PI3K/Akt/FoxO3a信号通路对人鼻咽癌CNE-1、CNE-2细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨FoxO3a对体外培养的人鼻咽癌CNE-1、CNE-2细胞增殖及凋亡的影响是否是通过PI3K/Akt信号通路。方法通过使用LY294002特异性抑制PI3K的活性,免疫印迹法检测FoxO3a及p-Akt蛋白在人鼻咽癌CNE-1、CNE-2细胞的表达,免疫荧光化学检测FoxO3a在鼻咽癌细胞中的亚细胞定位,实时荧光定量PCR检测FoxO3a的mRNA表达水平,MTT法检测鼻咽癌细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测鼻咽癌细胞的凋亡率。结果通过使用PI3K特异性抑制剂LY294002,FoxO3a在实验组人鼻咽癌CNE-1、CNE-2细胞中的蛋白和mRNA表达水平均高于对照组(P<0.05),且在CNE-1(P=0.004)、CNE-2(P=0.001)细胞核内的表达量高于对照组,FoxO3a的上调可抑制人鼻咽癌CNE-1、CNE-2细胞的增殖(P<0.05),促进其凋亡(P<0.01)。结论通过抑制PI3K/Akt信号通路的活性可上调人鼻咽癌CNE-1、CNE-2细胞FoxO3a基因的表达,抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡,其机制可能与其对FoxO3a的调控有关。

紫杉醇联合热疗对鼻咽癌CNE-1细胞株增殖及凋亡的影响

目的探讨紫杉醇(Paclitaxel)联合热疗对鼻咽癌细胞株CNE-1增殖及凋亡的影响,为临床紫杉醇与热疗联合应用提供实验依据。方法将不同温度(39℃、41℃和43℃)及不同浓度(0.01、0.10、1.00、10.00和100.00nmol/L)紫杉醇采用分组设计(共15个组),各浓度组设37℃为对照组(共5个组)。在紫杉醇对CNE-1细胞作用48h后加热30min,使用MTT法、克隆形成能力试验、细胞形态学、超微结构观察及琼脂糖凝胶电泳等方法测定紫杉醇联合热疗对CNE-1细胞体外增殖抑制及细胞凋亡的影响。结果加热41℃组细胞增殖率与其他不同温度同剂量组比较均降低,差异有显著性。与其他各组比较均降低,差异均有显著性(P<0.05);39℃和43℃组细胞增殖率与37℃对照组比较均升高,差异有显著性(P<0.05)。琼脂糖凝胶电泳显示紫杉醇作用48h后便可出现DNA梯带,并呈时间剂量性增强。最低0.10nmol/L浓度可见DNA梯带。倒置显微镜和电镜下可见细胞损伤及凋亡细胞。结论加热41℃时不同浓度紫杉醇对CNE-1细胞均有增殖抑制及诱导细胞凋亡作用;39℃或43℃热疗联合0.01nmol/L紫杉醇化疗时CNE-1细胞增殖能力最强。

低渗诱导高分化鼻咽癌细胞CNE-1容积激活性氯电流

目的:研究细胞外低渗诱导的高分化鼻咽癌细胞CNE-1的容积激活性氯电流。方法:全细胞膜片钳记录氯电流,通过应用氯通道阻断剂、离子置换和改变细胞容积方法研究该电流的特性。结果:当细胞在等渗环境中背景电流微弱且稳定,细胞外给予47%低渗刺激后电流迅速增大,呈外向优势,对阴离子通透性的大小为:I->Br->Cl->葡萄糖酸。氯通道阻断剂ATP和NPPB可逆性地抑制此电流,ATP的抑制作用在外向电流显著强于内向电流。此电流对细胞容积改变敏感,细胞肿胀时被激活,细胞发生皱缩时则被抑制。结论:细胞外低渗诱导CNE-1细胞产生氯电流,此电流对细胞容积的改变敏感,在CNE-1细胞容积调节中起重要作用。

新藤黄酸诱导人鼻咽癌细胞CNE-1凋亡以及对p-p38和p-ERK1/2蛋白的影响

目的探讨新藤黄酸对人鼻咽癌细胞CNE-1凋亡的作用以及对磷酸化p38、p-ERK1/2蛋白的影响。方法倒置显微镜观察新藤黄酸不同时间和不同浓度处理CNE-1细胞形态变化;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度新藤黄酸(0.25、0.5、1.0、2.0、4.0和8.0μmol.L-1)处理24 h、48 h和72 h对人鼻咽癌细胞CNE-1增殖的抑制作用;新藤黄酸作用CNE-1细胞24 h后的IC50为2.34μmol.L-1,再结合倒置显微镜观察的结果故选用2.0μmol.L-1作为药物作用浓度。Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率,并应用透射电子显微镜检测细胞凋亡形态改变及线粒体损伤;Western blot检测p-p38、p38、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白和线粒体凋亡相关蛋白Cytochrome C和Caspase-3蛋白的表达。结果新藤黄酸对人鼻咽癌细胞CNE-1生长和增殖有抑制作用,并随着新藤黄酸浓度的增加或作用时间的延长细胞活力明显下降。通过电镜可见2.0μmol.L-1新藤黄酸作用CNE-1细胞后细胞体积皱缩变圆,细胞核发生典型核染色质固缩等细胞凋亡形态学的变化;与control组相比包括对线粒体的损伤。Western blot表明p-p38蛋白表达有所上调,特别是在短时间(120 min)内,p-ERK1/2蛋白表达呈现时间依赖性下降;而p38和ERK1/2表达则基本不变。Cytochrome C和Caspase-3蛋白表达也呈现时间依赖性增加。结论新藤黄酸能诱导人鼻咽癌细胞CNE-1凋亡,增强Cytochrome C和Caspase-3蛋白表达,同时对p-p38和p-ERK1/2蛋白也有影响。

烟酰胺对鼻咽癌CNE-1细胞增殖、凋亡与迁移作用机制研究

目的探讨烟酰胺对人鼻咽癌CNE-1细胞增殖、凋亡及迁移的影响和机制。方法将人鼻咽癌CNE-1细胞株分为烟酰胺处理组(10、20、40、80μmol/L烟酰胺)及对照组。CCK-8法检测不同浓度烟酰胺作用48、72 h后CNE-1细胞增殖率,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测40μmol/L烟酰胺作用48 h后CNE-1细胞凋亡率和细胞周期,Transwell小室实验检测CNE-1细胞迁移及侵袭能力的变化,实时荧光定量PCR和Western blot分别检测CNE-1细胞中p53蛋白和基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA和蛋白水平。结果与对照组相比,CCK-8法检测结果显示,烟酰胺处理组CNE-1细胞增殖抑制率升高(P<0.01),且随着烟酰胺处理浓度的升高和处理时间的延长而升高,呈浓度和时间依赖性;40μmol/L烟酰胺处理CNE-1细胞48 h(即40μmol/L实验组)后,CNE-1细胞凋亡率升高(P<0.01);40μmol/L实验组G2/M期细胞比例增加,G_(0)/G_(1)期细胞比例降低(P<0.05);CNE-1细胞经40μmol/L烟酰胺处理后其侵袭及迁移能力均下降(P<0.01);40μmol/L实验组p53蛋白表达水平升高,MMP-9蛋白表达水平下降。结论烟酰胺可通过上调p53蛋白的表达、恢复细胞周期从而抑制人鼻咽癌CNE-1细胞增殖,促进其凋亡,同时亦可影响MMP-9蛋白的表达进而降低CNE-1细胞迁移和侵袭能力。

吉西他滨对人鼻咽癌细胞系CNE-1的放射增敏作用

目的:观察吉西他滨对鼻咽癌细胞CNE-1的放射增敏作用并探讨其作用机理。方法:用克隆形成法制作不同处理条件的细胞存活曲线,用流式细胞仪分析测定细胞周期分布。结果:单纯用药0.1μmol/L和2μmol/L吉西他滨短时间作用时(12小时)未见到肿瘤细胞毒性作用。两个浓度的吉西他滨处理CNE-1鼻咽癌细胞12小时和24小时后均见到放射增敏作用,放射增敏比(SERD0)及2Gy时的放射增敏比(SERSF2)分别为1.36,1.83;1.56,2.16及1.55,1.36,1.43,1.40。0.1μmol/L和2μmol/L的吉西他滨作用24小时后照射均见到G1期细胞阻滞。准阈剂量(Dq)值在2μmol/L中比较低,特别是在作用24小时后照射组。结论:吉西他滨对CNE-1鼻咽癌细胞具有明显的放射增敏作用,并且在高剂量照射时(Gy)随着剂量的增加及作用时间的延长增敏作用愈加明显,其作用机制可能与该药能阻止细胞由G1期进入S期及在高浓度、长时间作用时亚致死性损伤修复比较少有关。

埃克替尼对人鼻咽癌CNE-1细胞的放射增敏作用

目的探讨埃克替尼对人鼻咽癌离体细胞系CNE-1的放射增敏作用及机制。方法通过实验室对人鼻咽癌CNE-1进行细胞培养,对不同浓度埃克替尼及不同剂量放疗治疗进行实验分组。利用多靶单击数学模型拟合放射剂量-细胞存活曲线,用MTT法观察药物对体外培养的鼻咽癌CNE-1细胞凋亡的影响,用荧光染色法检测凋亡细胞。采用流式细胞术分析药物对CNE-1细胞周期的影响,高倍光镜下观察细胞形态。结果埃克替尼作用后,0.094μmol/L,0.188μmol/L,0.376μmol/L的放射增敏比分别为1.095,1.433,1.639,呈药物浓度依赖性。通过流式细胞仪检测,在药物浓度增加情况下,在4 Gy照射下可使周期中G0/G1有所增高(P<0.05),S期所占比率降低(P<0.05)。药物与放射联合的情况下,细胞凋亡比率增加明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。凋亡指数与药物剂量及放射剂量具有明显相关性(P<0.05),并且在两者联合的情况下,凋亡的程度有叠加(P<0.05)。结论埃克替尼对鼻咽癌离体细胞系CNE-1有明显的放射增敏效益,放射增敏机制与埃克替尼抑制肿瘤细胞的再修复能力,改变细胞分裂周期中分布,从而增加细胞凋亡率有关。

BCSC-1基因异位表达致鼻咽癌细胞CNE-2L2黏附性增强及细胞周期阻滞

目的探讨BCSC-1基因异位表达导致人鼻咽癌细胞CNE-2L2恶性行为减弱的机制。方法采用碘化丙啶染色DNA,流式细胞法检测细胞周期;Hoechest33258染色分析细胞分裂情况;细胞聚集实验检测细胞的黏附性;Western印迹分别检测E-钙黏蛋白、α-catenin和p53的表达。结果细胞周期分析显示异位表达BCSC-1的CNE-2L2细胞、野生型CNE-2L2细胞和转染空载体的CNE-2L2细胞分别有55.1%、43.4%和39.4%处于G0/G1期,分别有25.2%、28.7%和30.9%处于S期,分别有19.7%、27.9%和29.7%处于G2/M期。野生型CNE-2L2细胞和转染空载体的CNE-2L2细胞有较多细胞处于有丝分裂相,异位表达BCSC-1的CNE-2L2细胞几乎见不到有丝分裂相。异位表达BCSC-1的CNE-2L2细胞的黏附性和E-钙黏蛋白、α-catenin及p53的表达水平均高于野生型CNE-2L2细胞和转染空载体的CNE-2L2细胞。结论异位表达BCSC-1的CNE-2L2细胞的黏附性增强可能与E-钙黏蛋白和α-catenin表达增强相关;异位表达BCSC-1的CNE-2L2细胞阻滞于G1期可能与p53表达增加相关。这些变化可能在细胞恶性行为减弱中发挥作用。

葛根素对人鼻咽癌CNE-1细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

目的探讨葛根素对人鼻咽癌CNE-1细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其与氧化应激的关系。方法以不同浓度葛根素(0、25、50、100μM)处理CNE-1细胞48 h,采用CCK-8法及流式细胞仪分别检测细胞增殖及凋亡,同时检测细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)活性。结果不同浓度葛根素均可抑制CNE-1细胞增殖,诱导细胞凋亡,并增加细胞ROS及MDA含量,抑制T-SOD活性,且葛根素对CNE-1细胞的以上作用随其浓度的增加而增强。结论葛根素可抑制CNE-1细胞增殖,诱导细胞凋亡,作用机制可能与其促氧化应激有关。

大黄素致鼻咽癌细胞CNE-1胀亡和线粒体膜通透性的研究

目的:探讨大黄素对人鼻咽癌细胞增殖抑制、胀亡形态及线粒体膜通透性转换孔(PTP)。方法:将人鼻咽癌细胞株CNE-1分为不同药物处理组,并设立阴性对照组。采用MTT法观察大黄素对CNE细胞体外生长抑制作用,采用HE染色、透射电镜观察CNE细胞在药物作用后胀亡形态。通过紫外分光光度法观察大黄素对CNE细胞线粒体通透性影响。结果:大黄素呈浓度依赖性抑制CNE细胞体外生长(P<0.01)其IC50为206.78μg/ml。HE染色结果可见大黄素组细胞体积开始变大,细胞胞浆空泡化,胞浆内出现致密颗粒,细胞核开始变形细胞质空泡明显,电镜结果可以观察到线粒体肿胀,脊脱出,线粒体出现空泡化,表现为典型细胞胀亡。线粒体通透性转换孔开放实验发现线粒体开放程度与大黄素浓度有依赖性。结论:大黄素可以使鼻咽癌细胞走向胀亡,其途径可能与线粒体有关。

雷公藤甲素促进人鼻咽癌CNE-1细胞凋亡及机制

目的探讨雷公藤甲素促进人类鼻咽癌CNE-1细胞凋亡的机制。方法 MTT法检测雷公藤甲素对CNE-1的细胞毒作用;Hoechst 33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态学改变;Western Blot检测细胞凋亡相关蛋白的变化。结果雷公藤甲素对CNE-1有强大的细胞毒作用,IC50为0.029±0.007μmoL/L;该化合物可浓度依赖性地诱导CNE-1细胞发生凋亡,出现典型的凋亡小体及细胞凋亡相关蛋白Caspase-3的裂解活化。结论雷公藤甲素可浓度依赖性地诱导人鼻咽癌CNE-1细胞发生凋亡,且与Caspase-3的裂解活化有关。

青蒿对鼻咽癌细胞CNE-1、SUNE-1生长的影响

目的研究青蒿对鼻咽癌细胞系CNE-1、SUNE-1的生长抑制作用。方法①采用血清药理学的方法提取中草药青蒿的含药血清;②采用MTT法检测青蒿对CNE-1、SUNE-1细胞生长的抑制作用。结果 MTT法证实青蒿含药血清对鼻咽癌细胞CNE-1、SUNE-1细胞生长均有抑制作用;在SUNE-1细胞中无剂量-效应关系和时间效应关系;在CNE-1细胞中有剂量-效应依赖关系,无时间-效应依赖关系;结论青蒿含药血清对SUNE-1、CNE-1细胞的生长有抑制作用。

鹅不食草提取物对人鼻咽癌细胞CNE-1增殖抑制和凋亡诱导作用

考察鹅不食草提取物对人高分化鼻咽癌细胞CNE-1增殖的抑制作用,初步探讨其抗鼻咽癌分子机制。95%乙醇提取鹅不食草全草,噻唑蓝(MTT)法观察不同浓度提取物在不同时间对人高分化鼻咽癌细胞CNE-1增殖的抑制作用,Hoechst 33258荧光染色观察CNE-1凋亡情况及形态学变化,Western Blot检测CNE-1细胞内抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax的表达。结果表明:鹅不食草醇提物能显著抑制CNE-1增殖(P<0.01),并呈现明显的时间-剂量依赖性,其中诱导48和72 h的IC50分别为30.0和25.0μg/mL。阳性对照药顺铂的IC50为0.79μg/mL。Hoechst 33258荧光染色观察发现给药组CNE-1细胞出现不同程度细胞核变圆变亮,核染色质浓缩,产生核小体等明显的凋亡特征。Bcl-2蛋白相对表达量随醇提物浓度的增大而下降,Bax蛋白相对表达量随醇提物浓度的增大而上升,二者与对照组相比均有显著性差异(P<0.01)。鹅不食草醇提物对体外人高分化鼻咽癌细胞CNE-1具有明显的增殖抑制和凋亡诱导作用,其分子作用机制可能与Bcl-2蛋白表达下调、Bax蛋白表达上调有关。

姜黄素对鼻咽癌CNE-1细胞增殖和周期的影响

目的讨论姜黄素对鼻咽癌CNE-1细胞增殖和周期的影响。方法 MTT法检测增值抑制率,流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡。结果不同浓度的姜黄素作用细胞48h时,抑制率随浓度的增加而增加,流式细胞仪分析证实姜黄素能使CNE-1细胞阻滞在G2/M期,并出现亚二倍体凋亡峰。结论 姜黄素对CNE-1细胞具有增殖抑制作用,并阻滞细胞于G2/M期和诱导细胞凋亡。

青蒿素与蒿甲醚对人鼻咽癌CNE-1细胞放射增敏作用的比较研究

为了比较青蒿素(Artemisinin)和蒿甲醚(Artemether)对人鼻咽癌CNE-1细胞放射增敏作用的差异,取指数生长期的人鼻咽癌CNE-1细胞,采用细胞克隆形成法分别检测青蒿素和蒿甲醚对CNE-1细胞生长的抑制效应,比较两种药物抑制效应的差异性,并确定实验的药物浓度;将人鼻咽癌细胞分为对照组、单纯药物组、单纯照射组及联合治疗组。单纯药物组、联合治疗组分别分为青蒿素组和蒿甲醚亚组,射线照射剂量为0、2、4、6和8Gy,采用多靶单击数学模型拟合细胞存活曲线,取放射增敏比(SER)为达到相同生物效应时,单纯照射的剂量与联合治疗组的剂量之比。实验结果表明,两种药物对细胞的抑制作用均随着药物浓度的提高而增强,存在剂量依赖关系。青蒿素对CNE-1细胞的抑制作用高于蒿甲醚,测得青蒿素放射增敏比(SER)为1.272,蒿甲醚SER为1.481,表明蒿甲醚较青蒿素对人鼻咽癌CNE-1细胞具有更强的放射增敏作用。

组蛋白H3K27甲基化对人高分化鼻咽癌细胞系CNE-1增殖的抑制效应

目的分析特异性阻断组蛋白H3K27me3/2去甲基化反应对人高分化鼻咽癌CNE-1细胞增殖能力的调控作用及其分子机制。方法体外培养人鼻咽癌细胞系CNE-1,运用组蛋白H3K27me3/2去甲基化酶抑制剂GSK-J4特异性阻断组蛋白H3K27me3/2去甲基化反应。用含0.25、0.5、1.0、2.0和4.0 mmol/L的GSK-J4培养基(10%FBS的RPMI-1640培养液)作用于CNE-1细胞作为实验组,同时设溶剂对照(DMSO,二甲基亚砜)。激光共聚焦技术和流式细胞计量术分析细胞内组蛋白H3K27me3的表达水平;实时荧光定量PCR技术检测细胞内cyclinD1和Ki-67 mRNA的表达水平;用CCK-8法检测细胞的增殖活性;平板集落实验检测细胞集落形成能力;流式细胞计量术检测细胞周期的分布。结果实验组细胞内组蛋白H3K27me3表达水平较对照组明显增高(P<0.05);实验组细胞内cyclinD1和Ki-67 mRNA表达水平较对照组明显下调(P<0.05);CNE-1细胞活力随GSK-J4作用浓度的增加逐渐降低,呈浓度依赖性;实验组细胞增殖活力和集落形成能力较对照组明显下降(P<0.05);实验组G0/G1期细胞百分数较对照组增多,S期减少(P<0.05)。结论上调CNE-1细胞内组蛋白H3K27的甲基化修饰水平可以诱导细胞周期阻滞,抑制细胞增殖,作用机制可能与下调cyclinD1和Ki-67 mRNA水平相关。

二甲双胍抑制鼻咽癌细胞CNE-1增殖并诱导其凋亡的作用机制

目的二甲双胍可抑制鼻咽癌细胞的增殖,但作用机制尚不清楚。文章研究二甲双胍对鼻咽癌细胞CNE-1增殖与凋亡的效应,并探讨miR-let-7a、IGF-1R在其中的作用。方法分别以不同浓度二甲双胍(0、5、10、20、40、80mmol/L)干预鼻咽癌细胞CNE-124h后,采用CCK8法检测细胞增殖活性;流式细胞仪技术分析细胞凋亡率;实时荧光定量PCR(qPCR)检测bcl-2、bax、IGF-1RmRNA表达水平,miR-let-7a的表达水平;Westernblot方法检测IGF-1R蛋白的表达。结果CCK8结果显示,各浓度组二甲双胍处理细胞24h后,二甲双胍可抑制CNE-1细胞的增殖活性,随药物浓度增高抑制作用呈增强趋势,差异均有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪凋亡分析结果显示,0、5、10、20、40mmol/L二甲双胍处理后总凋亡率分别为(6.17±0.74)%、(8.11±1.29)%、(11.97±3.82)%、(13.94±2.98)%、(24.2±2.79)%;与0mmol/L二甲双胍处理比较相比,10、20、40mmol/L二甲双胍处理后凋亡率随浓度升高而呈上升趋势(P<0.05)。qPCR结果显示,0、5、10、20mmol/L浓度二甲双胍作用后24h后,CNE-1细胞的bcl-2、bcl-2/bax、IGF-1R、miR-let-7amRNA表达水平随二甲双胍浓度增加而逐渐下调,而bax基因表达水平则上调,与0mmol/L二甲双胍作用后相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论二甲双胍有抑制鼻咽癌细胞CNE-1增殖并诱导其凋亡的作用,其机制可能与miR-let-7a表达上调、IGF-1R表达下调有关。

PARP-1对鼻咽癌CNE-2细胞迁移及侵袭能力的影响

目的探讨聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1[poly(ADP-ribose)polymerase-1,PARP-1]对鼻咽癌CNE-2细胞迁移、侵袭能力的影响。方法将鼻咽癌CNE-2细胞分为空白对照组(CNE-2组)、转染阴性病毒对照组(NC组)、转染稳定沉默PARP-1基因组(LV组)和未照射组(CNE-2-0 Gy组),4组细胞在照射前划痕、前3组给予10 Gy剂量照射,48 h后计算细胞迁移率、穿入下室细胞数,采用Western blot法检测PARP-1蛋白及Vimentin蛋白的表达。结果照射后48 h,CNE-2组、NC组、LV组和CNE-2-0 Gy组的细胞迁移率分别为(79.37±5.75)%、(70.13±6.56)%、(20.83±10.91)%和(27.13±7.50)%;迁移穿入下室的细胞数分别为(60.00±2.66)个、(52.33±9.71)个、(13.67±3.51)个和(23.33±4.04)个,侵袭入下室细胞数分别为(33.00±2.00)个、(29.00±1.72)个、(6.67±2.52)个和(9.67±1.16)个;PARP-1蛋白相对表达量分别为1.00±0.00、1.02±0.04、0.47±0.05和0.47±0.06,Vimentin蛋白相对表达量分别为1.00±0.00、0.99±0.04、0.24±0.02及0.27±0.03;LV组细胞迁移率较CNE-2组及NC组降低,迁移及侵袭入下室的细胞数较少,PARP-1及Vimentin蛋白相对表达量下调,差异均有统计学意义(P<0.05);LV组与CNE-2-0 Gy组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PARP-1照射后激活可促进鼻咽癌CNE-2细胞迁移、侵袭。

辐射对鼻咽癌CNE-1细胞干细胞表型表达影响

目的探讨辐射对鼻咽癌(NPC)细胞的干细胞表型表达的影响。方法经2 Gy ^60钴(^60Co)γ射线分别连续4次与7次照射鼻咽癌CNE-1细胞,建立辐射后CNE-1残癌细胞E-R4与E-R7。通过成球实验检测成球能力;采用实时定量聚合酶链式反应、免疫印迹检测干细胞表型标志物[性别决定区Y框蛋白2 (SOX2)、八聚体结合转录因子4(OCT4)及Kruppel样因子4(KLF4)]的变化。结果成球实验结果显示,照射后,E-R4、E-R7的成球体积较亲本CNE-1细胞增大。照射后,E-R4、E-R7成球数量分别为(51.7±2.5)个、(69.7±0.6)个,明显高于亲本CNE-1细胞的(37.0±2.0)个,且E-R7成球数量高于E-R4,差异均有统计学意义(P<0.05)。实时定量聚合酶链式反应结果显示,E-R4、E-R7细胞中SOX2、OCT4及KLF4的mRNA表达水平较亲本CNE-1细胞明显提高,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫印迹结果显示,E-R4、E-R7细胞中SOX2、OCT4及KLF4的蛋白表达水平较亲本CNE-1细胞明显提高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 2 Gy ^60Coγ射线连续照射可通过诱导SOX2、OCT4及KLF4提高鼻咽癌CNE-1细胞干细胞表型的表达。

豆豉香气成分对CNE-1人鼻咽癌细胞凋亡诱导效果及机制（英文）

豆豉是一种具有很多益处的传统大豆发酵食品。本研究的目的是确定其香气成分在体外诱导细胞凋亡的作用及检验豆豉香气成分(volatile components of Douchi,VCD)与抗癌作用之间的关系。经0.4、0.8、1.6 mg/mL的VCD处理48 h后,人鼻咽癌CNE-1细胞的增殖受到抑制,且1.6 mg/mL的VCD具有最高的抑制效果(抑制率84.6%)。0.4 mg/mL和0.8 mg/mL的VCD处理同样表现出很好的抑制效果,抑制率分别为29.7%和55.6%。流式细胞术分析结果显示1.6 mg/mL VCD作用CNE-1细胞后处于G1期细胞有36.2%。通过逆转录-聚合酶链反应分析,VCD通过上调天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(cysteine-aspartic acid protease,caspase)-3、caspase-8、caspase-9、B细胞淋巴瘤因子-2相关X蛋白、p53、p21、E2F1、p73、核因子κB抑制蛋白-α和下调B细胞淋巴瘤因子-2、超大B细胞淋巴瘤因子-2、人凋亡抑制蛋白(human inhibitor of apoptosis protein,HIAP)-1、HIAP-2、核因子活化B细胞κ轻链增强子-κB的mRNA的表达来显著诱导癌细胞凋亡(P<0.05),并呈剂量依赖性。VCD包含的63种化合物可能导致CNE-1细胞的凋亡。这些结果表明,VCD具有体外诱导CNE-1细胞凋亡的作用,这些效果来源于VCD复杂的化学成分。