葡萄几丁质酶基因在毕赤酵母中的表达及其生物活性研究

采用一步法逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR),以葡萄幼叶为材料克隆几丁质酶基因的cDNA序列,序列分析表明,其包含基因完整的编码序列,编码由314个氨基酸组成的几丁质酶,通过抑菌试验证明,所纯化的几丁质酶对尖孢镰刀菌菌丝生长有抑制作用,同时用水解CM-chitin-RBV的方法测定纯化的几丁质酶活性,在37℃,pH 5时分解几丁质的比活力为0.78△A 550/(μg.h),而该酶的粗提物的比活力为0.21△A 550/(μg.h)。

苦瓜几丁质酶基因的克隆、表达及酶学特性分析

采用一步法逆转录聚合酶链反应（RT—PCR），以苦瓜幼叶为材料克隆几丁质酶基因的cDNA序列，序列分析表明其包含了基因完整的编码序列，编码由333个氨基酸组成的几丁质酶，对所克隆的基因进行了原核表达和纯化．纯化的几丁质酶具有分解几丁质的生物活性．当底物质量浓度在100～400mg·L^-1时，几丁质酶分解底物的能力随底物浓度增加而增大；大于400mg·L^-1时，几丁质酶分解底物的能力反而降低；当底物质量浓度固定时，几丁质酶分解底物的量随反应时间延长而增多．苦瓜几丁质酶基因的克隆和表达将为研究其结构和生物学功能奠定基础．