马桑内酯激活的星形胶质细胞条件培养液及CNQX对正常大鼠脑内及培养的神经元内NSF的影响

目的揭示星形胶质细胞对神经元内N-乙基顺丁烯二酰亚胺敏感性的融合蛋白(NSF)和AMPA受体的影响及其在癫痫发病中的作用。方法将马桑内酯激活的星形胶质细胞条件培养液(ACM)注入正常SD大鼠侧脑室,观察其行为变化;运用免疫组织化学方法观察其大脑皮质、海马内NSF免疫反应的变化;将培养的神经元随机分为对照组、ACM组及CNQX+ACM组,免疫细胞化学方法观察NSF表达的变化,Western blotting法检测NSF含量的变化。结果ACM组大鼠在注射后30min出现癫痫行为。免疫组织化学染色结果显示:1.ACM作用后2h及4h,大鼠大脑皮质及海马内NSF免疫反应阳性神经元数和平均吸光度明显降低(P<0.05);2.培养的神经元的免疫细胞化学染色结果显示,ACM组在作用4h及8h时,NSF免疫阳性反应产物与对照组比较明显减少(P<0.05)。Western blotting法检测NSF含量,在ACM作用4h及8h时较对照组及CNQX+ACM组明显减少(P<0.05)。结论ACM可下调神经元内NSF的表达,并导致动物痫性发作,而运用AMPA受体拮抗剂CNQX则能阻断其下调作用,提示ACM对NSF的下调作用可能与AMPA受体有关。

CNQX对伤害性刺激隐神经诱发大鼠脊髓Fos蛋白表达的影响

目的探讨伤害性刺激隐神经(SN)能否诱发脊髓神经元Fos蛋白表达及发生机制。方法应用免疫组化方法观察伤害性刺激SN和尾静脉注射谷氨酸非NMDA受体拮抗剂(CNQX)后诱发脊髓神经元Fos蛋白表达的变化。结果伤害性刺激SN后,诱导脊髓神经元Fos蛋白表达显著增强,CNQX拮抗了Fos蛋白表达的显著增强。结论以伤害性刺激SN模拟躯体痛后,CNQX拮抗了伤害性刺激SN引起的脊髓神经元Fos蛋白表达的显著增加,表明非NMDA受体在躯体痛的调控中起到了重要的作用。

谷氨酸AMPA受体拮抗剂CNQX对大鼠颠倒学习的影响

研究利用旋转T迷宫装置,通过食物强化,分别训练大鼠视觉辨别学习和颠倒学习任务;每次训练前均向动物腹腔注射20μg/kg的谷氨酸AMPA受体拮抗剂CNQX,以考察其对大鼠学习能力的影响.结果发现,CNQX并不影响正常学习,但对于颠倒学习,CNQX注射组的学习次数较控制组显著增加,说明CNQX可以对大鼠的认知灵活性造成损害.

CNQX对清醒大鼠习得性LTP中海马DG区谷氨酸浓度的影响

目的:观察条件反射的建立和消退过程中,ɑ-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)受体拮抗剂对自由活动大鼠海马齿状回(DG)细胞外液中Glu浓度的影响,并进一步探讨它们与习得性突触效应长时程增强(LD-LTP)和行为学习之间的关系。方法:本实验使用脑部微量透析法、脑部微量注射法、高效液相色谱法、慢性埋植电极技术以及行为学习监测与电生理记录相结合的实验方法。结果:未进行条件反射训练大鼠海马DG注射CNQX后,并不影响DG区细胞外液中的Glu水平,但其PS幅值从注射前的100%明显下降到65.47%±13.82%(P<0.01)。在条件反射的训练过程中,DG区注射Ringer’s液,Glu浓度出现明显增加,而随着条件反射消退,又逐渐回降,这与DG区群体峰电位峰值以及行为正确反应率的变化呈平行关系;DG区微量注射CNQX,明显抑制条件反射的形成,而且随着训练天数的增加,Glu浓度逐渐增加达到训练开始前的285.51%±43.83%(P<0.01),但PS幅值却没有明显的变化(P>0.05)。结论:AMPA受体在海马DG区习得性LTP的形成过程中起触发作用,此受体的激活是海马DG区习得性LTP形成的必要条件。

CNQX对乙醇、乙醛调控大脑皮质神经元神经甾体水平的影响

目的 研究乙醇、乙醛对原代培养大鼠大脑皮质神经元神经甾体水平的影响以及与AMPA受体调控的相关性. 方法 应用AMPA受体拮抗剂CNQX阻断AMPA受体,用50mmol/L乙醇或25 mmol/L乙醛处理神经元,收集细胞培养上清,采用高效液相色谱质谱法分离测定游离型神经甾体孕烯醇酮（PREG）、脱氢表雄酮（DHEA）、别孕烯醇酮（AP）及结合型神经甾体脱氢表雄酮硫酸酯（DHEAS）、孕烯醇酮硫酸酯（PREGS）的含量,观察CNQX对乙醇、乙醛调控原代培养神经元神经甾体水平的影响. 结果乙醇可明显升高神经元PREG、AP和PREGS的水平,与PBS对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;乙醛可明显升高神经元PREG、DHEA、PREGS和DHEAS的水平,与PBS对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.CNQX反转了乙醇升高PREG、PREGS水平的作用以及乙醛升高PREG、DHEAS水平的作用,却使AP水平明显升高,组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）. 结论 乙醇、乙醛对大脑皮质神经元神经甾体PREG、DHEA、AP、PREGS和DHEAS的影响各不相同,CNQX反转了乙醇上调PREG、PREGS水平的作用以及乙醛上调PREG、DHEAS水平的作用.

肝郁脾虚证大鼠双侧杏仁核注射CNQX后行为变化及逍遥散的调节作用

目的:从行为学角度探讨逍遥散治疗肝郁脾虚证的调节机制。方法:75只雄性SD大鼠随机等分为5组,正常组、模型组、假手术组、6-氰基-7-硝基喹喔啉-2,3-二酮(CNQX)组和逍遥散组。以21d慢性束缚应激方法造肝郁脾虚证模型组,在此基础上,运用脑立体定位仪埋管微量注射α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)受体的拮抗剂造CNQX组,为评估手术创伤对模型的影响程度加造假手术组。逍遥散组造模方法和CNQX组相似,突出逍遥散和CNQX二者干预的可比性,于第1、7、14、21天分别比较CNQX组和逍遥散组行为变化各项指标趋势是否一致。结果:模型组大鼠逐步呈现肝郁脾虚证表现;CNQX组起到干预治疗作用,大鼠焦躁状态得到抑制;逍遥散组大鼠表现自然,逍遥散起到较好的调节作用。排除了手术创伤等混杂因子,逍遥散组和CNQX组行为学实验结果变化趋势逐步相似。结论:结合前期RT-PCR和免疫组化实验,从宏观行为学角度,进一步推断逍遥散和CNQX有一条相似作用通路,即通过纠正杏仁核和海马的"兴奋-抑制"失衡,重建稳态,来治疗肝郁脾虚证。

CNQX在小鼠脑不同类型突触分泌中的作用

目的:探讨6-氰基-7-硝基喹喔啉-2,3-二酮(CNQX)在小鼠脑不同类型突触分泌中的作用。方法:体外培养新生小鼠大脑皮层神经细胞与海马神经细胞,在加有不同浓度的CNQX的细胞外液中对细胞进行电生理记录,分别记录m EPSC的频率和e EPSC的幅值。结果:CNQX作用于诱发性神经递质释放的半抑制浓度(IC_(50))显著大于自发性神经递质释放的半抑制浓度,CNQX对自发性神经递质的释放作用效果更加明显。但对于不同脑区,CNQX的作用效果差异并不明显。结论:CNQX在阻断兴奋性神经递质自发释放和诱发释放时可能有不同的机制,但是并不具有脑区特异性。

清醒大鼠室旁核灌流谷氨酸受体阻断剂对压力感受性反射的影响

目的:探讨下丘脑室旁核(PVN)内谷氨酸参与压力感受性反射中枢调节的神经化学机制。方法:在清醒大鼠,用脑部微量透析法和高效液相色谱法观察静脉注射苯肾上腺素诱发压力感受性反射对PVN区谷氨酸含量的影响;NMDA受体阻断剂MK-801或非NMDA受体阻断剂CNQX直接灌流PVN区并诱发压力感受性反射,进一步探讨PVN区谷氨酸对压力感受性反射的作用。结果:①静脉注射苯肾上腺素诱发压力感受性反射时,PVN内的谷氨酸含量迅速升高到注射前的384.82%±91.77%(P<0.01)。②PVN区灌流谷氨酸受体阻断剂MK-801或CNQX,同时诱发压力感受性反射,其血压升值明显减少,心率降值明显增加(P<0.01),压力感受性反射的敏感性(△HR/△MAP)明显增加(P<0.01)。结论:PVN内的谷氨酸可能通过离子型谷氨酸受体参与压力感受性反射的中枢调节,而且此调节作用可能是抑制性的。

谷氨酸离子型受体拮抗剂对光动力治疗大鼠颅内C6胶质瘤的影响

背景与目的:胶质瘤是神经外科领域研究的难点。本研究观察NMDA型谷氨酸受体拮抗剂MK801和AMPA型谷氨酸受体拮抗剂CNQX对光动力治疗(photodynamic therapy,PDT)大鼠颅内C6胶质瘤的影响。方法:32只颅内种植C6胶质瘤的荷瘤鼠随机分为单纯光照射组(n=8)、PDT治疗组(n=8)、PDT+MK801组(n=8)和PDT+CNQX组(n=8),行PDT治疗,并使用微透析仪局部给予MK801和CNQX,观察了动物生存期、肿瘤体积、尸检病理情况。结果:PDT+MK801组荷瘤鼠平均生存期最长[(44.5±2.5)d],PDT组次之[(40.3±2.3)d],PDT+CNQX组为(34.9±2.6)d,单纯光照射组最短[(28.9±2.4)d],荷瘤鼠PDT治疗或光照射后10d肿瘤体积单纯光照射组最大,为(29.54±6.43)mm3,PDT+CNQX组次之,为(24.60±0.53)mm3;PDT组荷瘤鼠C6胶质瘤体积为(21.49±0.41)mm3;PDT+MK801组肿瘤体积最小,为(18.50±0.47)mm3。结论:PDT治疗能延长荷瘤动物的生存期;MK801可以增强光动力治疗胶质瘤的效果,而CNQX却降低了光动力治疗胶质瘤的效果。

非NMDA受体拮抗剂对大鼠牙髓伤害性刺激诱导的延髓Fos表达

目的 研究兴奋性氨基酸非 NMDA受体在牙髓伤害性信息传递中的作用 ,为揭示牙痛的产生机制打下基础 .方法 将实验动物随机分为 4组 .第 1组单纯给予机械穿髓刺激 ;第 2组预先侧脑室注射非 NMDA受体拮抗剂 CNQX,再给予相同的穿髓刺激 ;第 3组只行 CNQX侧脑室注射 ,不予穿髓刺激 ;第 4组为正常对照组 .动物存活相同时间后取延髓做 Fos蛋白免疫组化反应 ,观察 3组动物 Fos蛋白表达变化 .结果 第 2组动物延髓 Fos免疫反应阳性细胞的数量与第 1组比较没有显著性差异 .第 3组只有很少 Fos阳性细胞出现 .结论 兴奋性氨基酸非 NMDA受体在机械穿髓致痛动物模型中很可能不参与介导牙髓伤害性信息的中枢传递 .

逍遥散对肝郁脾虚证大鼠边缘系统神经元超微结构的影响

目的:探讨慢性束缚应激所致肝郁脾虚证大鼠海马CA1区和杏仁核细胞超微结构的变化,明确逍遥散和6-氰基-7-硝喹啉-2,3-双酮(CNQX)对慢性应激所致肝郁脾虚证的保护作用及其机制。方法:将100只雄性SD大鼠随机分为正常组(A组)、假手术组(B组)、模型组(C组)、逍遥散组(D组)、CNQX组(E组)和逍遥散+CNQX组(F组)。C、D、E、F组大鼠通过连续21d慢性束缚应激建立肝郁脾虚证候模型,D、F组大鼠每天束缚前灌服逍遥散5.32g/kg,E、F组大鼠在第1、4、7、10、13、16、19、21d右侧杏仁核区微量注射α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)受体拮抗剂CNQX0.5μl。第22d处死动物,用透射电镜方法观察海马CA1区和左侧杏仁核神经细胞和突触的形态结构。结果:模型组大鼠海马出现了细胞核变形、线粒体嵴模糊,突触结构不清等,正常组、假手术组和给药各组大鼠CA1区未见明显异常;各组大鼠杏仁核均未见明显异常。结论:逍遥散可改善慢性束缚应激导致的海马CA1区超微结构的损伤,其作用机制可能与CNQX一致。

逍遥散对肝郁脾虚证模型大鼠海马CA1区和杏仁核BLA区GluR2阳性细胞数变化的影响

目的:考察逍遥散和CNQX(6-氰基-7-nitroquinoxa-line-2,3-二酮,AMPA受体的拮抗剂)分别对肝郁脾虚证模型大鼠海马CA1区和杏仁核BLA区GluR2阳性细胞数变化的影响。方法:75只SD雄性大鼠随机等分为正常组、模型组、假手术组、CNQX组和逍遥散组。以21d慢性束缚应激造肝郁脾虚证模型组,在此基础上,运用脑立体定位仪微量注射造CNQX组,除逍遥散组灌胃逍遥散悬液外,其余组均给予相应生理盐水。比较各组海马CA1区和杏仁核BLA区GluR2阳性细胞数变化趋势是否一致。结果:在海马CA1区,正常组、CNQX组和逍遥散组间GluR2阳性细胞数变化均无统计学意义;在杏仁核BLA区,CNQX组由于拮抗AMPA受体,GluR2阳性细胞数最少。其它各组变化趋势与CA1区各组间变化趋势相反,且正常组和逍遥散组比较差异无统计学意义。排除了手术创伤等混杂因子,在海马CA1区和杏仁核BLA区,逍遥散组和CNQX组GluR2阳性细胞数变化趋势均相似。结论:确证逍遥散有1条调节通路和CNQX作用机制相似,通过纠正杏仁核和海马的"兴奋-抑制"失衡,重建稳态,来治疗肝郁脾虚证。

逍遥散调节肝郁脾虚大鼠中枢AMPA受体及相关蛋白的机制研究

目的:观察逍遥散和6-氰基-7-硝喹啉-2,3-双酮(CNQX)对慢性束缚应激所致肝郁脾虚证大鼠中枢AMPA受体及其相关蛋白表达的影响,探讨逍遥散的作用机制。方法:将100只雄性SD大鼠随机分为正常组(A组)、假手术组(B组)、模型组(C组)、逍遥散组(D组)、CNQX组(E组)和逍遥散+CNQX组(F组)。C、D、E、F组大鼠通过连续21d慢性束缚应激建立肝郁脾虚证候模型,D、F组大鼠每天束缚前灌服逍遥散5.32g/kg,E、F组大鼠隔天右侧杏仁核区微量注射α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)受体拮抗剂CNQX 0.5μL。各组动物第22d处死,免疫组化方法检测海马CA1区、CA3区、基底外侧杏仁核(BLA)谷氨酸受体2/3(GluR2/3)、N-乙基顺丁烯二酰亚胺敏感性的融合蛋白(NSF)、PKC作用蛋白1(PICK1)水平。结果:模型大鼠GluR2/3在海马CA1、CA3区明显减少,BLA区明显增加;NSF在海马CA1、CA3区有减少趋势;PICK1在海马CA3区明显增加。CNQX和逍遥散对模型大鼠GluR2/3 PICK1在海马的变化均有调节作用。逍遥散联合CNQX作用于慢性束缚应激大鼠与单独使用逍遥散或CNQX后呈现一致性。结论:调节AMPA受体及其相关蛋白在海马各区和杏仁核的兴奋性至少是逍遥散调节突触可塑性、进一步治疗应激和抑郁的作用途径之一。

逍遥散对肝郁脾虚证模型大鼠行为学变化的调节作用

目的探讨逍遥散治疗慢性应激致肝郁脾虚证的作用机制。方法将100只雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、逍遥散组、6-氰基-7-硝喹啉-2,3-双酮(CNQX)组和联合用药组。造模大鼠通过连续21 d慢性束缚应激建立肝郁脾虚证候模型,逍遥散组、联合用药组大鼠每天束缚前灌服逍遥散5.32 g/kg,CNQX组、联合用药组大鼠在第1、4、7、10、13、16、19、21天右侧杏仁核区微量注射α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)受体拮抗剂CNQX 0.5μg。各组大鼠第22天进行旷场实验和高架十字迷宫实验。结果在旷场实验中,模型组大鼠的中央区停留时间明显增多,5 m in运动总长度明显减少。在高架十字迷宫实验中,模型组大鼠进入中央区的次数和停留时间、进入开放臂的次数和停留时间均明显减少;封闭臂停留时间明显增加。CNQX和逍遥散对旷场和高架十字迷宫各项指标的改善作用明显,二者联合作用效果较好。结论逍遥散可改善肝郁脾虚模型大鼠的行为学变化,其作用机制可能与CNQX一致。