云南师宗和江苏盱眙中华按蚊的分子鉴定及COII基因序列分析

为了了解云南省师宗县和江苏省盱眙县中华按蚊的分子鉴定及COII基因序列特征,2014年7月在云南省师宗县和江苏省盱眙县采集蚊虫标本,通过形态学鉴定出中华按蚊,再提取蚊虫基因组DNA,用COII基因特异引物和序列测定,然后采用生物信息学软件进行核苷酸序列同源性和遗传进化分析。结果在云南省师宗县县城周围采集蚊虫标本314只,其中按蚊234只(74.52%);在江苏省盱眙县桂五镇采集蚊虫标本212只,其中按蚊143只(67.45%)。经形态学鉴定,每个地方挑选了8只疑似中华按蚊进行序列分析,结果显示,16只蚊虫COII核苷酸序列同源性在98%-100%之间,遗传进化分析显示,16只蚊虫全部与中华按蚊位于同一进化分支内。表明了采用分子鉴定的方法可有效地进行蚊虫种类鉴定。

缘蝽科部分种类线粒体COII基因的分子系统学研究(半翅目:异翅亚目)

测定分析了缘蝽科18种昆虫COII基因部分片段,结果显示,T、C、A、G的平均含量分别为33.6%、16.4%、36.3%和13.7%.A+T平均含量达到69.9%,表现出较强的A+T含量偏向性.碱基替换中转换频率是颠换的1.1倍;转换的发生以T与C之间为主,颠换以T与A之间为主.从GenBank下载长蝽总科的Oncopeltus fasciatus和猎蝽总科的Triatoma dimidiata作为外群,建立缘蝽科17属18种间的系统发育关系.结果证明狭义巨缘蝽族为一个单系群,竹缘蝽族的两个属为一单系群,鼻缘蝽属与同缘蝽属亲缘关系非常近,环胫黑缘蝽(沟缘蝽亚科)和竹缘蝽族亲缘关系比较近,叶足特缘蝽和怪缘蝽亲缘关系较近.

云南边境地区果实蝇属种类DNA条形码鉴定

【目的】果实蝇属Bactrocera中有国际上重要的检疫性害虫,基于形态的物种鉴定有一定的局限性。另一方面,云南边境地区为东南亚地区实蝇入侵我国的重要通道。因此,对该地区实蝇分子鉴定方法的研究对于该属物种的快速准确鉴定具有重要意义。本研究旨在探讨DNA条形码技术在果实蝇属物种鉴定中的有效性。【方法】使用线粒体基因COI和COII序列的通用引物对果实蝇属20个物种60份样品进行PCR扩增、测序和序列分析;采取距离方法和建树方法评价2种序列的鉴别能力。【结果】COI和COII序列平均长度分别为682 bp和339 bp,种内和种间遗传差异较大,有较明显的遗传距离间隔(barcoding gap),鉴定成功率分别为91.2%和90.7%。另外,分子系统树表明华实蝇亚属Sinodacus不是单系群。【结论】COI和COII序列均能够将绝大多数果实蝇属物种进行准确鉴别,应用COI或COII序列进行果实蝇属物种鉴定具有一定的可行性。

亚洲部分地区东方蜜蜂mtDNA多态性研究

就云南省7个不同样点共7群东方蜜蜂蜂群开展mtDNA内切酶位点测试和分析研究,并与菲律宾的东方蜜蜂作对比分析。内切酶DraI分析7个蜂群,共发现4个内切酶位点;云南东方蜜蜂mtDNA的tRNAleu-COII基因的序列没有长度多态性,EcoRI内切酶位点共有4个,与菲律宾的吕宋岛的东方蜜蜂属于同一单倍型。另外,对来自尼泊尔、泰国、越南、老挝以及我国北京、云南等地的共13群蜜蜂mtDNACOII基因的420个碱基对进行测序分析,发现13群东方蜜蜂分析的420个碱基序列里,位点变异从0个到5个不等,变异率从0到1 19% 用邻接法(neighbor-joining)构建的分子系统树可以看出分枝树主要分为两个类群:高纬度或高海拔的蜂群为一个类群,它们主要来自撒营盘(2)(China4)、丽江(China7)、北京(1)(China1)、尼泊尔(Nepal)、北京(2)(China2)、河口(1)(China8)和越南(2)(Vietnam2)。另一个类群的主要来自低纬度或低海拔的蜂群,它们主要来自撒营盘(1)(China3)、景洪(China5)、越南(1)(Vietnam1)、泰国(Thailand)、河口(2)(China6)和老挝(Laos)。该实验为我国东方蜜蜂资源的保护和开发研究提供了重要的信息和手段。

基于线粒体COⅡ基因的中国大豆食心虫不同地理种群遗传分化分析

【目的】大豆食心虫Leguminivora glycinivorella(Matsumura)是我国大豆Glycina max最重要的蛀荚害虫。本研究旨在探讨中国大豆食心虫不同地理种群的遗传分化情况。【方法】通过测定大豆食心虫19个地理种群208头老熟幼虫的线粒体COⅡ基因序列(723 bp),利用MEGA6.0和Dna SP 5.0等软件分析大豆食心虫不同地理种群的基因序列变异和遗传分化情况。【结果】在19个大豆食心虫地理种群中共获得208条COⅡ基因序列,发现61个变异位点,包含57个单倍型。总群体单倍型多样度Hd=0.8522,各地理种群单倍型多样度范围在0.1818~0.9546间,总群体的固定系数Fst=0.4619,总遗传分化系数Gst=0.1186,总基因流Nm=0.29。总群体Tajima’s D检验结果不显著,表明大豆食心虫在较近的历史时期未出现群体扩张现象,群体大小稳定。单倍型网络图、ML单倍型系统树及采用不同地理种群间遗传距离构建的UPGMA系统发育树均显示,贵阳(GY)和都安(DA)种群与其余地理种群分化明显。AMOVA分子变异分析结果显示,东北组、西北组、黄淮组、华南组及西南组种群组间所占总变异的比例大于组内。【结论】大豆食心虫不同地理种群间基因交流较少,整体的遗传多样性和遗传分化程度较高,遗传分化主要来自地理种群组间,且地理距离是影响不同地理种群间遗传距离的重要因素。

基于线粒体COⅡ基因部分序列的中国斑腿蝗科部分属种系统发育研究

基于斑腿蝗科切翅蝗亚科6属11种蝗虫的COⅡ基因585bp序列进行系统发育分析,为该类群的系统发育提供分子生物学方面的证据。通过MEGA5.0软件分析显示这些序列具有明显的高A+T偏向性和R值与距离依赖性特征。分别采用邻接法(Neighbor Joining,NJ)、最大似然法(Maximum Likelihood,ML)和最大简约法(Maximum Parsimony,MP)构建系统树,结果显示:凸额蝗属、黑纹蝗属与其它各属关系较远;斜翅蝗与南方十字蝗关系较近;越北胸斑蝗与广东斜翅蝗和大斜翅蝗关系较近;异角胸斑蝗与奇冠蝗关系较近;切翅蝗亚科各属种间的关系还需要进一步研究。

基于线粒体COⅠ和COⅡ基因的米象与玉米象的分子鉴定

为建立基于线粒体COI和COⅡ基因序列的米象和玉米象的分子鉴定方法,对采自全国6个地理种群的米象和2个地理种群的玉米象,PCR扩增试虫线粒体COI和COⅡ基因,将获得的基因序列在GenBank中进行BLAST比对,分析基因序列相似性,分别计算基于COI和COⅡ基因序列的遗传距离,并构建系统发育树。分析结果表明,米象COI基因的种内相似度在98.17%以上,玉米象COI基因的种内相似度100%,米象和玉米象COI基因的种间相似度为85.84%~86.92%;米象COⅡ基因的种内相似度在98.37%以上,玉米象COⅡ基因的种内相似度在97.77%以上,2种象虫COⅡ基因的种间相似度为86.27%~88.31%。米象的种内遗传距离为0.002~0.020(COI)和0.011~0.015(COⅡ),玉米象的种内遗传距离为0.001~0.023(COⅡ)。两种象虫的种间遗传距离为0.145~0.185(COI)和0.128~0.154(COⅡ),基于COI和COⅡ基因的种间遗传距离显著高于种内遗传距离。系统发育树结果显示,在2个基因的系统发育树上,米象和玉米象的基因序列分别位于不同的进化支,同种象虫的基因序列位于相同的进化枝。根据本研究所用的线粒体COI和COⅡ基因序列的差异性可以进行米象和玉米象的分子鉴定。

陕西省异色瓢虫种群遗传结构及其多样性

异色瓢虫是一种重要的天敌昆虫,广泛应用于农业生物防治中.本研究以线粒体COII基因作为分子标记,对陕西省分布的异色瓢虫不同地理种群的遗传结构及遗传多样性进行分析,并探讨不同种群间的遗传分化程度及基因交流水平.结果表明:在21个种群529头异色瓢虫供试样本的,COII序列中,共检测到15种单倍型(Hap1～Hap15),其中Hap1和Hap2所占比例最高分别占总群体的34.4%和37.6%.总群体单倍型多样性指数为0.732,各种群内单倍型多样性范围在0.652～0.786.种群间总基因流为10.13,总群体遗传分化指数为0.024,说明种群间整体遗传分化程度较低.陕西异色瓢虫种群在进化上呈现中性模型,群体大小保持相对稳定,种群间的遗传分化主要来自种群内部.基于Nei遗传距离构建的种群系统发育树,陕南区域种群与陕北和关中区域种群分化明显.种群间遗传分化与地理距离之间存在一定的相关性,并且区域种群的遗传结构与遗传多样性也表现出一定的地理分布模式,推测秦岭的阻隔及南北气候的差异,使陕北、关中与陕南种群间的基因交流存在阻力,导致南北种群间遗传结构和遗传多样性存在差异.

Phylogeny of the green lacewing Chrysoperla nipponensis species-complex （Neuroptera： Chrysopidae）in China, based on mitochondrial sequences and AFLP data

Severalstudieshaveindicatedthatthegreenlacewing, Chrysoperlanipponensis （Neuroptera： Chrysopidae） may include more than one valid species. We investigated the phylogenetic status of Chrysoperla nipponensis s.l. in China and Japan using mitochondrial sequences and AFLP data. The molecular phylogenetic analyses based on mitochondrial genes showed that the C. nipponensis species-complex comprises four clades, each having high support values. In addition, the phylogenetic tree based on AFLP data indicates that the species-complex comprises three groups. These results confirm that C. nipponensis s.1. comprises at least three genetically distinct clades and suggests that two of these clades may be closely related to populations of C. nipponensis in Japan. However, these clades cannot be recognized as species until analysis of their courtshin songs has been cornnleted