绞股蓝总皂苷调控CLIC1抑制巨噬细胞脂质累积的作用研究

[目的]研究绞股蓝总皂苷(gypenosides,GPs)对RAW264.7细胞脂质累积及细胞内氯离子通道蛋白1(chloride intracellular channel 1,CLIC1)表达的影响,探讨GPs抗动脉粥样硬化的分子机制。[方法]将RAW264.7细胞接种于六孔板中,分为NC组、氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)组、GPs 10组、GPs 50组、GPs 100组及CLIC1 si RNA组。各组细胞处理24h后,油红O染色检测各组细胞内脂质的累积,化学法检测细胞内总胆固醇(total cholesterol,TC)及游离胆固醇(free cholesterol,FC)的含量,荧光定量PCR和免疫印迹法检测CLIC1、CD36m RNA和蛋白质的表达,免疫荧光技术观察CLIC1的细胞定位,并用MQAE法检测细胞内氯离子浓度的变化。[结果]与NC组相比,ox-LDL组CLIC1、CD36 m RNA(P<0.01,P<0.001)及蛋白(P<0.01,P<0.001)表达水平显著升高,细胞内TC(P<0.001)、FC(P<0.01)显著升高,细胞膜上CLIC1表达显著升高,细胞内氯离子浓度显著增加(P<0.01);经CLIC1 si RNA或GPs处理后,细胞内TC(P<0.001,P<0.001)、FC(P<0.01,P<0.01)含量降低,脂质累积减少,CLIC1、CD36 m RNA及蛋白表达水平显著下调(P<0.01,P<0.001)。[结论]CLIC1在巨噬细胞脂质累积中发挥着重要的作用,GPs可以通过调控CLIC1的表达抑制巨噬细胞脂质累积。

CLIC1及其点突变体与Sedlin蛋白的共定位研究

目的构建胞内氯离子通道蛋白1(CLIC1)点突变体的真核表达质粒,进行CLIC1突变体的表达、定位及其与迟发性脊椎骨骺发育不良病蛋白(Sedlin)的共定位研究,为进一步揭示其功能奠定基础。方法以CLIC1全长c DNA序列为模板,构建3个真核表达质粒即pc DNA3.1-CLIC1(C24A)-FLAG、pc DNA3.1-CLIC1(C59A)-FLAG、pc DNA3.1-CLIC1(C24A-C59A)-FLAG;Western blot法检测CLIC1及其点突变体在HEK 293T细胞中的表达;免疫荧光技术了解CLIC1及其点突变体蛋白在COS7细胞中的定位及与Sedlin的共定位情况。结果成功构建了CLIC1点突变体的真核表达质粒;Western blot结果显示3个点突变体蛋白在HEK293T细胞中均能表达,突变体的分子量低于野生型的;免疫荧光实验表明CLIC1蛋白在细胞质和细胞核都有表达,但主要在细胞核。CLIC1点突变体蛋白定位在胞质中,细胞核中无分布,与Sedlin蛋白在胞质存在共定位。结论CLIC1的3种点突变体均能在哺乳动物细胞中有效表达;CLIC1及其点突变体与Sedlin蛋白均存在共定位,提示两种蛋白之间可能存在相互作用。

子宫内膜样腺癌中CLIC1蛋白的表达及临床意义

目的探讨细胞内氯离子通道蛋白1(CLIC1)在子宫内膜样腺癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法采用免疫组化SP法检测100例子宫内膜样腺癌组织和50例正常子宫内膜组织中CLIC1蛋白的表达,并分析其表达与子宫内膜样腺癌临床病理特征的关系。结果 CLIC1蛋白在子宫内膜样腺癌组织中的阳性表达率为63.0%,高于其在正常子宫内膜组织中的22.0%(P<0.05);CLIC1蛋白在子宫内膜样腺癌中的表达与病理分期及淋巴结转移有关(P<0.05),而与年龄、是否绝经、浸润深度和组织学分级无关(P>0.05)。结论 CLIC1蛋白过表达可能促进了子宫内膜样腺癌的发生、发展。

CLIC1对氯化钴诱导的胃癌细胞增殖侵袭及MAPK/ERK通路的影响

目的:探讨CLIC1对氯化钴诱导的胃癌细胞增殖、侵袭及MAPK/ERK通路的影响。方法:体外培养胃癌细胞SGC-7901后分为4组,正常组(control组)、氯化钴处理组(150um CoCl2处理);阴性转染组(si-NC组,CoCl2处理后继续培养48h,转染NC siRNA); CLIC1干扰组(si-CLIC1组,CoCl2处理后继续培养48h,转染CLIC1siRNA)。收集细胞上清,MTT法检测SGC-7901细胞活力;平板细胞克隆形成实验检测菌落形成;划痕实验检测细胞转移能力; Transwell小室检测细胞迁移、侵袭能力;蛋白免疫印迹(WB)检测MAPK/ERK通路有关蛋白的表达。结果:与control组相比,CoCl两组、si-NC组细胞抑制率、转移抑制率、E-cadherin蛋白表达均升高,菌落数量、迁移、侵袭数量均降低,p-ERK1/2、MMP-9、N-cadherin蛋白表达降低(P <0.05),抑制CLIC1表达后细胞抑制率、转移抑制率、E-cadherin蛋白表达进一步升高,菌落数量、迁移、侵袭数量以及p-ERK1/2、MMP-9、N-cadherin蛋白表达进一步降低(P<0.05)。结论:CoCl2处理后可抑制胃癌细胞的增殖、侵袭,而抑制CLIC1表达后能够协同CoCl2进一步抑制胃癌细胞的增殖、侵袭,这可能与抑制MAPK/ERK通路有关。

氯离子通道蛋白1的缺失突变体CLIC1(Δ49-51)与Sedlin蛋白相互作用的研究

目的探究胞内氯离子通道蛋白1(CLIC1)的缺失突变体CLIC1(Δ49-51)在哺乳动物细胞中的表达、定位改变,及与Sedlin蛋白在体内、体外相互作用的影响。方法构建CLIC1的缺失突变体的真核表达质粒pc DNA3. 1-CLIC1(Δ49-51)-FLAG;免疫荧光观察CLIC1(Δ49-51)与Sedlin在COS7细胞中的共定位;在HEK 293T细胞中进行免疫共沉淀和GST pulldown实验,研究CLIC1(Δ49-51)与Sedlin的相互作用。结果 CLIC1(Δ49-51)在COS7细胞中主要定位于细胞质,小部分定位于细胞核。相对于野生型CLIC1的细胞核定位,缺失突变体的细胞内定位发生明显改变并且与Sedlin蛋白没有共定位。Western blot结果显示CLIC1(Δ49-51)能在HEK 293T细胞中有效表达;免疫共沉淀实验结果表明其与Sedlin在体内没有相互作用; GST pulldown结果表明其与Sedlin在体外没有相互作用。结论 CLIC1蛋白的第49~51位氨基酸序列KRR对CLIC1蛋白在细胞内的正确定位发挥重要作用;其缺失突变后影响了CLIC1在细胞内的定位、表达及CLIC1与Sedlin的相互作用。

RACK1与CLIC1的相互作用鉴定

目的探究胞内氯离子通道蛋白1(CLIC1)与活化蛋白激酶C受体1(RACK1)在细胞内的相互作用。方法构建重组质粒pcDNA3.1-RACK1-HA,转染质粒pcDNA3.1-RACK1-HA和(或)pcDNA3.1-CLIC1-FLAG到HEK 293T细胞中,转染pcDNA3.1-RACK1-HA和(或)pcDNA3.1-CLIC1-FLAG到COS7中。GST-pulldown和免疫共沉淀实验确定CLIC1和RACK1在体内及体外的相互作用。间接免疫荧光实验检测RACK1与CLIC1在细胞中的定位。结果成功构建pcDNA3.1-RACK1-HA,Western blot检测结果证明了RACK1和CLIC1可在HEK 293T细胞中表达,GST-pulldown结果显示RACK1与CLIC1在体外可直接结合,免疫共沉淀结果显示RACK1和CLIC1可在细胞内结合。间接免疫荧光实验表明RACK1与CLIC1可共定位于细胞质。结论RACK1与CLIC1可在细胞中结合。

沉默氯离子通道蛋白1基因表达对胃癌细胞的影响

目的观察沉默细胞内氯离子通道蛋白1(chloride channel protein 1,CLIC1)的基因表达后对胃癌BGC-823细胞增值、侵袭、迁移以及周期和凋亡的影响。方法化学合成针对CLIC1的靶向siRNA(CLIC1 siRNA组),以转染脂质体试剂细胞(MOCK组)和空白细胞(CTRL组)作为对照。用MTT、流式细胞术以及Transwell分别观察细胞的增值、周期、凋亡、侵袭和迁移能力的变化。结果转染24h、48h和72h后,CLIC1 siRNA组与MOCK组、CTRL组相比,其增殖能力均显著增强(P <0. 05);转染48h后CLIC 1siRNA组G2/M期细胞明显增多(P <0. 05)、凋亡率显著降低(P <0. 05)、侵袭及迁移细胞数明显下降(P <0. 05)。结论 CLIC1在胃癌的发生、发展及侵袭迁移中过程发挥重要作用。

氯离子通道在胃癌中的研究进展

胃癌是一种具有高度侵袭性和致命性的恶性肿瘤,其发病率及死亡率呈逐年增高,好发年龄在50岁以上,男女比例约为2∶1。因此明确胃癌的病因与发病机制、寻找早期诊断方法及有效药物靶点显得尤为重要。近年的研究表明,氯离子通道蛋白的异常表达与肿瘤的发生发展密切相关,氯离子通道的主要功能是调节跨上皮转运、膜电位和细胞免疫应答。氯离子通道异常与胃癌的增殖、凋亡、迁移、侵袭密切相关。本文就氯离子通道蛋白CLIC1、TMEM16A和SLC26A9与胃癌的关系进行一综述。

氯离子胞内通道1与肿瘤关系的研究进展

0引言 肿瘤发生机制的研究,是临床早期诊断、早期治疗及预防复发的提前基础。氯离子胞内通道1（chlo-ride intracellular channel 1,CLIC1）的表达有组织和分化特异性。该基因在肿瘤的研究中越来越被重视,本文就近五年来研究的相关文献进行综述如下。