5-氨基乙酰丙酸光动力杀伤人鼻咽癌耐药/非耐药细胞株的实验研究

目的观察5-氨基乙酰丙酸(5-aminolevulinic acid,5-ALA)光动力学效应对体外培养人鼻咽癌细胞株CNE2及其顺铂耐药株CNE2/DDP的生物作用,探讨光动力治疗多药耐药鼻咽癌的可行性。方法对CNE2与CNE2/DDP分别加入不同浓度的5-ALA(0.01、0.05、0.10、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0mmol/L)孵育4h,予波长为630nm的半导体激光进行照射,能量密度分别为2、5、10、20J/cm2,继续孵育24h,用四唑盐比色法测定细胞存活率;两株细胞与2.0mmol/L浓度的5-ALA溶液共孵育4h后,用流式细胞仪检测细胞内生性光敏剂原卟啉Ⅸ的荧光强度。结果5-ALA光动力对体外培养的CNE2和CNE2/DDP细胞均有杀伤作用,表现为对5-ALA浓度、激光剂量的量-效依赖关系。激光能量为20J/cm2时,5-ALA对CNE2和CNE2/DDP细胞的半数杀伤浓度分别为0.07mmol/L与0.375mmol/L,二者比较差异显著(P<0.01);不同5-ALA浓度、不同激光剂量条件下CNE2细胞存活率显著低于CNE2/DDP(P<0.05);CNE2和CNE2/DDP的细胞内荧光强度分别为(197.33±1.45)、(106.36±2.31),相差非常显著(P<0.01)。结论5-ALA-PDT对CNE2和CNE2/DDP均有杀伤作用,但CNE2/DDP对其敏感性低于CNE2,表明CNE2/DDP对5-ALA-PDT存在一定程度的交叉抗性,增加5-ALA浓度和/或增大激光剂量可以在一定程度上克服这种抵抗。

血卟啉衍生物光动力效应杀伤人鼻咽癌耐药与非耐药细胞株的实验研究

目的观察血卟啉衍生物(hematoporphyrin derivative,HpD)光动力学效应(photodynamic therapy,PDT)对体外培养人鼻咽癌细胞株CNE2及其顺铂耐药株CNE2/DDP的生物作用;探讨PDT治疗多药耐药(mul-tidrug resistance,MDR)鼻咽癌的可行性。方法对体外培养的CNE2与CNE2/DDP细胞分别加入0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、5.0μg/ml不同浓度的HpD,孵育4h,给予波长为630nm的半导体激光进行照射,照射的功率密度为20mW/cm2,照射能量密度分别为2、5、10、20J/cm2,继续孵育24h,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞存活率。结果血卟啉衍生物介导的光动力(HpD-PDT)对体外培养的人鼻咽癌CNE2和CNE2/DDP细胞均有杀伤作用,表现为HpD浓度、激光剂量的量-效依赖关系。激光能量为20J/cm2时,HpD对CNE2和CNE2/DDP细胞半数杀伤浓度分别为0.7μg/ml与1.5μg/ml,两者比较有统计学意义(P<0.01)。相同HpD浓度、激光剂量条件下,CNE2/DDP细胞存活率显著高于CNE2细胞(P<0.05)。结论HpD-PDT对CNE2和CNE2/DDP细胞均有杀伤作用,但CNE2/DDP细胞对其敏感性低于CNE2细胞,表明CNE2/DDP对HpD-PDT存在一定程度的交叉抗性,增加HpD浓度和增大激光剂量可以在一定程度上克服这种抵抗。

沉默stathmin逆转顺铂耐药鼻咽癌细胞耐药性的作用机制

目的探讨沉默stathmin对顺铂(DDP)耐药鼻咽癌细胞耐药性的影响及其作用机制。方法采用浓度递增法建立DDP耐药鼻咽癌细胞CNE2/DDP,将si-stathmin、si-NC分别转染至CNE2/DDP细胞,并分别作为sistathmin组和si-NC组。采用不同浓度DDP处理CNE2、CNE2/DDP细胞及si-stathmin组、si-NC组CNE2/DDP细胞。噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖抑制率;蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中stathmin、cleaved caspase 3、Bcl-2、SHH、PTCH1、GLI-1蛋白的表达水平;流式细胞术检测细胞的凋亡情况。结果DDP对CNE2细胞的半抑制浓度(IC50)为(0.243±0.012)μg/ml,对CNE2/DDP细胞的IC50为(1.347±0.070)μg/ml,耐药指数(RI)为5.591。DDP对si-stathmin组CNE2/DDP细胞的IC50为(0.582±0.025)μg/ml,对si-NC组CNE2/DDP细胞的IC50为(1.320±0.058)μg/ml。CNE2/DDP细胞中stathmin蛋白的相对表达量明显高于CNE2细胞(P﹤0.01);同一浓度DDP处理后,si-stathmin组CNE2/DPP细胞的增殖抑制率、凋亡率均明显高于si-NC组(P﹤0.01);si-stathmin组CNE2/DDP细胞中stathmin、Bcl-2、SHH、PTCH1、GLI-1蛋白的相对表达量均明显低于si-NC组,cleaved caspase 3蛋白的相对表达量明显高于si-NC组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。结论沉默stathmin可以逆转CNE2/DDP细胞的DDP耐药性,其机制可能与促进细胞凋亡,失活SHH信号通路有关。