CMTM5基因rs723840单核苷酸多态性与阿司匹林治疗下血小板高反应性的相关性研究

目的：探讨趋化素样因子超家族成员5（CKLF-like MARVEL transmembrane member 5,CMTM5）基因rs723840单核苷酸多态性与阿司匹林治疗下血小板高反应性的相关关系。方法：采用临床单组观察试验研究设计方法,共入选210例北京大学第一医院老年内科住院患者,采用光学比浊法测定0.5 g/L花生四烯酸（arachidonic acid,AA）诱导的血小板聚集率（platelet aggregation ratio,PR）,阿司匹林治疗下血小板高反应性（high on aspirin platelet reactivity,HAPR）定义为PR≥3/4 PR界值。将入选患者按照PR分为HAPR组和非血小板高反应性组（NoHAPR）。采用焦磷酸测序法测定CMTM5基因rs723840单核苷酸多态性在HAPR组和No-HAPR组的基因型及等位基因分布频率,采用卡方检验统计分析基因型与等位基因在两组间的差异。结果：CMTM5基因rs723840多态在两组间基因型分布频率皆符合Hardy-Weinberg平衡定律,3种基因型（CC型、CT型和TT型）分布频率在HAPR组和No-HAPR组分别为48.4%、51.6%、0.0%和73.7%、22.9%、0.034%,3种基因型在两组间分布频率差异存在统计学意义（P=0.004）,C、T等位基因分布频率在两组间差异亦有统计学意义（P=0.031,OR=2.002,95%CI：1.056~3.793）。Logistic回归校正了年龄、性别、体重指数、吸烟、高血压、糖尿病及高脂血症等冠心病易患因素后,CMTM5基因rs723840单核苷酸多态性仍与冠心病患者HAPR的发生存在显著相关性。结论：CMTM5基因单核苷酸多态位点rs723840与冠心病患者血小板高反应性发生存在显著相关性。

CMTM5与表皮生长因子受体在前列腺癌中的表达及意义

目的:通过检测CMTM5(CKLF-like MARVEL transmembrane domain containing 5)及表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)在前列腺癌中的表达,分析其在前列腺癌发生及发展中可能存在的联系。方法:免疫组织化学检测前列腺癌和良性前列腺增生(benigh prostatic hyperlasia,BPH)组织中CMTM5的表达,分析其与前列腺癌临床病理学特征的关系;免疫组织化学检测EGFR在前列腺癌组织中的表达,并分析其与CMTM5在前列腺癌中表达水平的关系;Western blot检测CMTM5和EGFR在BPH组织及各前列腺癌细胞系的表达。结果:免疫组织化学结果显示,CMTM5在75%(27/36)BPH和35.9%(23/64)前列腺癌组织中高表达,差异有统计学意义(P=0.000 2)。CMTM5的表达水平与年龄、临床分期、有无转移之间无明显关系(P>0.05),在中高度分化(Gleason评分≤7)的肿瘤组织中,CMTM5的表达水平高于低度分化(Gleason评分≥8)的肿瘤组织,差异有统计学意义(P=0.003)。EGFR在57.8%的前列腺癌组织中高表达(37/64),其与CMTM5表达水平的差异有统计学意义(P=0.021)。23例前列腺癌组织CMTM5低表达且EGFR高表达,占35.9%。Western bolt结果显示CMTM5在BPH组织中表达,但在各前列腺癌细胞系中均表达缺失,而EGFR在BPH组织中的表达低于各前列腺癌细胞系,特别是激素非依赖性细胞系PC3和DU145。结论:CMTM5的表达缺失与EGFR的过表达可能同时参与了前列腺癌的发生与发展。

CMTM5通过下调HER2抑制前列腺癌的肿瘤行为

目的:CMTM5是一种在多种肿瘤中发生下调的抑癌分子,有可能影响跨膜信号转导。现有的临床试验证实,与其他上皮来源、具有HER2基因表达的肿瘤不同,针对表皮生长因子受体(EGFR)的靶向治疗在前列腺癌中并不奏效,提示前列腺肿瘤中HER2可能有其他的促癌机制。本文的目的在于观察CMTM5与HER2在促进前列腺肿瘤的发生中可能存在的联系,以期发现新的治疗靶点。方法:通过芯片技术观察了不同分级肿瘤的HER2及CMTM5的表达水平。比较转染了CMTM5-v1之后前列腺癌细胞系PC3中HER2水平的变化以分析两者之间可能存在的关联性。结果:随着肿瘤分级升高,HER2水平升高而CMTM5水平降低。PC3细胞系中CMTM5过表达可以降低HER2的蛋白水平进而减少细胞周期调控蛋白CyclinD1的水平,从而抑制细胞分裂。结论:前列腺癌中,HER2很有可能不是通过EGFR发挥促癌作用,因而目前针对EGFR的靶向治疗对前列腺癌效果不佳。在肿瘤中降低的CMTM5作为一种新发现的HER2抑制分子有可能成为新的治疗靶点。

CMTM5对人前列腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:探讨CMTM5(CKLF-like MARVEL transmembrance domain containing)对人前列腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用,并初步探索其作用机制。方法:13只雄性裸鼠连续腹腔注射环磷酰胺2.5 mg/(d.只),建立裸鼠皮下前列腺移植瘤模型,3周后11只裸鼠种植部位可见肿瘤,随机将其分成两组:实验组(6只),对照组(5只)。实验组肿瘤局部注射CMTM5腺病毒,对照组不作处理。每日监测裸鼠体重和肿瘤大小,2周后处死。取出完整肿瘤组织,利用免疫组化方法检测过表达CMTM5对裸鼠前列腺移植瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)及核转录因子κB(NF-κB)蛋白表达的影响。结果:CMTM5组肿瘤体积为(573.39±175.24)mm3明显小于对照组(1482.50±327.86)mm3,P=0.03。CMTM5组肿瘤重量为(0.55±0.11)g明显小于对照组(1.31±0.29)g,P=0.027。免疫组化法检测结果显示,与对照组比较,CMTM5组VEGF和NF-κB蛋白的表达明显降低。结论:CMTM5抑制前列腺癌的生长,其作用机制可能通过下调与肿瘤细胞增殖密切相关的血管内皮生长因子VEGF和核转录因子NF-κB的表达相关。

多发性骨髓瘤病人骨髓细胞中Cmtm5基因异常低表达

本研究检测cmtm5(CKLF-like MARVEL transmembrane domain containing member5)基因在多发性骨髓瘤(MM)骨髓细胞中的表达水平,并探索其与临床特征的关系。应用实时定量逆转录-聚合酶链反应(real-time quantitative RT-PCR,RQ-RT-PCR)技术检测MM患者骨髓细胞、MM细胞系及正常人骨髓细胞cmtm5基因的表达。以cmtm5拷贝数与abl拷贝数的比值表示cmtm5基因的相对表达水平。结果表明,51例初治及难治复发MM患者骨髓细胞cmtm5表达量(0.047±0.062)显著低于20例正常人骨髓细胞cmtm5表达量(0.255±0.333,p<0.01)。ISSⅢ期患者组cmtm5基因表达量(0.034±0.034)显著低于ISSⅠ期患者组的表达量(0.103±0.109,p<0.01)。两种人多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226及CZ1的cmtm5基因表达量(为0.014±0.009、0.004±0.006)均低于正常人骨髓细胞。15例治疗有效患者的cmtm5基因表达量与治疗前及复发时相比显著升高(0.020±0.005;0.227±0.038,p<0.01)。cmtm5基因的表达量与骨髓浆细胞比例呈负相关(r=-0.307,p<0.05),而与性别、年龄、血红蛋白水平、M蛋白量、免疫球蛋白分型、IgH是否阳性等没有明显的相关性。结论:多发性骨髓瘤患者骨髓细胞cmtm5基因表达水平降低,且与ISS分期有关,与骨髓浆细胞数呈负相关,此结果说明cmtm5基因在MM的发病机制中发挥一定作用。

肾癌CMTM5肿瘤抑制基因甲基化的临床研究

目的分析肿瘤抑制基因CMTM5甲基化在肾癌表达,为临床诊断治疗提供参考。方法检测肾癌细胞系和正常人肾细胞株中CMTM5的表达及甲基化水平。选取本院及部分苏大附一院肾癌患者为研究对象,检测患者血液、尿液中CMTM5的甲基化水平。征得患者同意后,肾癌患者手术治疗,留取标本,进行CMTM5的甲基化检测。结果正常人肾细胞株CMTM5蛋白阳性率显著高于肾癌细胞株(χ2=3.2641,P<0.05),CMTM5甲基化阳性率显著低于肾癌细胞株(χ2=3.6944,P<0.05)。肾癌组织中CMTM5蛋白阳性率(52.4%)显著低于正常肾组织(76.7%)(χ2=7.8889,P<0.05),CMTM5甲基化阳性率(73.0%)显著高于正常肾组织(48.3%)(χ2=7.8889,P<0.05),预后较差患者CMTM5表达较低。CMTM5甲基化表达与肾癌患者年龄、性别、病理分级无关,早期肾癌CMTM5甲基化表达显著低于Ⅲ期以后患者(χ2=6.3087,P<0.05)。结论 CMTM5在肾癌组织中表达下调,且和其甲基化程度密切相关。肾癌患者的血液或尿液标本能检测到CMTM5的甲基化,可能为肾癌的早期诊断提供新的参考。

miR-3122靶向CMTM5调控口腔鳞癌细胞GNM凋亡的分子机制

目的探讨miR-3122靶向CMTM5调控口腔鳞癌细胞GNM凋亡的分子机制。方法纳入口腔鳞癌患者60例,收集其口腔鳞癌组织和癌旁组织,通过实时荧光定量PCR检测miR-3122的表达水平。在口腔鳞癌细胞GNM中敲低或过表达miR-3122,检测其凋亡水平。通过TargetScan,miRcode,miRDB在线分析miR-3122的潜在靶标,通过过表达miR-3122后检测潜在靶标的表达水平。过表达miR-3122的潜在靶标,分析口腔鳞癌细胞GNM的凋亡水平。结果miR-3122在癌旁组织中的表达水平高于口腔鳞癌组织(P<0.05)。过表达miR-3122后,口腔鳞癌细胞GNM的凋亡水平上升(P<0.05),而敲低miR-3122后,口腔鳞癌细胞GNM的凋亡水平下降(P<0.05)。TargetScan,miRcode,miRDB在线分析发现miR-3122分别潜在靶向69,82,184个基因,三者交集为22个基因。过表达miR-3122后,口腔鳞癌细胞GNM中GCSAM,PSMC4,SKP1,LIAS,SMAD2,ZNF704,CMTM5,STK17A,YWHAQ的表达水平下降(P<0.05)。敲低上述基因后,敲低CMTM5后口腔鳞癌细胞GNM的凋亡水平上升(P<0.05)。此外,miR-3122靶向CMTM5的3端非编码区(P<0.05)。过表达miR-3122后,CMTM5的mRNA水平和蛋白水平均下降(P<0.05),而敲低miR-3122后,CMTM5的mRNA水平和蛋白水平均上升(P<0.05)。同时敲低miR-3122和CMTM5时,口腔鳞癌细胞GNM凋亡水平无显著变化(P<0.05);同时过表达miR-3122和CMTM5时,口腔鳞癌细胞GNM凋亡水平无显著变化(P<0.05)。结论miR-3122通过靶向CMTM5 mRNA的3端非编码区后,降解了CMTM5的mRNA并降低了CMTM5的蛋白水平,随后促进了口腔鳞癌细胞GNM的凋亡。

CMTM5在肝癌患者中的表达及其对肝癌细胞生长和侵袭性的调节作用

目的探究CMTM5在肝癌患者中的表达及其对肝癌细胞生长和转移的调节作用。方法免疫组织化学检测60例肝细胞癌患者癌组织及配对癌旁组织中的CMTM5表达。将SK-HEP-1细胞分为对照组、pLenti6.3组和CMTM5-pLenti6.3组。用携带CMTM5的重组慢病毒(CMTM5-pLenti6.3组)或阴性对照慢病毒(pLenti6.3组)转染SK-HEP-1细胞,未转染的细胞作为对照组。通过qRT-PCR和Western blot验证转染效率。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。Western blot检测PI3K-AKT信号通路及下游分子Bcl2、MMP9和p21的表达。通过皮下接种过表达CMTM5的SK-HEP-1细胞建立体内肿瘤异种移植模型。结果癌组织中CMTM5的阳性染色评分显著低于癌旁组织(P<0.05)。CMTM5的表达水平与肿瘤分化程度和TNM分期有关(P<0.05)。与对照组相比,CMTM5-pLenti6.3组SK-HEP-1细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著降低,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与接种空载体转染的细胞的裸鼠相比,接种高表达CMTM5的细胞的裸鼠的肿瘤体积和肿瘤重量均明显降低(P<0.05)。与对照组相比,CMTM5-pLenti6.3组SK-HEP-1细胞中PI3K、p-AKT、Bcl2和MMP9的蛋白表达水平显著降低,而p21的蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论上调CMTM5的表达可抑制肝癌细胞的生长和侵袭能力。

CMTM5基因与冠状动脉粥样硬化性心脏病的关联研究及机制探讨

目的:探讨趋化素样因子超家族成员5(CKLF-like MARVEL transmembrane domain containing member 5,CMTM5)基因与冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)发生风险的相关性,及CMTM5基因表达变化对THP-1细胞黏附及迁移能力的影响。方法:采用病例对照研究法,入选700例首都医科大学附属北京世纪坛医院心血管内科的住院患者,采用冠状动脉造影法,将结果提示至少存在一支血管内径狭窄≥50%的患者诊断为冠心病。采用逆转录-聚合酶链反应法(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)测定CMTM5基因表达,酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测入选患者血浆CMTM5水平,Logistic回归方法分析CMTM5基因与冠心病发生风险的相关性。培养人血管内皮细胞(endothelial cells,ECs)及THP-1细胞,采用黏附实验及Transwells迁移实验评价CMTM5基因对THP-1趋化能力的影响。结果:冠心病组患者CMTM5基因mRNA表达量是对照组表达量的3.45倍,明显高于对照组(P<0.05)。冠心病组血浆CMTM5蛋白平均水平为(206.1±26.9)μg/L,明显高于对照组的(125.3±15.2)μg/L(P<0.05)。Logistic回归分析纳入年龄、性别、体重指数、吸烟、高血压、糖尿病、高脂血症等冠心病的易患因素和CMTM5基因,结果提示,CMTM5基因仍与冠心病的发生风险存在显著相关性(P<0.05)。黏附实验及Transwells实验结果均提示,过表达CMTM5 ECs组(EO组)中,THP-1细胞的黏附数量及迁移数量明显高于过表达CMTM5对照组(EO-MOCK组)、正常ECs组(EN组)、低表达CMTM5对照组(ES-MOCK组)和低表达CMTM5 ECs组(ES组),相反,ES组中THP-1细胞黏附数量及迁移数量明显低于其他4组,差异均有统计学意义(P均<0.01)。结论:CMTM5基因与冠心病的发生发展密切相关,CMTM5基因过表达促进THP-1黏附及迁移能力,从而促进动脉粥样硬化和冠心病的发生发展。

Pathophysiologic mechanism of CMTM5 low expression in multiple myeloma progression

Objective To investigate the mechanism of chemokine-like factor superfamily member (CMTM) 5 on theproliferation of multiple myeloma cells. Methods RTqPCRmethod was used to detect the expression and correlationof CMTM5,caspase3 and caspase9 in U266 afterdecitabine demethylation treatment;U266 transfectedwith pcDNA3. 1 plasmid overexpressed CMTM5,then cell proliferation activity was detected by CCK-8 assay.Results Compared with the control group,the low-dosedemethylation treatment increased mRNA expression ofCMTM5,caspase3,and caspase9 in U266,and showeda time-dependent (P < 0. 01). The up-trend of CMTM5,caspase3,and caspase9 in the high-demethylation drugtreatment group was more significant and also showed atime-dependent manner (P < 0. 001);There was a significantpositive correlation between CMTM5 andcaspase3 (r = 0. 937) and caspase 9 ( r = 0. 945) ineach group (P < 0. 001). After transfection of U266 withthe pcDNA3. 1-CMTM5 plasmid,overexpression of CMTM5inhibited the cell proliferation activity compared with thecontrol and the pcDNA3. 1-vector group.

趋化素样因子超家族成员5对前列腺癌细胞EG-VEGF的影响

目的探讨趋化素样因子超家族成员5（CKLF-like MARVEL transmembrane domain containing 5，CMTM5），对前列腺癌细胞中内分泌腺来源的血管内皮生长因子（endocrine gland-derived vascular endothelial growth factor，EG．VEGF）表达的影响，从而探索CMTM5抑制前列腺癌的机制。方法分别检测前列腺细胞、前列腺癌细胞CMTM5、EG—VEGF的相对表达量，并对前列腺癌细胞进行CMTM5质粒转染，使其过表达CMTM5，并再次检测EG．VEGF的表达量，进行转染前后的对比。结果与正常前列腺细胞相比，前列腺癌细胞高表达EG-VEGF，低表达CMTM5，差异有统计学意义（P〈0．05）；与前列腺癌细胞相比，前列腺癌细胞转染CMTM5质粒后，EG—VEGF的表达量明显下降，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论前列腺癌细胞较正常前列腺癌细胞高表达EG．VEGF，低表达CMTM5；当前列腺癌细胞转染CMTM5质粒，高表达CMTM5后，EG．VEGF的表达量明显下降。说明高表达CMTM5的前列腺癌细胞可能通过降低EG—VEGF途径，抑制前列腺癌的发生发展。