕吐(27/42)。42例患儿均表现为低钾低氯代谢性碱中毒。经氯化钾和吲哚美辛为基础的药物治疗后,大部分患儿的生长发育和电解质紊乱得到明显改善。与轻度变异组相比,严重变异组表现出更严重的代谢性碱中毒。结论本研究发现CLCNKB基因36个变异,其中16个为新变异,丰富了人类基因突变库,为BS3的诊治以及中国巴特综合征人群遗传咨询的开展提供了有益的借鉴。

CLCNKB基因突变致巴特综合征1例报告及文献复习

1962年Bartter等因首先报道了2例非裔美国人[1]有代谢性碱中毒、醛固酮增多症、肾小球旁器增生等异常表现,而得名巴特综合征([2]Bartter’ssyndrome,BS)。它是一种遗传性肾小管疾病,主要表现为低钠血症、低钾血症、代谢性碱中毒、高肾素血症,而血压正常或偏低[3]。BS的主要发病机制是髓袢升支粗段上参与Nacl重吸收的转运蛋白功能缺陷,即Na-K-2Cl协同转运蛋白(NKCC2)、顶端钾离子通道(ROMK)或基底外侧氯离子通道(CLCNKB)[4]缺陷。该病是一种常染色体隐性遗传病,多年来,一些表型和基因型变异的BS已被确认[5]。笔者医院确诊1例CLCNKB基因突变所致巴特综合征,现报告如下。

Bartter综合征CLCNKB基因缺失突变1例报告

Bartter征（Bartter syndrome，BS）临床多表现低钾性碱中毒、血压正常或偏低、高肾素血症、高醛固酮血症，部分患儿出现高钙尿症导致肾脏钙化。其发病机制主要由控制肾小管离子通道的基因突变所致，据目前已知的基因突变将其分为I-v型Bs和Gitelman综合征（Gitelman Syndrome，GS）。本文报道1例确诊为CLCNKB基因缺失突变的BS。

CLCNKB基因在经典型Bartter综合征发病机制中的作用

Bartter综合征是一种以低钾性碱中毒、高肾素-血管紧张素-醛固酮血症等为特征的遗传代谢性疾病。经典型Bartter综合征是Bartter综合征的常见类型,主要由编码位于基底膜侧的电压门控氯离子通道蛋白ClC-Kb的CLCNKB基因变异所致。该病各年龄段均可发病,主要见于儿童期,临床表现多变,从严重到非常轻微。本文综述了经典型Bartter综合征致病基因CLCNKB及其编码蛋白ClC-Kb的结构与功能,阐释了CLCNKB可能的变异机制,回顾了中国人群CLCNKB基因变异情况并对基因型-表型的相关性进行简单阐述。

Bartter综合征二例家系报告与CLCNKB基因突变分析

目的探讨儿童Bartter综合征的临床特点及CLCNKB基因突变分析。方法分析两个无血缘关系的Bartter综合征家系先证者及其家庭成员的临床资料,应用过柱法提取外周血DNA,针对Bartter综合征相关突变基因的外显子编码区设计引物、扩增,对PCR产物进行直接测序,与美国生物技术信息中心中的正常序列进行BLAST比对,从而发现可能存在的基因突变,最后多重连接探针扩增技术检测是否存在大片段缺失。结果两例家系的先证者检测均示:低钾血症、碱中毒、高肾素血症、高醛固酮血症。家系1先证者发现CLCNKB基因1~3、5~6、8、10~11、13~15、17~19号外显子大片段纯合缺失,分别遗传自父母;家系2先证者发现CLCNKB基因1~3、5~6、8、10~11、13~15、17~19号外显子大片段缺失与c.1881delC(p.Thr628fs)的复合杂合突变,分别遗传自父母。结论 c.1881delC(p.Thr628fs)为移码突变,该变异国内外尚未见报道。CLCNKB基因突变为2个Bartter综合征家系的致病原因,确诊为Ⅲ型Bartter综合征,临床分型属于经典型。临床上可通过分子遗传学技术进行Bartter综合征的基因诊断,提高确诊率,及时治疗。

中国16例巴特综合征基因突变分析和治疗随访研究

目的对中国16例可疑巴特综合征（Barttersyndrome，BS）患者进行基因突变分析和治疗随访研究。方法通过二代测序和多重连接酶探针依赖扩增（MLPA）的方法进行突变分析。分析患者临床表现及生化特点，随访患者病情变化。结果共确定CLCNKB基因15个突变位点，其中11个新突变位点；SLC12A1基因新发现1个错义突变和1个小缺失突变；CLCNKA基因新发现1个大片段缺失突变；BSND基因发现1个已报道过的错义突变。CLCNKB全基因缺失为最常见的突变（32％），而大片段缺失突变频率高达50％。最常见的临床表现为多饮多尿（15／16）和发育迟缓（15／16），16例患者均为低钾低氯性代谢性碱中毒。吲哚美辛对生长发育有明显的改善作用。结论本研究共发现19个突变位点，其中14个新突变位点，丰富了人类基因突变库，并为中国人群遗传咨询和基因诊断的开展提供有益的借鉴。

三例Gitelman综合征患者临床特点及基因突变分析

收集3例Gitelman综合征（ GS）患者的临床资料,并提取患者的外周血单个核细胞基因组DNA,应用PCR扩增SLC12A3基因及CLCNKB基因的所有外显子及侧翼内含子区域并直接测序。3例患者均表现为反复低血钾、低血镁、低尿钙、低氯性代谢性碱中毒,但血压均正常。基因测序结果显示患者2 SLC12A3基因的23号外显子存在1个新的点突变p. L891V；患者1和患者3 CLCNKB基因分别存在7种和12种多态性位点,但均未在SLC12A3和CLCNKB基因发现突变位点。

1例Bartter综合征的家系基因突变分析和产前诊断

目的对1例Bartter综合征的家系进行相关致病基因突变分析和产前诊断。方法应用高通量捕获测序技术、PCR-Sanger测序法从基因组水平对先证者进行Bartter综合征相关致病基因的检测及家系分析;明确遗传学病因后进一步对已妊娠5个月的先证者母亲抽取羊水进行产前诊断。结果先证者编码氯通道蛋白CLC-Kb的CLCNKB基因存在c.88C>T(p.Arg30*)和c.968+2T>A复合杂合突变,其中c.88C>T(p.Arg30*)为已报道的致病突变,c.968+2T>A为新突变。家系分析显示这两个突变分别源自其母亲和父亲。产前诊断结果显示胎儿未遗传其父母的突变,为两个位点均正常的健康个体,随诊显示出生的婴儿健康,证实了基因诊断及产前诊断的准确性。结论 CLCNKB基因的复合杂合突变c.88C>T(p.Arg30*)和c.968+2T>A为先证者的病因,产前诊断可以预防该家系Bartter综合征的再发风险。

3例Gitelman综合征患者临床特点和基因突变分析及文献总结

目的分析3例Gitelman综合征患者临床表型以及基因突变类型,总结Gitelman综合征的临床特点。方法收集2016年1月—2017年1月浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院收治的3例Gitelman综合征患者的临床资料,并提取患者外周血单个核细胞基因组DNA,首先通过高通量测序法寻找与低钾血症相关的36个基因所有外显子的突变位点,再通过直接测序法对患者及其父母验证。同时在万方数据库和中国知网检索经过基因突变分析确诊的Gitelman综合征,比较不同基因突变型的血钾和血镁的差异。结果 3例患者均表现为反复低钾血症、代谢性碱中毒、高肾素、正常血压,其中只有第2例有明显的低镁血症。基因测序结果显示病例1为SCL12A3基因复合杂合突变,病例2为SCL12A3基因纯合突变,病例3为SCL12A3杂合突变联合CLCNKB杂合突变。经检索共有79例临床资料完整的Gitelman综合征病例纳入分析,结果提示不同基因突变型之间血钾和血镁差异无统计学意义。移码和无意义突变与其他突变相比血钾和血镁差异无统计学意义。血镁降低组的血钾较血镁正常组偏低。结论 Gitelman综合征临床表型多样,异质性明显,最终确诊仍需要基因突变分析。不同突变之间血钾和血镁差异无统计学意义,血镁降低者临床表型较重。