无血清培养的大肠癌Colo205细胞生成肿瘤干细胞球的研究

目的通过含生长因子的无血清培养基(SFM)培养大肠癌Colo205细胞,分离并扩增出肿瘤干细胞球。方法SFM培养大肠癌Colo205细胞,以含血清培养基(SSM)组为对照。观察细胞形态,检测正常肠道干细胞标志Musashi-1的表达,更换培养基为SSM诱导其分化,分别检测SFM组细胞分化前、分化后以及SSM组细胞表面标志CD133、CD44表达的改变,分析各细胞周期的比例,最后进行核型分析。结果Colo205细胞能在SFM中存活、增殖并形成肿瘤干细胞球,高表达Musashi-1,SFM组细胞分化前CD133、CD44的表达高于SSM组和SFM组分化后,差异有统计学意义(P<0.05),SFM组分化后与SSM组相比差异无统计学意义(P>0.05)。细胞周期分析发现肿瘤干细胞球处于高增殖状态,核型分析发现SFM组细胞与SSM组细胞染色体条数未见明显差别。结论含生长因子的SFM培养Colo205细胞,可生成肿瘤干细胞球,这种细胞球富集了肿瘤干细胞。

常春藤皂苷元的糖化学修饰与体外抗COLO205细胞增殖活性

通过连接不同糖片段的三氯乙酰亚胺酯衍生物、甲基衍生物、对甲基苯硫酚衍生物等合成了4个常春藤皂苷元衍生物(4~7,其中6和7为新化合物),其结构经1H NMR和13C NMR表征。采用MTT法检测了化合物对人结肠癌细胞COLO205的抑制活性。结果表明:4和5对COLO205细胞有部分抑制作用,与浓度正相关;6对COLO205只在高浓度(1.00×10-4mmol/L)有较好抑制作用(98.36±0.43%);7只在中等浓度(1.00×10-5mmol/L)对COLO205有微弱抑制作用(2.75±1.22%)。

血卟啉衍生物光动力对两株人结肠癌细胞杀伤实验的对比研究

目的探讨血卟啉衍生物(HpD)光动力学效应(PDT)对体外培养人结肠癌细胞株LoVo和CoLo205的生物作用。方法在体外培养的LoVo和CoLo205细胞中分别加入不同浓度的HpD(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0μg/ml)孵育6h,予波长为630nm的半导体激光进行照射,照射的功率密度为20mW/cm2,照射能量密度分别为2、5、10、20J/cm2,继续孵育24h,用四唑盐(MTT)比色法测定细胞存活率。荧光分光光度计检测LoVo与CoLo205细胞内HpD荧光强度。结果HpD-PDT对体外培养的人结肠癌LoVo和CoLo205细胞均有杀伤作用,两者无显著性差异(P>0.05)。其杀伤作用大小与HpD的浓度和激光剂量成正相关(P<0.01)。激光能量为20J/cm2,HpD的浓度为2.5μg/ml时,其杀伤LoVo、CoLo205细胞的作用最明显;HpD-PDT对LoVo和CoLo205的半数杀伤度(IC50)分别为0.4μg/ml、0.6μg/ml,两者无显著性差异(P>0.05)。检测LoVo与CoLo205细胞内HpD荧光强度无显著性差异(P>0.05)。结论HpD-PDT可有效杀伤体外培养的人结肠癌LoVo和CoLo205细胞,且对两种细胞的杀伤作用无明显差异。

瑞芬太尼对人结肠癌COLO205细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨瑞芬太尼对人结肠癌COLO205细胞增殖及凋亡的影响。 方法 体外培养人结肠癌细胞COLO205，按完全随机法分为两组：正常对照组和瑞芬太尼干预组。四甲基偶氮唑盐（monotetrazolium， MTT）法检测瑞芬太尼在相同浓度的条件下不同时间点对结肠癌COLO205细胞增殖的影响，测得抑制率并计算半数抑制浓度值，应用凋亡试剂盒结合流式细胞仪检测瑞芬太尼对人结肠癌COLO205细胞凋亡的影响。 结果 MTT结果显示，相同浓度的瑞芬太尼干预结肠癌COLO205细胞，分别在24、48、72 h测算半数抑制浓度结果为（50.6±4.0）、（43.6±3.7）、（36.0±1.1） nmol/L；瑞芬太尼干预组凋亡率为（59±9）%，对照组凋亡率为（71±15）%。 结论 瑞芬太尼能抑制结肠癌COLO205细胞增殖，促进其凋亡。

复方半枝莲抑制人结肠癌COLO205细胞增殖

目的:探讨复方半枝莲对人结肠癌细胞COLO205体内外生长的抑制作用及机制。方法:体外培养COLO205细胞,分为空白组,顺铂(0.15 g·L^(-1))组,复方半枝莲高、中、低剂量(0.60,0.30,0.15 g·L^(-1))组。利用噻唑蓝(MTT)法检测复方半枝莲对COLO205细胞增殖抑制率的影响。采用免疫印迹法(Western blot)分别检测细胞内凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),细胞凋亡调控因子(PUMA)的表达情况。选用SPF级裸鼠,于背部接种结肠癌COLO205细胞,待瘤体长到肉眼可见时,测量瘤体大小,根据瘤体大小区间随机分为复方半枝莲高、低浓度组,紫杉醇组和空白组,应用结肠癌移植瘤裸鼠模型体内实验检测复方半枝莲对COLO205细胞体内生长的影响。结果:体外细胞实验表明,经复方半枝莲作用后的人结肠癌细胞COLO205细胞出现了变形,并有细胞膜破损,细胞数逐渐减少,脱落而死亡的现象。48 h时复方半枝莲对COLO205细胞的抑制作用最强。其高、中、低剂量组抑制率分别为68.46%,63.11%,54.91%;且经复方半枝莲干预,COLO205细胞内的Bax,PUMA表达上调,Bcl-2表达下调;体内移植瘤实验显示,与空白组肿瘤体积比较,给药组的肿瘤体积明显减小。结论:复方半枝莲在体外内对人结肠癌细胞COLO205的生长均具有抑制作用,其机制可能与诱导细胞凋亡有关。

结肠癌细胞系Colo205细胞膜表面表达血小板和T细胞活化抗原1的配体

目的 对血小板和T细胞活化抗原 1(PTA1)配体的表达做初步鉴定。方法 首先克隆PTA1胞膜外区基因片段、构建PTA1/Ig融合蛋白表达载体 ,制备PTA1/Ig融合蛋白。通过粘附实验及组化实验证实PTA1配体的分布。结果 PTA1/Ig能特异性结合于Colo2 0 5细胞表面 ,并能阻断活化Jurkat细胞对Colo2 0 5细胞的粘附。结论 证实结肠癌细胞系Colo2 0 5表达PTA1配体 ,为今后进一步了解肿瘤细胞与活化T细胞的相互作用在肿瘤发病机理中的意义创造了条件。

PIAS3在结肠癌组织和细胞中的表达及意义

[目的]观察PIAS3在结肠癌组织及细胞中的表达,探讨PIAS3在结肠癌发生发展中的作用。[方法]采用免疫组织化学染色法检测60例结肠癌及同源癌旁组织中PIAS3蛋白的表达,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)、Western blot检测人结肠癌SW480、SW620及COLO205细胞株中PIAS3 m RNA及蛋白表达水平。[结果 ]结肠癌组织中PIAS3蛋白表达显著高于癌旁正常组织(χ~2=8.543,P=0.006);且表达强度随肿瘤病理分化程度的降低、Dukes分期的增高及肿瘤体积的增大而逐渐增高,差异有统计学意义(P均<0.05);PIAS3在结肠癌SW480、SW620及COLO205细胞株中均有表达,其中COLO205细胞株中PIAS3蛋白及m RNA表达高于SW480和SW620细胞株(P<0.05)。[结论 ]PIAS3的表达水平以及活性与结肠癌的发生发展有关,可能为结肠癌的早期诊断及靶向治疗提供新的分子靶点。