川芎嗪对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP的逆转作用研究

目的建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP,探讨川芎嗪对COC1/DDP顺铂耐药性的逆转作用及其机制。方法采用逐步递增DDP浓度、体外间歇诱导法诱导建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP;CCK-8(cell counting kit-8)检测川芎嗪对COC1/DDP细胞顺铂耐药性的逆转作用;GSH和GSSG试剂盒检测细胞内GSH的水平,高效液相色谱测定细胞内顺铂的含量。结果历时5个月建立了在1.0μg/mL DDP作用下生长良好的耐药细胞株COC1/DDP,耐药指数为9.44,对卡铂、长春新碱和阿霉素有不同程度的交叉耐药性;川芎嗪0.25 mg/mL对COC1/DDP的顺铂耐药性有逆转作用,逆转倍数达到3.76倍;与COC1比较,COC1/DDP细胞内GSH水平增高,顺铂含量下降,但经川芎嗪0.25 mg/mL干预后,COC1/DDP胞内的GSH水平降低,顺铂的含量增加(P<0.01)。结论川芎嗪对COC1/DDP的顺铂耐药性有逆转作用,其机制可能与干预COC1/DDP细胞内GSH/GST-π解毒系统,增加细胞内顺铂的含量有关。

低频超声对卵巢癌COC1细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察低频超声对人卵巢癌COC1体外生长的影响。方法 以低频超声 (频率 0 .2 4MHz,剂量 5 .12W /cm2 × 5s)辐照COC1细胞 ,采用MTT观察超声对COC1细胞增殖的抑制作用 ;流式细胞仪(FCM)、TUNEL法和光、电镜检测细胞凋亡。结果 超声波能够显著抑制卵巢癌COC1细胞增殖 ,辐照后 12h、2 4h、36h和 4 8h ,其MTT光吸收值与对照组相比显著降低 ;FCM检测超声辐照后 6h的COC1细胞凋亡率达 (2 5 .5 7± 4 .6 8) % ;同时TUNEL法观察到棕褐色着染的凋亡细胞 ;相差显微镜及电镜下可见凋亡小体形成等典型形态学改变。结论 低频超声辐照对人卵巢癌COC1细胞体外生长具有明显的抑制作用 ,并可诱导其凋亡。

姜黄素逆转卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP耐药性及机制的研究

目的：探讨姜黄素对耐药卵巢癌细胞增殖、凋亡及对顺铂敏感性的影响并探讨其机制。方法：采用MTT法检测顺铂、姜黄素、顺铂与姜黄素合用对COC1/DDP细胞的生长抑制作用;用流式细胞仪检测2.5μg/ml顺铂、20μmol/L姜黄素、2.5μg/ml顺铂与20μmol/L姜黄素合用作用于COC1/DDP细胞48h后的细胞凋亡率;RT-PCR法检测上述各组细胞凋亡相关基因Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表达。结果：姜黄素浓度在（15-35）μmol/L以内时对COC1/DDP有明显的增殖抑制作用,且呈一定的剂量-效应关系。顺铂的浓度在（1.25-5）μg/ml时加入姜黄素20μmol/L后耐药细胞生存率下降明显（P〈0.05）,尤以顺铂2.5μg/ml和姜黄素20μmol/L联合作用时,耐药细胞生存率下降最明显;COC1/DDP中顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂相比,凋亡率明显增加（P〈0.05）;顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂相比Bcl-2、Sur-vivin mRNA的表达明显降低（P〈0.05）,Caspase-3 mRNA的表达明显增高（P〈0.05）。结论：姜黄素能够显著抑制COC1/DDP增殖,并能增强该细胞系对顺铂的敏感性,其机制可能与降低Bcl-2、Survivin基因的表达,增加Caspase-3基因的表达有关。

纳米雄黄对卵巢癌细胞COC1凋亡的影响

目的探讨纳米雄黄对卵巢癌细胞COC1的凋亡作用。方法 0.6μmol/L浓度的纳米雄黄作用于COC1细胞,于不同时间收集的细胞。倒置显微镜下观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR检测细胞中Bax、Bcl-2和Caspase-3的mRNA的表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达水平。结果 0.6μmol/L浓度的纳米雄黄作用于COC1细胞48h后出现显著的凋亡形态改变;纳米雄黄显著的促进细胞凋亡,并随着纳米雄黄处理COC1细胞时间的延长凋亡率显著性增加(P<0.05);随着纳米雄黄处理间的延长COC1细胞中的Bax和Caspase-3的mRNA和蛋白表达水平显著增加(P<0.05),Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论纳米雄黄对COC1细胞有显著的促凋亡作用,其作用机制可能与升高Bax和Caspase-3的表达和降低Bcl-2的表达有关。

姜黄素对卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP的增敏作用及其机制的研究

目的：探讨姜黄素对卵巢癌耐药细胞系COC1／DDP的增敏作用并探讨其机制。方法：采用MTT法检测姜黄素对COC1／DDP细胞的增敏作用；用流式细胞仪检测单用顺铂、单用姜黄素、顺铂与姜黄素合用作用于COC1／DDP细胞48h后的细胞凋亡率；Westernblot法检测单用顺铂及顺铂与姜黄素合用后各组细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表达。结果：姜黄素浓度在15～35μmol／L以内时以一定的剂量一效应关系对COC1／DDP有明显的增殖抑制作用。顺铂的浓度在1．25～5mg／L时加入20μmol／L姜黄素后耐药细胞生存率下降明显（P〈0．05），尤以2．5mg／L顺铂和20μmol／L姜黄素联合作用时，耐药细胞生存率下降最明显；COC1／DDP中顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂及单用姜黄素相比，凋亡率明显增加（P〈0．05）；顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂相比Bcl-2、Survivin蛋白的表达明显降低（P〈0．05），Caspase-3蛋白的表达明显增高（P〈0．05）。结论：姜黄素能够显著抑制COC-／DDP增殖，并能增强该细胞系对顺铂的敏感性，其机制可能与降低Bcl-2、Survivin蛋白的表达，增加CasDase-3蛋白的表汰有关。

姜黄素增强卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP对顺铂敏感性的研究

目的:探讨姜黄素的使用与卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP对顺铂化疗敏感性的关系。方法:采用MTT法和TUNEL法检测姜黄素、顺铂单独和联合作用时对COC1/DDP细胞增殖和凋亡的影响;RT-PCR检测上述各组细胞凋亡相关基因Bcl-2、Smac的表达。结果:顺铂的浓度在1.25～5μg/mL时与姜黄素合用后耐药细胞生存率下降明显(P<0.05),尤以2.5μg/mL顺铂和20μmol/L姜黄素联合作用时,耐药细胞生存率下降最明显;顺铂与姜黄素联合用药与单独用药相比,凋亡率明显增加(P<0.05);联合用药与单独用药相比Bcl-2 mRNA的表达明显降低(P<0.05),Smac mRNA的表达明显增高(P<0.05)。结论:姜黄素能够显著抑制COC1/DDP增殖,并能增强该细胞系对顺铂的敏感性,机制可能与降低Bcl-2基因的表达,增加Smac基因的表达有关。

卵巢癌细胞株COC1/DDP多药耐药逆转对中性鞘糖脂表达的调控作用

为探讨逆转卵巢癌细胞株的多药耐药性 (MDR)对细胞表面中性鞘糖脂 (N GSLs)表达的调控作用 ,以三苯氧胺 (TAM )和维拉帕米 (VRP)为逆转剂 ,用MTT法分析了TAM、VRP的逆转效应 ,采用改良的Hakamori方法提取、纯化了耐药亚株COC1/DDPMDR逆转前后及亲本株COC1细胞的N GSLs,高效薄层层析(HPTLC)分析了N GSLs的表达。结果显示 ,COC1/DDP和COC1的N GSLs表达有显著差异 ,COC1/DDP的CMH表达较COC1强 ;经TAM、VRP作用后 ,COC1/DDP的耐药性发生逆转 ,CMH表达降低。说明卵巢癌的多药耐药性与中性鞘糖脂CMH相关 ,CMH可能为卵巢癌MDR相关鞘糖脂抗原。

葡萄籽原花青素对人卵巢癌耐药细胞COC1/DDP在体外的增殖抑制作用

目的观察葡萄籽来源的原花青素(grape seed proanthocyanidin extract,GSPE)对人卵巢癌耐药细胞COC1/DDP在体外的增殖抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法以MTT法检测不同浓度的GSPE(0、20、40、80、160、320μg/ml)不同时间(12、24、36、48、72h)对COC1/DDP的增殖抑制作用,HE染色观察细胞形态变化,流式细胞仪和TUNEL检测细胞周期和凋亡,Westernblot检测细胞内Caspase-3蛋白的表达。结果GSPE对COC1/DDP具有明显的增殖抑制作用,且呈剂量-时间依赖性,不同浓度GSPE能引起细胞形态明显的凋亡改变。流式细胞术和TUNEL表明GSPE可以诱导细胞凋亡,且随着药物浓度增加,凋亡率升高。Westernblot检测显示随着药物浓度增加,Caspase-3蛋白表达增加。结论原花青素可以在体外抑制人卵巢癌耐药细胞COC1/DDP的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与上调Caspase-3蛋白表达有关。

Caspase-3活性改变与人卵巢癌细胞系COC1/DDP耐药的关系

目的 探讨人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP中抗凋亡蛋白Bcl-XL、Bcl-2、细胞色素C的表达及半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性与人卵巢癌顺铂耐药的关系。方法:采用RT-PCR和Western Blot分析人卵巢癌顺铂敏感细胞株COC1和顺铂耐药株COC1/DDP中Bcl-XL、Bcl-2、细胞色素C的表达和caspase-3的活性。并用流式细胞术测定顺铂作用后COC1和COC1/DDP细胞株的凋亡率。结果:在COC1/DDP细胞中,Bcl-XL和Bcl-2的表达明显高于COC1细胞;顺铂作用后,在COC1/DDP细胞株中细胞色素C的表达明显减少,caspase-3活性明显降低(P<0.05);其凋亡率也明显低于COC1细胞株(P<0.05)。结论:人卵巢癌细胞株COC1/DDP对顺铂产生耐药可能与细胞内Bcl-XL、Bcl-2过度表达抑制了线粒体细胞色素C的释放及caspase-3活性有关。

聚焦超声对卵巢癌细胞株COC1细胞凋亡和Bcl-2/bax基因表达的影响

目的:研究低频脉冲的聚焦超声对人卵巢癌细胞株COC1的抗肿瘤作用,并探讨其诱导细胞凋亡的分子机制。方法:以低频脉冲聚焦超声(超声频率0.8MHz,声强83.6W/cm2,脉冲持续时间50μs)辐照卵巢癌COC1细胞10秒,采用MTT法观察超声对COC1细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪(FCM)、TUNEL法、荧光染色和光、电镜检测细胞凋亡;应用FCM免疫荧光技术观察Bcl-2、bax基因蛋白表达的变化。结果:低频脉冲聚焦超声可明显抑制存活卵巢癌COC1细胞株的增殖,辐照后12h、24h、36h和48h,COC1细胞MTT光吸收值与对照组相比显著降低;FCM检测超声辐照后6h的COC1细胞凋亡率达(23.57±4.62)%;Bcl-2蛋白的荧光指数(FI)降低,而bax蛋白FI升高。同时TUNEL法观察到棕褐色着染的凋亡细胞;荧光显微镜和电镜下观察到凋亡小体形成等典型的形态学改变。结论:低频脉冲聚焦超声辐照对人卵巢癌细胞株COC1具有细胞毒作用,其机制为诱导辐照后存活的人卵巢癌细胞株COC1凋亡,bcl-2和bax蛋白可能参与了COC1细胞凋亡过程。

聚焦超声诱导卵巢癌细胞株COC1凋亡及其机制的初步研究

目的 :研究低频脉冲聚焦超声波对人卵巢癌细胞株COC1的抗肿瘤作用 ,并探讨其诱导细胞凋亡的分子机制。方法 :以低频脉冲聚焦超声 (超声频率 0 .8MHz ,声强 83.6W /cm2 ,脉肿持续时间 :5 0 μs)辐照卵巢癌COC1细胞 10s ,然后采用MTT法观察超声对COC1细胞增殖的抑制作用 ;流式细胞仪 (FCM )、TUNEL法、荧光染色和光、电镜检测细胞凋亡 ;应用FCM免疫荧光技术观察Bcl- 2、bax基因蛋白表达的变化。结果 :超声可明显抑制存活卵巢癌COC1细胞的增殖 ,辐照后 12h、2 4h、36h、4 8h ,COC1细胞MTT光吸收值与对照组相比显著降低 ;FCM检测超声辐照后 6h的COC1细胞凋亡率达 ( 2 3.5 7± 4 .6 2 ) % ;Bcl- 2蛋白的荧光指数 (FI)降低 ,而bax蛋白FI升高。同时TUNEL法观察到棕褐色着染的凋亡细胞 ;荧光显微镜和电镜下观察到凋亡小体形成等典型的形态学改变。结论 :低频脉冲聚焦超声辐照对人卵巢癌细胞株COC1具有细胞毒作用 ,其机制为诱导辐照后存活的人卵巢癌细胞株COC1凋亡 ,bcl- 2和bax蛋白可能参与了COC1细胞凋亡过程。

茶多酚诱导卵巢癌COC1细胞凋亡的研究

卵巢癌是女性生殖系统恶性肿瘤之一,而茶多酚具有抗肿瘤和抗氧化的作用,作者研究茶多酚对体外培养的卵巢癌COC1细胞凋亡的影响.采用不同浓度茶多酚处理卵巢癌COC1细胞,24h后分别采用AO/PI双染法和琼脂糖凝胶电泳法(DNA Ladder),观察和分析茶多酚对COC1细胞凋亡的影响.结果显示,低浓度茶多酚(≤500μg/mL)处理24h后,出现早起凋亡现象;而高浓度的茶多酚(2 000μg/mL)后,出现了明显的晚期凋亡现象;过高浓度(4 000μg/mL)处理,细胞出现死亡现象.不同浓度的茶多酚处理后,细胞均可检测到DNA Ladder,且随着茶多酚浓度的增加,DNA裂解程度加深,电泳中DNA Ladder更明显.实验结果表明,不同浓度茶多酚处理均可以诱导卵巢癌细胞株COC1产生细胞凋亡,研究结果为筛选新型的抗癌药物提供参考.

马蔺子素对COC1/DDP的逆转作用研究

目的:建立卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP,探讨马蔺子素对COC1/DDP的逆转作用。方法:采用逐步递增DDP浓度、体外间歇诱导法诱导卵巢癌细胞系COC1,建立卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP;以CCK-8试剂盒(Cell Counting Kit-8)检测马蔺子素对COC1/DDP细胞增殖的抑制作用;以GSH和GSSG试剂盒检测细胞内GSH的水平;以高效液相色谱测定细胞内顺铂的含量。结果:历时5个月建立COC1/DDP,对顺铂耐药性稳定,耐药指数为9.44,对卡铂、长春新碱和阿霉素均有不同程度的交叉耐药性;马蔺子素对COC1/DDP的顺铂耐药性有逆转作用,逆转倍数达到3.44倍;与COC1比较,COC1/DDP细胞内GSH的水平增高,顺铂含量下降,但经马蔺子素干预后,COC1/DDP胞内的GSH的水平降低,顺铂的含量增加(P<0.01)。结论:马蔺子素对COC1/DDP有逆转作用,其机制可能与干预COC1/DDP细胞内GSH/GST-π解毒系统,增加细胞内顺铂的含量有关。

醋酸甲羟孕酮对卵巢癌CoC1/cDDP细胞增殖和耐药逆转的影响

目的:探讨醋酸甲羟孕酮(MPA)对人卵巢卵巢癌耐药细胞株CoC1/cDDP细胞增殖和耐药逆转作用影响及机理。方法:采用四甲基偶氮唑蓝法检测不同浓度MPA对CoC1/cDDP不同作用时间的细胞生长抑制率,以及MPA与顺铂(DDP)合用与单独应用时生长抑制率;采用流式细胞技术行细胞周期时相及凋亡分析。结果:MPA明显抑制CoC1/cDDP细胞的增殖,抑制作用呈时间-剂量依赖性(P<0.01);MPA与DDP合用对CoC1/cDDP细胞的增殖抑制作用较单独应用时明显增强,且合用后G0/G1期、G2/M期细胞增加,而S期细胞减少凋亡率增高(P<0.01)。结论:MPA能明显抑制CoC1/cDDP细胞的生长,并能逆转细胞对顺铂的耐药性。

TRAIL蛋白对卵巢癌COC1和COC1/DDP细胞生长及促凋亡作用研究

目的:为研究TRAIL对卵巢癌COC1和耐药COC1/DDP细胞生长及凋亡的影响。方法:用MTT法检测TRAIL蛋白单独(或与DDP联合用药)对COC1和耐药COC1/DDP细胞生长的影响,流式细胞仪检测TRAIL对肿瘤细胞凋亡情况和细胞周期分布改变的影响。结果:①TRAIL蛋白对COC1/DDP细胞生长有抑制作用,随着TRAIL蛋白浓度升高,细胞抑制率逐渐上升。②TRAIL对COC1和耐药COC1/DDP细胞均有抑制作用,分别为15.74%和30.84%,COC1/DDP细胞的抑制率明显高于前者(P<0.05)。两细胞株的TRAIL与DDP联合组细胞抑制率均比单纯TRAIL组明显升高(P<0.05)。③流式细胞仪检测COC1/DDP细胞的对照组、TRAIL组和TRAIL+DDP组细胞凋亡率分别为4.6%、16.7%、23.6%,各组与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。TRAIL蛋白使细胞更多地停留在G0-G1期,有丝分裂期细胞减少,凋亡细胞增多。结论:TRAIL蛋白对COC1和COC1/DDP细胞生长均有抑制作用,DDP与TRAIL联合使用对细胞的生长抑制更明显,细胞凋亡率明显升高。TRAIL可克服COC1/DDP细胞对DDP的耐药性。

米托蒽醌对人卵巢癌COC1细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制

目的研究米托蒽醌(Mitoxantrone,MXT)对人卵巢癌COC1细胞体外增殖与凋亡活性,及凋亡相关基因Mcl-1表达的影响。方法应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度的MXT对COC1细胞体外增殖活性的影响;流式细胞分析方法 (FCM)定量检测不同浓度的MXT作用后COC1细胞的凋亡率;Western-blot检测active caspase-3蛋白和Mcl-1蛋白定量;RT-PCR检测Mcl-1 m RNA的表达变化。结果COC1细胞生长抑制率和凋亡率均随MXT浓度的增加递增(P<0.05);COC1细胞生长抑制率随MXT作用时间的延长而增高(P<0.05);active caspase-3蛋白水平随着MXT作用浓度增高递增(P<0.05);Mcl-1 m RNA和蛋白表达水平随着MXT作用浓度增高递减(P<0.05)。结论米托蒽醌能抑制卵巢癌COC1细胞的增殖,诱导其凋亡,此作用可能与MXT抑制COC1细胞中的Mcl-1表达有关。

丙氨瑞林降低人卵巢癌CoC1/cDDP细胞线粒体膜电位并诱导其凋亡的研究

目的:研究丙氨瑞林降低人卵巢癌CoC1/cDDP细胞线粒体膜电位(ΔΨm)与诱导其凋亡的关系。方法:用不同浓度的丙氨瑞林与CoC1/cDDP细胞一起培养48h,并设对照组。经瑞士-姬姆萨染色进行细胞凋亡形态学观察;流式细胞仪检测亚G1期细胞、AnnexinV+/PI-细胞的百分率及线粒体膜电位(ΔΨm)的变化;半定量RT-PCR法检测作用前后CoC1/cDDP细胞Caspase-3mRNA的表达。结果:CoC1/cDDP细胞经丙氨瑞林作用后亚G1期细胞及AnnexinV+/PI-细胞的百分率较对照组明显升高(P<0.01),并且出现明显的凋亡细胞形态的改变,而线粒体膜电位(ΔΨm)降低的细胞数百分率显著增加(P<0.01),两者间呈正相关关系(r=0.950,r=0.924,P<0.05);Caspase-3mRNA的表达较对照组明显增强(P<0.01),并且与亚G1期细胞、AnnexinV+/PI-细胞及ΔΨm降低的细胞数均呈正相关关系(r=0.909,r=0.897,r=0.909,P<0.05);并且上述变化均与丙氨瑞林的剂量有关(P<0.01)。结论:丙氨瑞林可通过降低人卵巢癌CoC1/cDDP细胞线粒体膜电位(ΔΨm),从而诱导其凋亡。

卵巢癌耐药细胞亚株(coc1/DDP)中DNA定量分析

卵巢癌的死亡率在女性生殖道恶性肿瘤中占首位，其５年生存率仅为３０％～４０％。其耐药性的产生是导致治疗失败的主要原因之一。本研究对卵巢癌耐药细胞株（ＣＯＣ１／ＤＤＰ）进行ＤＮＡ相对定量分析，探讨ＤＮＡ含量与耐药性之间的关系。１材料与方法１．１材料亲代细...

不同剂量的顺铂-紫杉醇对卵巢癌COC1/DDP细胞的影响

目的:探讨不同剂量紫杉醇和顺铂对卵巢癌COC1/DDP细胞的生长、细胞周期及诱导细胞凋亡的影响。方法:培养细胞,加入不同剂量的紫杉醇和顺铂,采取四唑盐(MTT)比色法、倒置显微镜观察法、Annexin法、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪(FCM)检测不同剂量紫杉醇和顺铂对卵巢癌COC1/DDP细胞对细胞生长周期和凋亡的百分率的影响。结果:紫杉醇和顺铂显著抑制卵巢癌COC1/DDP细胞生长,能够显著阻滞细胞于S期,细胞核浓缩,DNA断裂片段增加,细胞凋亡明显。结论:通过对卵巢癌COC1/DDP细胞生长实验研究和形态学观察,证明紫杉醇和顺铂对卵巢癌COC1/DDP细胞的影响细胞具有毒性作用,可通过相关途径诱导DU145细胞凋亡和坏死,抑制细胞生长。