交联草酸脱羧酶聚集体的制备及其性质

为了获得缓解泌尿系统草酸盐结石病症的酶制剂,用无载体固定化方法——交联酶聚集体(CLEAs)制备交联草酸脱羧酶聚集体。使用基因工程菌E.coli BL21(DE3)/pET32a/YvrK诱导表达制备草酸脱羧酶粗酶液,用30%的乙醇进行沉淀分离提纯,纯化倍数为2.7倍,酶活回收率91.2%;在戊二醛添加量为0.06%、pH5、牛血清白蛋白添加量0.5g/L、4℃的条件下处理该酶2h,得到交联草酸脱羧酶聚集体(oxdc-CLEAs),酶活回收率达95.4%;酶学性质研究表明,相对游离草酸脱羧酶,交联草酸脱羧酶聚集体的耐酸性、耐热性、耐胰蛋白酶降解能力均有提高。

交联海藻糖合酶聚集体的制备及其性质

采用交联酶聚集体(CLEAs)技术制备交联海藻糖合酶聚集体,研究不同沉淀剂、酶与交联剂浓度比例、交联强度及硼氢化钠还原处理对海藻糖合酶CLEAs活性的影响及其结构特征与反应性能。结果表明:采用质量浓度为10mg/mL的酶以质量浓度为30mg/mL的聚乙二醇(PEG)为沉淀剂,以体积分数为0.5%的戊二醛室温交联2h,再以硼氢化钠还原处理后,制备得到的海藻糖合酶CLEAs最适催化温度为70℃,比游离酶提高20℃,最适pH值为7.0,与游离酶相比,CLEAs的温度及pH值稳定性均得到提高,对Zn2+、Cu2+、Fe2+、Al3+金属离子的抗性明显增强。微观形貌分析表明单个海藻糖合酶聚集体粒径在0.2～0.5μm,众多聚集体以"脚手架"结构形成大小不一的集簇。

交联果胶酶聚集体的制备及其对罗布麻的脱胶效果

运用交联酶聚集体技术对枯草芽孢杆菌FM208849所产的果胶酶进行固定化,将制得的交联果胶酶聚集体用于罗布麻皮脱胶。结果表明,以体积分数为4%的戊二醛溶液在30℃水浴中对果胶酶聚集体交联135min,可以得到性能优异的交联果胶酶聚集体;利用5mL的10mg/mL果胶酶CLEAs悬浮液对沤麻液(含罗布麻皮1g)在45℃水浴中脱胶8h,可以使其残胶率降至4.61%;利用交联果胶酶聚集体对沤麻液进行10次脱胶实验后,其残胶率仍可保持在11.25%以下,可重复利用性较高。

交联β-葡萄糖苷酶聚集体的制备及应用

交联酶聚集体(CLEAs)是一种新型的无载体固定化方法。本研究利用该法对来源于西梅籽的β-葡萄糖苷酶进行了固定化研究。优化了制备交联β-葡萄糖苷酶聚集体的条件,并探讨其在丙基β-D-葡萄糖苷合成中的应用。研究发现,最适的沉降剂及其比例、最适交联剂(戊二醛)浓度以及交联时间分别为正丙醇、2/1(V/V)、10 mmol/L和2 h。在最适条件下,正丙醇-CLEAs的活力回收达84%。该固定化酶催化丙基β-D-葡萄糖苷合成反应96 h后,收率为60%。

RBCA和CLEA模型在某重金属污染场地环境风险评价中的应用比较

应用美国的RBCA模型和英国的CLEA模型对某重金属污染场地中的4种主要重金属污染物As,Cd,Pb和Zn进行健康风险评价,并利用克里格插值方法初步分析了案例场地中风险的空间分布特征.结果表明,RBCA和CLEA模型各有其优缺点,应根据场地的实际情况选择模型进行风险评价.该场地重金属污染的非致癌风险主要来自Pb和Cd,致癌风险主要来自As.尽管w(Zn)很高,但其风险很低,远低于可接受的风险水平.分别应用2种模型计算的风险在大部分情况下基本一致,尽管有一些差异,但均在同1个数量级之内.对于部分采样点的Cd的风险,2种模型的计算结果相差2个数量级,致使总非致癌风险的计算结果差异很大,这主要是由于2种模型在暴露途径的选取上的差异所致.从暴露途径的贡献率来看,地下水摄入途径引起的风险较高,贡献率为50%以上;蔬菜摄入途径引起的风险贡献率为20%左右.风险的空间分布也由于2种模型在暴露途径的选取上存在差异而表现出一定的不同.

浑蒲污灌区表层土壤中多环芳烃的健康风险评价

采集了辽宁省浑浦污灌区8个点位的表层土壤样品并分析了样品中16种多环芳烃(PAHs)的含量,根据毒性当量因子(TEF)方法和污染土地暴露评价模型(CLEA模型)对PAHs的健康风险进行了评价。结果表明,污灌区各采样点∑PAHs含量为120-1066ng·g-1DW,旱地的∑PAHs含量高于水田。旱地采样点中,离浑河最近的一个点达到严重污染,其余采样点为轻微污染到无污染。各采样点PAHs的致癌风险值为6.5×10-8-9.6×10-6,从人群受体来看,对儿童的致癌风险高于妇女。各采样点的致癌风险排序为Ⅳ-1(旱)>Ⅲ-2(水)>Ⅳ-2(水)>Ⅰ-1(旱)=Ⅲ-1(旱)>Ⅱ-2(水)>Ⅰ-2(水)>Ⅱ-1(旱),均没有超过癌症风险水平上限(10-4),说明癌症风险尚在可接受范围内。

用RBCA和CLEA模型推导土壤中苯并[a]芘的标准值

我国现行土壤环境质量标准中尚未包含苯并[a]芘(B[a]P).分别应用2种国际上认可的RBCA和CLEA模型,获取了土壤中B[a]P的标准值,并对2种模型的计算结果和取值进行了比较.结果表明,在目标风险水平设定为10-5时,RBCA和CLEA模型计算的住宅用地土壤B[a]P标准值分别为0.83和1.21 mg/kg;工业用地标准值分别为4.10和26.30 mg/kg.2种模型住宅用地的标准差异不大,且与其他国家的标准水平基本接近;工业用地的标准差异较大,其中RBCA模型的结果更接近于其他国家标准,而CLEA模型的结果则明显偏高.造成2种模型计算结果差异的原因主要来自于两方面,即模型的方法原理不同导致的暴露量计算差异以及采用的毒理学数据来源不同导致的数据水平差异.2种模型暴露途径解析的结果均表明,经口摄入和皮肤接触是土壤污染物B[a]P人体暴露的主要途径,而口鼻吸入导致的暴露量很小.

RBCA、CLEA及CalTOX模型在苯并[a]芘污染场地健康风险评估中的应用比较

为探讨不同模型对污染场地健康风险评估结果的影响,以苯并[a]芘为例,采用RBCA、CLEA和CalTOX模型对某工业污染场地表层土壤进行健康风险评估,分析了评估结果的差异和原因,同时对模型的主要暴露参数进行了敏感性分析,并推导出基于风险概率分布的土壤修复限值。结果表明,RBCA、CLEA和CalTOX模型计算的苯并[a]芘致癌总风险分别为2.40×10-4、6.32×10-4和7.04×10-6,且经口摄入和皮肤接触2个途径对人体健康造成的危害最大。降解作用是影响CalTOX模型风险评估结果不同于RBCA和CLEA模型的重要因素,3个模型间参数取值及方法学的差异也会导致风险评估结果不同。各模型暴露参数的敏感性排序也有差异。采用基于风险概率分布的方法推导土壤修复限值,RBCA、CLEA和CalTOX模型所得结果分别为0.18、0.08、0.13(不考虑降解作用CalTOX模型)和10.74(考虑降解作用CalTOX模型)mg·kg-1,为各模型直接推导值的1.5～2.6倍。基于风险概率分布的方法可有效降低风险评估过程中参数不确定性的影响,为工业污染场地土壤修复值的制定提供参考。

RBCA和CLEA模型在某污染场地健康风险评价中的对比研究

以某有机污染场地为例,对比分析了RBCA和CLEA模型评价原理和方法,并通过毒理学方法分析了评价结果与污染场地实际情况的符合程度。研究表明,两种模型在评价方法、适用范围方面存在差异,RBCA模型适合需要综合考虑污染物在水、土、气中迁移转化的污染场地健康风险评价;CLEA模型适合以摄入污染场地种植植物为主要暴露途径的健康风险评价。

典型城镇工业污染场地环境风险评估

研究根据场地环境风险评估方法对于城镇化初始居民的适用性,提出了基于增加蔬菜摄入暴露途径的改进风险评估技术方法,并以天津市某污染场地为例,比较两种方法计算结果。结果显示利用改进方法计算得到风险结果显著高于现有导则方法,其中蔬菜摄入暴露途径对于评估结果的贡献率高达38.38%。说明导则方法忽视蔬菜摄入暴露途径将造成风险评估结果偏低,改进方法更适用于现有典型城镇的场地风险评估。

一株斜纹夜蛾核型多角体病毒毒力及基因组酶切的研究

一株斜纹夜蛾核型多角体病毒毒力及基因组酶切的研究王晓容，刘明富，刘润忠，兰萍章，张友清（中国科学院武汉病毒研究所，武汉４３００７１）关键词斜纹夜蛾，核多角体病毒，毒力测定，限制酶分析斜纹夜蛾（Ｓｐｏｄｏｐｌｅｒａｌｉｔｕｒａ）是重要的农业害虫之一。关...

一种面向社保领域的数据清洗整合系统架构

昆明市社会保险管理系统包括医疗、养老、失业、工伤和生育五大业务子系统,由于信息化建设进程的前后不一致导致五大业务子系统之间数据的不一致;因此对五险数据进行清洗与整合、建立五险公共数据库势在必行。针对社保领域的数据质量问题,设计了数据清洗整合系统架构;该系统架构分为五个层次,分别是公共交易数据库层、同步数据层、数据清洗与整合层、公共数据库层、报表展现层。

手术内固定与中药外敷熏洗治疗跟骨关节内骨折

对26例跟骨关节内骨折的患者,采取了手术内固定与中药外敷熏洗相结合进行治疗,优良率达93.3%。

介孔纳米孔道中单维交联酶策略固定青霉素酰化酶

为解决酶固定化过程中稳定性较差的问题,将单维交联酶策略引入青霉素酰化酶的固定化中,通过在介孔泡沫硅载体(MCFs)表面初步吸附作用将酶固定,再用对本醌对酶分子进行交联,从而制得单维交联酶聚体。实验结果显示:单维交联酶聚体(CLEA)的稳定性有明显提高,最适温度从游离酶的45℃上升到55℃,催化温度的适用范围更宽,在50℃下热处理25 h仍保持74.4%活力,在测试操作稳定性方面,连续操作15次,其酶活保持在61.9%。

卵巢上皮性癌组织APE1和P53的表达及其耐药性

目的:探讨脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(APE1)基因和P53在卵巢上皮性癌中的表达相关性,探讨两者与卵巢癌化疗耐药的相关性.方法:应用免疫组织化学法对原发性卵巢癌组织120例中脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(APE1)和P53表达状况进行测定.结果:P53表达与APE1表达强度和亚细胞定位无相关性(P>0.05).APE1/p53不同表达状态的卵巢癌组织对铂类为基础的化疗敏感性有统计学差异(P<0.05).结论:APE1和P53在铂类的耐药性产生过程中发挥重要作用,对预测化疗药物敏感性具有一定的临床指导价值.

丹参酮ⅡA磺酸钠对LPS引起的HUVEC功能异常和凋亡调控作用的研究

目的:研究丹参酮ⅡA磺酸钠(sodium tanshinoneⅡA sulphonate,STS)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)引起的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)功能异常和凋亡的调控作用。方法:将第6~8代处于对数生长期的HUVEC按如下分组给予处理:DMEM组、LPS(1.0μg/mL)处理组、高浓度(50.0μg/mL)STS预处理组、中浓度(25.0μg/mL)STS预处理组和低浓度(12.5μg/mL)STS预处理组。其中,各STS预处理组均先以对应浓度的STS预处理HUVEC 2 h,再加入1μg/mL LPS进行刺激。处理24 h后,CCK-8法测定细胞活力;流式细胞术检测细胞增殖;ELISA法检测细胞培养上清中炎症因子白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)的蛋白浓度;Western blot法检测细胞裂解液中IL-1β和凋亡相关分子cleaved caspase-9和cleaved caspase-3的表达,以及细胞核蛋白中核因子κB-p65(nuclear factor-κB-p65,NF-κB-p65)的水平。此外,划痕实验检测HUVEC的迁移能力;光镜观察细胞形态变化;DAPI染色显示细胞核染色质的改变;Annexin V/PI双染法检测HUVEC的凋亡情况。结果:与DMEM相比,LPS处理导致HUVEC活力和迁移能力减低,但促进其增殖;IL-1β和NF-κB p65蛋白水平升高;cleaved caspase-3和cleaved caspase-9表达增高并伴有凋亡水平提高(P<0.05)。STS预处理能够以浓度依赖的方式部分或完全逆转LPS引起的上述现象(P<0.05)。结论:STS能够通过浓度依赖的方式抑制LPS引起的HUVEC功能异常和凋亡,对血管内皮起到保护作用。

关于推行清洁生产有关问题的探讨

阐述了清洁生产是可持续发展战略思想的具体体现 ,是实现可持续发展战略的必由之路。并提出了推行清洁生产的一些建议和设想。

基于DNA条形码和PCR-RFLP技术的进口紫草ITS2序列特征研究

目的:基于DNA条形码和PCR-RFLP技术研究进口紫草ITS2序列的特征,为市场紫草药材和饮片的质量控制与真伪鉴别提供参考依据。方法:选用ITS2区域作为对进口紫草和紫草对照药材进行比较、鉴定的DNA条形码序列,并基于DNA条形码和PCR-RFLP技术比较不同来源进口紫草的ITS2序列与紫草对照药材的异同。结果:39份进口紫草样品经限制性内切酶AluI酶切后,其产物的琼脂糖凝胶电泳检测结果显示,仅DH3在500 bp左右有条带,而在100~300 bp无条带,其余样品均在100~300 bp有2条或3条明显条带;进口紫草样品与紫草对照药材的ITS2序列进行比对,其中样品DH3与紫草对照药材的碱基差异最多,有15个碱基差异,样品F2与紫草对照药材的ITS2序列一致,其他进口紫草样品与紫草对照药材的碱基差异为1~9个碱基;从聚类结果中可以看出进口紫草样品DH3与其他进口紫草样品和紫草对照药材均明显区分,独自为一枝,而与紫草对照药材共同聚为一枝且支持率≥50%的样品共有14个。结论:选用ITS2区域,基于DNA条形码和PCR-RFLP技术,比较了进口紫草与紫草对照药材ITS2序列的异同,为紫草药材及饮片的有效鉴定提供参考依据,为紫草药材的市场监管提供有力保障。

添加纳米粒子对脂肪酶交联酶聚集体活性及结构的影响

将纳米TiO2、纳米MgO和纳米Cu分别引入假丝酵母脂肪酶(Candida sp.1619)的交联酶聚集体(CLEAs)制备过程,获得相应的纳米粒子-CLEAs,采用傅里叶变换红外光谱仪(FTIR)、扫描电子显微镜(SEM)、激光粒度分析仪(SLP)等分析了纳米粒子对CLEAs活性和结构的影响。结果表明与未加纳米粒子的CLEAs相比,适量纳米TiO2的加入可提高CLEAs的酶活,最大增加15.2%;而不管添加浓度大小,纳米MgO、纳米Cu对CLEAs酶活均有抑制作用,酶活下降63.7%~97.9%。SEM、SLP分析结果表明,与未添加纳米粒子时相比,加入纳米TiO2的CLEAs粒径变小,粒度较均匀,孔道增加;而纳米MgO-CLEAs和纳米Cu-CLEAs则出现粒度不均匀性增加、粒径范围扩大、孔道减少的现象。FTIR分析结果表明,加入3种纳米粒子后CLEAs二级结构中有序结构(α-螺旋、β-折叠)/无序结构(β-转角、无规则卷曲)值显著提高,顺序为纳米TiO2-CLEAs(0.55)>纳米MgO-CLEAs(0.43)>纳米CuCLEAs(0.35)>CLEAs(0.28),这与纳米粒子-CLEAs酶活顺序不一致,表明纳米粒子可能还存在其他影响CLEAs酶活的途径。

在线等离子清洗技术的应用

等离子清洗处理能有效清除氧化铟锡(ITO)玻璃表面的有机污染物,活化表面,增加玻璃表面附着力。而在线等离子清洗(in-line plasma cleaning)是在连续生产线的一个密封腔中对ITO玻璃进行的等离子处理,可以避免玻璃基片暴露在大气环境中而造成二次污染。本文主要阐述了等离子清洗在ITO玻璃清洗上发挥的重要作用和一种在OLED行业实现在线等离子清洗的设备。