大黄鱼C型凝集素受体Clec4e的分子鉴定及凝集特性

为了揭示硬骨鱼C型凝集素受体(C-type lectin receptor,CTLR)的生物学功能,实验以从大黄鱼转录组数据库中筛选出的一个CTLR基因—C型凝集素结构域家族4成员E基因(Clec4e)为研究对象,研究其分子特征、表达分布和凝集特性。结果显示,LcClec4e cDNA全长1546 bp,开放阅读框(ORF)771 bp,编码254个氨基酸。LcClec4e的N端有一个跨膜区,无信号肽,C端含有一个糖识别结构域(CRD),其中含有糖结合位点EPN和WFD以及6个可形成二硫键的保守半胱氨酸。系统发育分析表明,LcClec4e与多种鲈形目鱼类Clec4e具有较近的亲缘关系。荧光定量PCR结果显示,LcClec4e在所检测的10种组织中呈组成型分布,且在肝脏中表达量最高;LcClec4e在来源于大黄鱼头肾组织的原代巨噬细胞、淋巴细胞和粒细胞中均有表达,且在巨噬细胞中表达量最高;经灭活溶藻弧菌刺激后,LcClec4e在3种免疫细胞中的表达均极显著上调。原核表达的重组LcClec4e胞外段(recombinant LcClec4e-extracellular domain,rLcClec4e-ex)具有Ca^(2+)依赖性的凝集活性,可凝集小鼠、家兔的红细胞,以及嗜水气单胞菌、变形假单胞菌、溶藻弧菌和坎氏弧菌等4种水产常见的革兰氏阴性菌。D-葡萄糖、D-果糖、D-甘露糖、D-麦芽糖、α-乳糖和脂多糖均可抑制rLcClec4e-ex对大黄鱼重要病原菌变形假单胞菌的凝集作用,说明LcClec4e可能与变形假单胞菌表面的糖类物质结合。上述结果提示,LcClec4e可能作为一种模式识别受体,通过结合病原菌表面的糖类病原体相关分子模式来识别病原,参与大黄鱼抗细菌感染的免疫防御。

血清C型凝集素结构域家族11成员A在糖尿病肾脏病进展中的变化及在骨代谢评估中的意义

目的分析血清C型凝集素结构域家族11成员A(Clec11a)在糖尿病肾脏病(DKD)进展中的变化,评估其在DKD患者骨代谢评价中的价值。方法收集184例2型糖尿病(T2DM)患者临床资料并检测外周血Clec11a水平,根据尿白蛋白肌酐比(UACR)将纳入的患者分为三组:无蛋白尿组(UACR<30 mg/g,76例)、微量蛋白尿组(UACR 30~300 mg/g,72例)和大量蛋白尿组(UACR>300 mg/g,36例)。另选取同期体检健康者50例为正常对照组。比较各组患者的一般资料、骨密度(BMD)、骨代谢指标,分析非糖尿病、不同分期DKD患者血清Clec11a水平及其他骨代谢指标,评估UACR与Clec11a及其他骨代谢指标之间的相关性。结果T2DM各亚组Clec11a水平及估测肾小球滤过率(eGFR)均低于正常对照组(P<0.05)。在T2DM各亚组间比较,随着UACR上升,Clec11a水平及eGFR逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05)。微量蛋白尿组股骨颈BMD、Clec11a水平低于无蛋白尿组(P<0.05);大量蛋白尿组腰椎BMD、Clec11a水平低于微量蛋白尿组(P<0.05)。而骨代谢指标如25羟维生素D[25(OH)D]、骨钙素N端中分子片段、Ⅰ型前胶原氨基端前肽、甲状旁腺素、β胶原降解产物,微量蛋白尿组与无蛋白尿组之间差异无统计学意义。T2DM患者BMD、25(OH)D、Clec11a水平与UACR水平呈负相关(P<0.05),其中Clec11a与UACR相关性最强。结论T2DM患者血清Clec11a水平显著降低,且随着UACR的上升逐渐降低;与其他骨代谢指标比较,Clec11a与UACR间呈较强的负相关性。定期检测DKD患者血清Clec11a含量有助于早期识别骨量丢失。

中国学生使用英语情绪形容词“Angry”的行为特征

基于美国现当代语料库(COCA)和中国学习者英语语料库(CLEC),该文对比分析了本族语者和中国英语学习者使用“angry”的行为特征。研究结果表明,二者在其句法成分、名词搭配和介词搭配的使用上均有所不同。经对比分析得出,二者之间有差异的原因总的来说源于学习者对“angry”一词句法语义的理解度和熟悉度不足、受汉语语言和文化习惯影响等因素。该文采用中介语分析法,有助于加深学习者对“angry”一词用法的整体了解,帮助其规避写作中容易出现的误用该词的一些问题,并且可以为英语形容词的教学工作提供一定的启发。

基于生物信息学筛查CLEC3B蛋白及其在脓毒症诊断中的作用

目的:研究正常人与脓毒症患者血清差异表达蛋白中C-型凝集素域家族3成员B(CLEC3B)蛋白,探讨目标CLEC3B蛋白作为脓毒症分子标志物的可能性。方法:收集10名健康志愿者(健康组)和18例脓毒症患者(脓毒症组)外周血,利用数据独立采集法对外周血清蛋白数据进行采集,数据上传至i DEP在线平台分析脓毒症患者外周血中差异表达蛋白。并对这些差异蛋白进行生物信息学分析,筛选出脓毒症关键蛋白。酶联免疫吸附法(ELISA)验证并绘制关键蛋白受试者工作特征(ROC)曲线。结果:蛋白质组学分析筛选出138个差异表达蛋白(DEPs),其中34个蛋白显著下调,104个蛋白显著上调。DEPs主要富集在细胞过程、生物调节、生物过程调节、参与绑定、催化活化、分子功能监管、免疫系统、信号转导等。DEPs构建蛋白-蛋白相互作用网络(PPI)筛选出感兴趣的关键蛋白CLEC3B。ELISA实验表明脓毒症组患者CLEC3B蛋白浓度(297.73±22.00)ng/ml显著低于健康组(452.42±191.72)ng/ml,差异具有统计学意义(t=13.13,P=0.000)。CLEC3B蛋白的ROC曲线下面积为0.998,灵敏度为97.73%,特异度为100.0%。结论:CLEC3B蛋白在脓毒症组中显著降低,其灵敏度高,特异度高,可以作为脓毒症潜在的生物学诊断标志物。临床试验注册号中国临床试验注册中心,ChiCTR1900021261。

交联酶晶体的研究及应用

交联酶晶体 (CL ECs)是近年发展起来的新型晶体酶催化剂 ,具有稳定性高、催化活性高、反应专一性强、使用方便和易回收等特点 ,其制备过程主要包括酶的分批结晶和晶体的交联。目前 ,CL ECs在生物传感器、医学。

CLEC14A、VEGF在胚胎停育患者蜕膜组织中的表达及其与超声血流参数的相关性研究

目的:研究CLEC14A、VEGF及超声血流参数在胚胎停育组和正常妊娠组蜕膜组织中的表达差异及相互关系,探讨血管生成对胚胎停育的影响机制。方法:选取2016年5月至2017年2月于苏州大学附属第一医院接受清宫术的胚胎停育患者30例为胚胎停育组(胚停组),选取同期因个人原因要求实施人工流产且经B超证实为宫内胚胎存活的正常早期妊娠妇女50例为正常妊娠组(对照组)。Western blot和RT-PCR法检测两组孕妇蜕膜组织中CLEC14A和VEGF表达水平;多普勒超声技术检测两组孕妇双侧子宫动脉和孕囊周围螺旋小动脉的搏动指数(PI)、阻力指数(RI)、收缩期最大血流速度与舒张末期血流速度的比值(S/D)。结果:胚停组和对照组的年龄、停经天数等一般情况比较,差异无统计学意义(P>0.05)。胚停组的子宫动脉优势侧RI、PI、S/D及双侧子宫动脉平均RI、PI均明显高于对照组(P<0.05)。胚停组蜕膜组织中CLEC14A和VEGF蛋白和mRNA表达水平均明显低于对照组(P<0.05)。蜕膜组织中CLEC14A与VEGF蛋白表达水平呈正相关(r=0.355,P=0.018);胚停组蜕膜组织中VEGF表达水平与优势侧子宫动脉S/D呈负相关(r=-0.731,P<0.001)。结论:CLEC14A可能通过调节VEGF表达引起子宫动脉血流动力学改变,尤其是优势侧子宫动脉S/D升高,从而影响胚胎血供,参与胚胎停育的发病过程。

小鼠树突状细胞相关C型凝集素-1基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

目的树突状细胞相关C型凝集素-1(dendritic cell-associated C-type lectin-1,Dectin-1)是介导抗真菌天然免疫的重要受体之一。文中旨在构建表达小鼠Dectin-1基因的重组腺病毒载体,扩增、纯化获得高浓度的重组腺病毒。方法将PCR扩增的目的片段CLEC7A-p IRES2-EGFP重组到中间载体p DONR221上,再与腺病毒骨架质粒p AD/CMV/V5-DEST重组,获得重组腺病毒质粒p AD-CLEC7A-p IRES2-EGFP,经Pac I线性化后转染人胚肾293(HEK293)细胞,收获重组腺病毒p AD-CLEC7A-p IRES2-EGFP;利用HEK293细胞大量扩增腺病毒;并进行重组腺病毒的滴度测定;用荧光显微镜和实时荧光定量PCR鉴定转染重组腺病毒组(Dectin-1基因重组腺病毒转染HEK293细胞)和转染空病毒组(空病毒转染HEK293细胞)中Dectin-1基因的表达。结果菌落PCR鉴定、酶切鉴定及测序结果均显示重组腺病毒含有Dectin-1基因,腺病毒滴度为5×1011IU/m L,荧光显微镜下可见绿色荧光,PCR检测到转染重组腺病毒组Dectin-1表达量是转染空病毒组的8677.25倍。结论成功构建并获得了较高浓度的Dectin-1基因重组腺病毒载体,为下一步体内外研究Dectin-1高表达在宿主抗真菌天然免疫中的作用奠定基础。

CLEC4L在人胎盘组织及滋养层细胞的分布与定位

目的细胞间黏附分子非整合素蛋白3(human C-type lectin domain family 4,memberL,CLEC4L)为主要分布在树突状细胞(DC)表面的一个外源性凝集素超家族分子,通过依赖Ca2+的碳水化合物识别区域(CRD)形成寡聚糖,增强与抗原的结合能力。CLEC4L作为丙型肝炎病毒(HCV)受体,对HCV感染和传播起重要作用。本研究旨在明确人胎盘组织及胎盘滋养层细胞中CLEC4L的分布与定位。方法免疫组织化学方法检测CLEC4L在人滋养层细胞内定位以证明CLEC4L的存在,同时免疫组织化学单染及荧光双染法检测不同孕期正常胎盘组织CLEC4L定位与表达。结果人胎盘滋养层细胞中检测到CLEC4L表达,主要分布于滋养层细胞表面;同样在早孕期的绒毛及足月胎盘中均检出CLEC4L的表达,但在足月胎盘中的表达明显低于早孕期的绒毛组织。结论实验显示不同孕期胎盘组织均可见CLEC4L的表达,其在孕早期表达较高。滋养层细胞上该受体可能与HCV胎盘宫内感染有关。

RNA干扰CLEC2B基因沉默对淋巴细胞可溶性白介素2受体mRNA表达的影响

目的探讨RNA干扰淋巴细胞中CLEC2B基因沉默后,对淋巴细胞增殖及其细胞因子可溶性白介素2受体(sIL-2R)mRNA表达的调节作用,揭示CLEC2B基因参与白癜风发病的免疫学机制。方法人Jurkat淋巴瘤细胞株细胞培养后,分别应用RNA干扰技术转染3条CLEC2B siRNA(沉默1组、沉默2组、沉默3组),转染scrambled siRNA(非沉默对照组)及不做任何处理(空白对照组)。应用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法分析CLEC2B基因沉默效率,MTT法检测CLEC2B基因沉默后淋巴细胞增殖率(A值),荧光定量PCR方法检测sIL-2R mRNA表达情况。结果转染CLEC2B siRNA后,各CLEC2B沉默组较非沉默对照组淋巴细胞CLEC2B mRNA表达下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。各CLEC2B沉默组siRNA序列对CLEC2B基因沉默效率不等,差异有统计学意义(P<0.01);其中沉默2组siRNA沉默效率最高,与沉默1组和沉默3组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。CLEC2B基因沉默后,空白对照组、非沉默对照组、CLEC2B沉默组淋巴细胞增殖率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3组sIL-2R mRNA相对表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);其中CLEC2B沉默组较非沉默对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CLEC2B基因表达沉默后可下调淋巴细胞sIL-2R mRNA的转录表达,提示CLEC2B可能通过调节淋巴细胞产生的细胞因子水平参与白癜风的免疫发病机制。

英语写作中增补连接词的应用研究——基于CLEC和Brown语料库

基于CLEC和Brown语料库,结合韩礼德和哈桑(1976)的衔接理论、增补连接词分类,应用语料库检索软件Antconc 3.3、统计软件SPSS 19等,探究中国英语学习者英语写作中增补连接词应用情况发现:中国英语学习者增补连接词应用频数相比本族语者有过多使用现象;学习者与本族语者连接词选择具有相似倾向;学习者增补连接词的使用情况大体上与学习者层次、水平成正比;学习者的增补连接词功能应用与本族语者相似,主要集中在简单增补关系上。

CLEC2B基因过表达的Jurkat细胞培养上清液对黑素瘤细胞B16的影响

目的将CLEC2B基因过表达的Jurkat细胞培养上清液作用于黑素瘤细胞,观察其上清液对黑素瘤细胞增殖、酪氨酸酶活性、黑素合成的影响,探讨CLEC2B基因在白癜风发病中的作用。方法培养人淋巴瘤细胞Jurkat细胞和小鼠黑素瘤细胞B16,采用脂质体介导的方法瞬时转染CLEC2B重组质粒入Jurkat细胞,半定量RT-PCR法鉴定CLEC2B基因过表达;将其细胞培养上清液作用于黑素瘤细胞48 h后,MTT法检测黑素瘤细胞的增殖情况,多巴氧化法检测酪氨酸酶活性,氢氧化钠裂解法检测黑素含量。结果 CLEC2B基因过表达的Jurkat细胞培养上清液作用后的黑素瘤细胞增殖比空载体组、正常对照组降低,差异有统计学意义(均P<0.05),CLEC2B过表达组黑素含量比空载体组、正常对照组减少,差异有统计学意义(均P<0.05),CLEC2B过表达组、空载体组、正常对照组之间的酪氨酸酶活性比较差异无统计学意义(均P>0.05),空载体组与正常对照组比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论 CLEC2B基因过表达的Jurkat细胞培养上清液对黑素细胞的增殖和黑素合成有一定的抑制作用,对酪氨酸酶活性影响不明显。提示CLEC2B可能通过调节淋巴细胞功能间接影响黑素细胞增殖和黑素合成,从而参与白癜风发病。

大学英语写作中的动词短语错误分析——基于语料库的研究

运用错误分析理论和语料库检索方法,从中国学习者英语语料库中抽取260篇四、六级作文作为样本,对作文中出现的动词短语错误进行归类分析,发现动词短语错误主要表现在及物性、情态、时态、主谓不一致、定式和不定式错误等方面,并分析了错误产生的原因,研究结果对大学英语教学有一定的启示作用。

CLEC4M介导HCV感染人PBDC实验研究

目的通过对表达CLEC4M的CD14细胞与HCV结合来证实CLEC4M是介导HCV感染的特异性受体。方法应用磁珠分选出健康人的CD14+细胞,检测表达CLEC4M后将细胞共分4组,阳性对照组:CLEC4M+HCV RNA+血清;干扰组:CLEC4M+鼠抗人CLEC4M抗体+HCV RNA+血清,每组均与收集到的3份HCV阳性患者血清作用,阴性对照组:CLEC4M+正常人血清;空白对照组:CLEC4M+5%DMEM。干扰组在加入3组HCV RNA+血清之前,先分别加入CLEC4M抗体进行干预,其余3组滴入同体积PBS。培养24h后利用RT-PCR检测细胞表面结合的HCV RNA含量,培养48h后用免疫荧光法检测细胞与病毒结合情况。结果流式结果表明分离出的CD14细胞中CLEC4M阳性率高达80%以上。RT-PCR结果显示干扰组HCV RNA含量明显低于阳性对照组。免疫荧光可直观看到阳性对照组有大量绿色荧光,而干扰组只有很少的部分,空白对照组和阴性对照组无荧光。结论表达CLEC4M的CD14细胞可以与HCV结合,而病毒的结合可以被CLEC4M抗体竞争性抑制。

基于语料库的学习者例证词“for example”对比研究

基于英美大学生作文语料库(LOCNESS)和中国英语学习者语料库(CLEC)调查中国英语学习者在写作中使用例证词"for example"的特点,研究发现,中国英语学习者无论在使用频数还是在用法上都具有明显区别于本族语者的特征。

基于CLEC语料库的中国英语学习者冠词误用分析

CLEC(Chinese Learner English Corpus)中国英语学习者英语语料库涵盖高中(St2)、大学非英语专业四级(St3)和六级(St4)以及大学英语专业低年级(St5)和高年级(St6)五个子库分别代表不同阶段的英语学习者,容量达100万词以上。挑选了高中(St2)和大学英语专业低年级(St5)两个子库的冠词使用作为语料来进行分析,采用的检索软件是AntConc3·2·1w,该软件功能强大、使用免费、便于操作。通过统计分析对冠词的误用归为四种类型①冠词的缺失②冠词的过度使用③名词前的定冠词和不定冠词误用④在以元音开始的名词前冠词误用。并对教学提出了建议。

基于语料库的中国英语学习者写作中的跨文化语用失误研究

当前我国英语学习者的跨文化语用意识相对薄弱,从而影响了其英语写作水平的提高。基于Thomas关于跨文化语用失误的理论,借助于中国学习者英语语料库(CLEC),对中国英语学习者写作中的跨文化语用失误率进行统计,发现跨文化语用失误主要表现为汉英词汇逐字翻译、英汉词义等同、套用母语表达结构三个方面,其产生原因主要是中西文化差异和传统英语教学以及母语负迁移对目的语产生负面影响等。因此,中国学习者在英语学习的过程中,要积极培养与提高自己的跨文化语用意识,多了解西方的文化,并注重中西文化的差异。同时,英语教师也要创新教学方法,以降低或消除跨文化语用失误率。

从对CLEC的分析看不同年级英语学习者的拼写错误

拼写错误随学习者的语音、词汇、语法水平和拼写策略不同而变化。典型与发音关联的辅音错误、非重读央元音错误有随年级上升而下降的趋势,表明拼写错误受发音失误影响的程度随年级上升而降低。字母顺序错误、同音异形词错误的减少以及构词型错误、生造词的增加则反映出拼写策略的改变。

CLEC1B在肝细胞癌中的表达及其对细胞恶性生物学行为的影响

目的:研究C型凝集素结构域家族1成员B(CLEC1B)在肝细胞癌(HCC)组织中的表达并检测其对肝癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测15例HCC患者新鲜癌组织及癌旁正常组织中CLEC1B基因表达差异,免疫组化检测85例HCC组织及癌旁正常组织中CLEC1B蛋白表达,并分析CLEC1B表达与临床病理特征之间的相关性;建立CLEC1B过表达的HepG2稳转细胞株,qRT-PCR及Western blot进行验证;采用克隆形成实验检测HepG2细胞增殖能力变化;Western blot检测Hedgehog信号通路相关因子(Shh、Gli1、Ptch1)蛋白表达情况。结果:HCC组织中CLEC1B表达量较癌旁正常组织明显降低(P<0.05),CLEC1B在HCC中的表达量与肿瘤大小及远处转移有关,且CLEC1B表达越高肿瘤体积相对越小,远处转移概率越低;过表达HepG2细胞CLEC1B表达量,细胞增殖能力明显下调(P<0.05),且细胞中的Shh、Gli1、Ptch1蛋白表达量明显降低(P<0.05)。结论:CLEC1B在肝细胞癌中表现为低表达,并且提高CLEC1B表达量可抑制HepG2细胞增殖,可能与调控Hedgehog信号通路相关因子具有一定相关性。

中国学习者英语作文中BUT的“缺省”和“冗余”错误分析——一项基于CLEC语料库的研究

中国学习者在英语作文中所犯的But的"缺省"和"冗余"错误,启示教师应当反思教学方法,应当引导学生加强记忆发现规律,提高中介语水平。

英语学习者写作增补连接词also应用研究

基于中国英语学习者(CLEC)语料库、本族语者布朗(Brown)语料库,检索学习者与本族语者增补连接词also应用频数,采取系统抽样,分析学习者258条、本族语者107条,共365条also检索条,调查学习者also应用情况,分析学习者与本族语者also连接词用法异同及其原因。研究发现:虽然差异未达到显著程度,但学习者also使用频数明显过多;学习者also用法较集中,而本族语者较均衡;学习者but also用法密度、丰富度均比本族语者高,既连接短语结构,也连接本族语者未用的句子连接;而后从英汉句法结构差异、教材语料等语言输入、学习者语言水平等方面分析原因。