激光解吸电离-飞行时间质谱技术和CM10蛋白质芯片检测术前大肠癌分期的意义

目的筛选新的大肠癌候选肿瘤标志物,建立分期诊断模型,并探讨其临床意义。方法采用表面加强激光解吸电离-飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术和CM10蛋白质芯片,检测76例大肠癌患者术前血清蛋白质指纹图谱;运用支持向量机分析判别处理数据、筛选标志物,建立并验证分期模型;应用时间序列分析的方法,将DukesA、B、C、D各期以二维散点图的形式表示。结果诊断模型Ⅰ由6个蛋白质峰组合构建,其质荷比分别为2759．6、2964．7、2048．0、4795．9、4139．8和37 761．6,鉴别局限性大肠癌(Dukes A、B期)和区域性(Dukes C期)大肠癌的总准确率为86．7％。诊断模型Ⅱ由3个蛋白质峰组合构建,其质荷比分别为6885．3、2058．3和8567．8,鉴别局限区域性(Dukes A、B、C期)和系统性(Dukes D期)大肠癌的总准确率为75．0％。诊断模型Ⅲ鉴别Dukes A期和B期大肠癌的总准确率为86．2％;诊断模型Ⅳ鉴别Dukes A期和C期大肠癌的总准确率为84．6％;诊断模型V鉴别Dukes B期和C期大肠癌的总准确率为85．7％;诊断模型Ⅵ鉴别Dukes B期和D期大肠癌的总准确率为80．0％;诊断模型Ⅶ鉴别Dukes C期和D期大肠癌的总准确率为78．7％。通过二维散点图,可以明显看出Dukes A、B、C、D各期之间的区别。结论通过SELDI-TOF- MS技术和CM10蛋白质芯片所筛选的候选肿瘤标志物可以指导大肠癌的综合治疗,所建立的诊断模型可以辅助临床明确大肠癌的术前分期。

尿样在SELDI技术中的优化研究

目的:建立表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF/MS)技术检测尿液样本的方法。方法:采用SELDI技术及弱阳离子交换表面蛋白芯片(CM10)对糖尿病病例组和正常对照组的尿液样本进行分析,从尿液标本的采集、样品保存、上样浓度的控制、实验仪器的内外校准、实验结果重复性验证与分析等方面进行实验条件的优化。结果:反复冻融3次以上的样品经SELDI检测的出峰数量和峰强度情况较差;以1:1或1:2的浓度作倍比稀释后的样本经芯片检测得到的蛋白峰强度和蛋白数量最优;对两组样本重复检测3次,蛋白丰度的平均变异系数(CV值)分别为0.121和0.095;两组样本共检测到202个蛋白峰,其中差异表达蛋白29个,在肝纤维化组中表达上调13个,表达下调16个。结论:初步建立了SELDI技术检测尿液样本的方法,提高了SELDI技术检测尿液样本的质量。