lincRNA Cox2通过miR-129-5p/AMPK调控BCG感染的巨噬细胞糖酵解进程

[目的]探究lincRNA Cox2对BCG(Bacillus Calmette-Guérin)感染的RAW264.7巨噬细胞糖酵解进程的调控作用,阐明Mtb与巨噬细胞之间的相互作用,为结核病的诊断和治疗提供新的靶点。[方法]利用小干扰RNA敲减lincRNA Cox2的表达,以及使用miR-129-5p mimics过表达载体,结合BCG感染,通过实时荧光定量PCR检测lincRNA Cox2、miR-129-5p和促炎因子IL-1β、TNF-α、IL-6的表达量;乳酸含量检测试剂盒检测乳酸(LD)的分泌情况;平板涂布法检测巨噬细胞菌载量情况;双荧光素酶报告基因系统验证lincRNA Cox2与miR-129-5p以及miR-129-5p与AMPK的互作关系;蛋白免疫印迹检测AMPK(AMP依赖蛋白激酶)及糖酵解途径中关键基因HK1(己糖激酶1)、PKM2(丙酮酸激酶2)和LDHA(乳酸脱氢酶)的表达变化。[结果]BCG感染12 h能够极显著上调RAW264.7巨噬细胞中lincRNA Cox2的表达(P=0.000013),与BCG组相比,siRNA+BCG组中AMPK(P=0.000771)、HK1(P=0.00323)、PKM2(P=0.000135)和LDHA(P=0.002532)的表达量以及乳酸的分泌量(P=0.020802)发生显著上调,而促炎因子IL-1β(P=0.000451)、TNF-α(P=0.000147)、IL-6(P=0.0001)的表达发生显著下调,菌载量试验表明siRNA+BCG组中的巨噬细胞菌载量显著下调(P=0.000127)。双荧光素酶报告基因系统表明lincRNA Cox2和miR-129-5p存在相互作用关系并以AMPK为靶基因。BCG感染RAW264.7巨噬细胞12 h后极显著下调miR-129-5p的表达(P=0.000156),与BCG组相比,miR-129-5p mimics+BCG组中AMPK(P=0.000262)、HK1(P=0.019524)、PKM2(P=0.001658)和LDHA(P=0.000887)表达量以及乳酸分泌量(P=0.044952)发生显著下调。[结论]lincRNA Cox2通过海绵吸附miR-129-5p并靶向AMPK,促进BCG感染的RAW264.7巨噬细胞糖酵解进程。

粗根荨麻水提取部分对AA大鼠腹腔巨噬细胞PGE_2水平及体外LPS诱导腹腔巨噬细胞COX-2 mRNA表达的影响

目的观察滇产粗根荨麻水提取部分Urtica macrorrhiza Hand-Mazz,Ur对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophages,PMφ)分泌前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)水平及对体外LPS诱导PMφCOX-2 mRNA表达的影响,探讨其治疗类风湿性关节炎可能的作用机制。方法建立AA大鼠模型,Ur水提取部分连续灌胃给药14 d或21 d后分次获取PMφ,LPS诱导PGE2的产生,用酶联免疫吸附法检测培养上清液中PGE2水平。体外培养PMφ,RT-PCR方法检测LPS诱导COX-2 mRNA表达。结果Ur水提取部分(400,200 mg/kg)对LPS诱导的AA PMφ分泌PGE2水平有明显抑制作用。Ur(200,100μg/ml)能显著抑制LPS诱导的COX-2 mRNA的表达。结论滇产粗根荨麻水提取部分对佐剂性关节炎的治疗作用可能与其抑制PMφ分泌PGE2及COX-2 mRNA表达有关。

电热针对Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠踝关节滑膜细胞COX-2 mRNA表达的影响

目的:探索电热针对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(Collagen-induced Arthritis,CIA)大鼠踝关节滑膜细胞环氧化酶-2 mRNA(COX-2 mRNA)表达的影响。方法:随机将50只Wistar大鼠分为正常组、模型组、电热针高电量治疗组(高电组)、电热针低电量治疗组(低电组)、电热针无电量治疗组(无电组)。Ⅱ型胶原足底皮下注射造模;其中正常组足底假免疫时给予生理盐水。电热针组于致炎后第21 d开始治疗,取双侧“阳陵泉”穴,直刺8 mm,每次20 min,隔天1次,共治疗20次。其中高电组电流强度为40 mA,低电组电流强度为20 mA。治疗结束后,各组取左踝关节组织,以原位杂交法检测踝关节滑膜细胞COX-2 mRNA表达。结果:造模后,各造模动物的踝关节肿胀程度比正常组显著增加(P<0.01);电热针治疗后,各治疗组与模型组比较踝关节肿胀程度有显著减轻(P<0.01)。模型组踝关节滑膜COX-2 mRNA表达较正常组显著增高;与模型组相比,高电组踝关节滑膜COX-2 mRNA表达显著降低(P<0.05),低电组、无电组与模型组则无明显差异。结论:电热针具有抗炎作用,仅有高电量电热针治疗可以降低CIA大鼠踝关节滑膜细胞COX-2 mR-NA的表达。

腹水COX-2 mRNA的表达及意义

【目的】通过检测腹水COX-2 m RNA的表达水平,探讨COX-2 m RNA对腹水鉴别诊断的价值和意义。【方法】收集2014年6月至2015年2月期间到我院就诊并明确诊断的恶性腹水34例,良性腹水15例。采用实时荧光定量PCR方法检测腹水中COX-2 m RNA的表达水平,比较COX-2 m RNA在良恶性腹水中表达的差异,及在不同原发疾病中的表达情况。【结果】34例恶性腹水及15例良性腹水均扩增出COX-2,良恶性腹水中COX-2 m RNA的相对表达水平与性别、年龄构成比无关系,差异无统计学意义(P>0.05)。恶性腹水和良性腹水COX-2 m RNA的表达水平分别为7.93(5.04,16.58)和0.95(0.57,1.79),即恶性腹水COX-2 m RNA的表达水平显著高于良性腹水,差异有统计学意义(P<0.05)。恶性腹水COX-2m RNA的表达水平在不同原发疾病中差异无统计学意义(P>0.05),良性腹水COX-2 m RNA表达水平在肝硬化和结核性腹膜炎中分别为1.55(0.55,2.55)和0.87(0.61,1.38),差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】COX-2 m RNA在恶性腹水中的表达水平显著高于良性腹水,在鉴别诊断腹水性质中具有重要的参考价值。

大鼠动脉粥样硬化COX-2 mRNA表达及白黎芦醇干预的实验研究

目的观察白黎芦醇对动脉粥样硬化(AS)模型大鼠主动脉粥样硬化段COX-2 mRNA表达的影响。方法雄性SD大鼠高脂饲料喂养,复制食饵性AS早期模型,用药组灌胃白藜芦醇。造模给药4w后,用RT-PCR方法观察对照组、模型组和用药组主动脉壁粥样硬化段COX-2 mRNA的表达。结果用药组降低AS早期主动脉硬化段COX-2表达,阻止AS的进程。结论白藜芦醇对大鼠AS具有保护作用,并能提高AS斑块稳定性。

合募配穴针刺对胃炎模型大鼠下丘脑、胃cox-2 mRNA表达的影响

目的:探讨环氧合酶m RNA(cox-2 m RNA)表达在合募配穴针刺防治急性胃炎中的效应机制。方法:将60只SD大鼠(180-220 g,雄性)按计算机随机生成的随机数字表法分为空白对照组、抓取组、模型组、中脘穴组、后三里穴组、合募配穴组(中脘穴+后三里穴组)6组,每组10只。采用烈性白酒灌胃法复制急性胃炎大鼠模型。针刺组大鼠依照分组要求取相应穴位,均采用捻转平补平泻法针刺(捻转幅度180°,频率60-80次/min),1次/d,每次20 min,造模前连续针刺6 d,造模后,连续针刺3 d。治疗结束后用实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)技术检测胃和下丘脑组织cox-2 m RNA的表达变化。结果:与空白对照组相比,抓取组胃组织与下丘脑组织中cox-2m RNA表达水平显著升高(P<0.05);与抓取组相比,模型组胃组织与下丘脑组织中cox-2 m RNA表达水平有极显著性升高(P<0.01);与模型组相比,3个针刺组胃组织与下丘脑组织中cox-2 m RNA的表达均有极显著性下调(P<0.01);3个针刺组组间比较,胃组织中cox-2 m RNA的表达无显著性差异(P>0.05),合募配穴组下丘脑组织cox-2m RNA的表达量最低,与中脘穴组相比有极显著性差异(P<0.01),与后三里穴组相比有显著性差异(P<0.05)。结论:针刺防治酒精性胃炎的机制可能与通过抑制胃、下丘脑组织cox-2 m RNA表达密切相关;在降低下丘脑cox-2m RNA表达水平方面,配穴(合募配穴)效果优于单穴(后三里穴或中脘穴)作用,具有一定特异性。

COX-2mRNA、CD105mRNA在骨肉瘤中表达的临床意义

目的研究环氧合酶-2mRNA(COX-2mRNA)在骨肉瘤中的表达及其与CD105mRNA的相关性。方法应用原位杂交的方法检测人骨肉瘤中COX-2mRNA和CD105mRNA的表达,并计算CD105mRNA标记的微血管密度(MVD)。结果COX-2mRNA在骨肉瘤中表达阳性率为77.5%,COX-2mRNA的表达与外科分期和肿瘤的转移密切相关(P<0.05);外科分期的I期与Ⅱb期、Ⅲ期间的MVD值的差异有统计学意义(P<0.05),而I期与Ⅱa期、Ⅱa期与Ⅱb期之间的差异无统计学意义(P>0.05);转移组的骨肉瘤其MVD值高于未转移组,二者之间的差异有统计学意义(P<0.05);COX-2mRNA表达与MVD值呈正相关(P<0.05)。结论COX-2mRNA在骨肉瘤组织中呈现高表达,其高表达可能促进了骨肉瘤新生血管的生成。

利舒康对兔颈动脉斑块中COX-2 mRNA表达的影响

目的探讨利舒康对兔颈动脉斑块中COX-2mRNA表达的影响。方法选取32只雄性新西兰大白兔,其中正常对照组8只(A组),24只硅橡胶圈兔颈动脉粥样斑块的动物模型。将模型兔随机分为颈动脉斑块无干预组(B组)、小剂量利舒康治疗组(50mg/kg,C组),大剂量利舒康治疗组(400mg/kg,D组),每组8只。治疗4周后取双侧颈动脉并分为平等2段,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测A、B、C、D组COX-2mRNA的相对表达量。结果与A组比较,B组颈动脉粥样硬化模型兔的斑块COX-2mRNA表达增高,差异有统计学意义(P<0.05);与B组比较,C、D组颈动脉斑块COX-2mRNA表达明显下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论利舒康的干预下兔颈动脉粥样斑块的COX-2mRNA下调,有可能具有抗动脉粥样硬化的炎性反应作用。

基于NF-κB iNOS-COX-2信号通路探究瑞芬太尼对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能的作用机制

目的研究基于核转录因子(NF)-κB-一氧化氮合酶(iNOS)-环氧合酶(COX)-2信号通路探究瑞芬太尼对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能的作用机制。方法选取清洁及健康雄性大鼠32只,8只为空白组,剩余24只建立脑缺血再灌注损伤模型,分为模型组、低、高剂量瑞芬太尼组各8只。采用Longa 5级神经功能缺损评分,评估神经功能损伤评分;酶联免疫吸附试验检测iNOS;采用色谱柱检测脑组织单胺类神经递质含量甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(HT);采用Western印迹检测NF-κB、iNOS、COX-2。结果与模型组相比,低、高剂量瑞芬太尼组神经功能损伤明显降低,神经递质NE、DA含量明显降低,5-HT明显升高,NO水平明显降低,iNOS、COX-2、NF-κB蛋白表达明显降低(均P<0.05)。结论瑞芬太尼通过调控NF-κB-iNOS-COX-2信号通路蛋白水平,改善大鼠脑缺血再灌注损伤的神经功能。

苗药吉祥草含药血清对气道平滑肌细胞增殖及IL-1β/COX-2信号通路的作用机制

目的 探究苗药吉祥草血清对气道平滑肌细胞增殖及白细胞介素(IL)-1β/环氧合酶(COX)-2信号通路的作用机制。方法 制备苗药吉祥草含药血清,分离并鉴定气道平滑肌细胞,把细胞分为空白组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。CCK-8检测细胞的增殖能力;流式细胞仪检测细胞的凋亡情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中IL-1β和COX-2的含量;Western印迹检测细胞中IL-1β和COX-2蛋白表达。结果 鉴定发现本实验所分离培养的细胞为ASMCs。与空白组相比,低剂量组、中剂量组和高剂量组细胞在48和72 h时ASMCs细胞增殖能力、IL-1β和COX-2明显降低,凋亡率显著增加,且呈剂量依赖性(P<0.05)。结论 苗药吉祥草血清可抑制气道平滑肌细胞增殖,促进其凋亡;对细胞中炎性因子IL-1β和COX-2表达也能进行有效的抑制。

尿Cox-2蛋白与CK20 mRNA诊断膀胱移行细胞癌的临床价值

目的:评价尿环氧化酶-2(Cox-2)蛋白、CK20 mRNA诊断膀胱移行细胞癌的临床价值。方法:选择78例膀胱移行细胞癌和30例非膀胱肿瘤患者,同时行尿Cox-2蛋白、CK20 mRNA和尿脱落细胞学检查,比较各种方法的敏感性、特异性和Youden指数。结果:尿Cox-2蛋白、CK20mRNA和尿脱落细胞学的敏感性分别为89.7%,66.7%,26.9%;特异性分别为93.3%、86.7%和100%;Youden指数分别为83.1%、53.4%和26.9%。尿Cox-2蛋白和CK20 mRNA的敏感性和Youden指数均高于尿脱落细胞学(P<0.05),同时尿Cox-2蛋白的敏感性和Youden指数高于CK20 mRNA(P<0.05)。结论:尿Cox-2蛋白和CK20mRNA检测的高敏感性、高特异性为膀胱癌提供了一个简单无创的检测方法,非常适合于复发率很高的膀胱癌的诊断与随访。

血清MIF、25-(OH)D_(3)、TLR2mRNA水平动态监测在活动性肺结核患者疾病转归评估中的应用价值

目的:探讨血清移动抑制因子(MIF)、25-羟维生素D_(3)(25-(OH)D_(3))、Toll样受体2(TLR2)mRNA水平动态监测在活动性肺结核患者疾病转归评估中的应用价值。方法:选取我院2019年3月-2021年5月收治且完成随访的118例活动性肺结核患者为研究对象,治疗6个月后随访6个月,根据疾病复发情况将患者分为复发组(17例)和未复发组(101例)。比较两组治疗前、治疗2、4、6个月后血清MIF、25-(OH)D_(3)、TLR2mRNA水平,分析血清MIF、25-(OH)D_(3)、TLR2mRNA水平与疾病转归相关性,偏回归分析影响肺结核患者疾病转归的危险因素,比较不同高低水平复发风险度。结果:复发组治疗2、4、6个月后血清MIF、TLR2mRNA水平高于未复发组,25-(OH)D_(3)水平低于未复发组(P<0.05);Spearman分析,治疗2、4、6个月后血清MIF、TLR2mRNA水平与疾病复发呈正相关,血清25-(OH)D_(3)水平与疾病复发呈负相关(P<0.05);Logistic分析显示,血清MIF、TLR2 mRNA、25-(OH)D_(3)水平为活动性肺结核患者疾病复发的独立危险因素(P<0.05);治疗后血清MIF、TLR2 mRNA高水平、血清25-(OH)D_(3)低水平的复发风险较高(P<0.05)。结论:动态监测血清MIF、25-(OH)D_(3)、TLR2mRNA水平变化对预测活动性肺结核患者疾病转归的状况存在指导效果。

电针治疗大鼠慢性炎症痛时脊髓环氧合酶-2 mRNA和蛋白的表达变化

目的:观察多次电针对慢性炎症痛大鼠的镇痛作用和局部炎症组织的修复作用,以及对脊髓环氧合-酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)mRNA和蛋白表达的影响。方法:SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组和电针组,在佐剂性关节炎大鼠模型上,电针“阳陵泉”“昆仑”穴(频率2 Hz,强度≤1 mA,连续波,20 min/次,每天治疗1次)。用辐射热测痛法观察电针对慢性炎症痛大鼠辐射热痛敏分数的影响;用HE组织化学染色法观察电针对炎症组织的修复作用;用RT-PCR和免疫组织化学方法观察电针对慢性炎症痛大鼠脊髓COX-2 mRNA和蛋白表达的影响。结果:电针能显著减少慢性炎症痛大鼠痛敏分数的绝对值;电针治疗后大鼠关节腔内炎性渗出和滑膜中性粒细胞浸润基本消失,滑膜水肿减轻,滑膜囊表面修复;电针显著下调了炎症痛引起的大鼠脊髓COX-2 mRNA和蛋白的过度表达。结论:电针对慢性炎症痛大鼠有明显的镇痛作用;电针能较好地缓解局部炎症,促进炎症组织的修复;电针的镇痛作用可能与对脊髓COX-2 mRNA和蛋白表达的调节有关。

藻蓝蛋白对大鼠脑缺血再灌注后环氧合酶-2及环氧合酶-2 mRNA表达的影响

目的探讨藻蓝蛋白对大鼠局灶性脑缺血再灌注后COX-2及COX-2 mRNA表达的影响。方法用线栓法制作大鼠左侧大脑中动脉阻塞再灌注模型(MCAO),分别对假手术组、模型对照组、藻蓝蛋白组进行神经功能缺失评分,用TTC染色法测量脑梗死体积,应用免疫组化和原位杂交技术分别观察脑缺血再灌注后不同时间点COX-2及COX-2 mRNA在神经元中的表达情况。结果(1)假手术组和模型对照组非缺血侧脑组织可见到少量COX-2阳性细胞。模型对照组COX-2阳性细胞主要位于缺血周围区,而缺血中心区仅有少量阳性细胞出现,缺血再灌注后6h COX-2阳性细胞数开始增加,至再灌注24 h达高峰,2 d后阳性细胞逐渐减少,至14 d时仍有表达,略高于假手术组。藻蓝蛋白组COX-2阳性细胞也主要位于缺血周围区,阳性细胞数量相对较少,其变化规律与模型对照组相似,同一时间点相比较,藻蓝蛋白组周围区COX-2阳性细胞数均显著低于模型对照组。(2)假手术组和模型对照组非缺血侧脑组织可见到少量COX-2 mRNA的表达。模型对照组COX-2 mRNA阳性细胞主要位于缺血周围区,而缺血中心区阳性细胞明显减少。缺血再灌注6 h后COX-2 mRNA阳性细胞数逐渐增加,至再灌注12 h达高峰,持续24 h^3 d,然后开始下降,至14 d时仍有表达,略高于假手术组;藻蓝蛋白组COX-2 mRNA阳性细胞数量相对较少,其变化规律与模型对照组相似,与模型对照组同一时间点相比,差别有显著性意义(P<0.05)。结论脑缺血再灌注后,缺血周围区的神经元内COX-2及COX-2 mRNA均高表达,其在局灶性脑缺血再灌注损伤中起重要作用。藻蓝蛋白可能通过选择性抑制COX-2及COX-2 mRNA的表达来抵抗脑缺血损伤,对脑缺血再灌注损伤具有保护作用。

鼻息肉组织嗜酸粒细胞中水通道蛋白-1和抗凋亡基因Bcl-2 mRNA的表达及意义

目的 明确水通道蛋白-1(aquaporin-1,AQP-1)mRNA、抗凋亡基因Bcl-2 mRNA在鼻息肉组织中的表达、分布及其相关性,探讨AQP-1 mRNA在鼻息肉组织嗜酸粒细胞中表达的意义。方法 16例鼻息肉组织标本来源于鼻息肉切除的患者(女11例,男5例,年龄20-65岁);10例下鼻甲黏膜组织来源于有变应性鼻炎病史的鼻整形患者(女7例,男3例,平均年龄16-58岁)。上述标本取组织相邻切片,应用原位杂交方法检测AQP-1 mRNA和Bcl-2 mRNA的表达;以麦格-姬姆萨(May-Griunwald-Giemsa,MGG)染色法鉴别嗜酸粒细胞。结果 16例鼻息肉组织嗜酸粒细胞中均有AQP-1 mRNA和Bcl-2 mRNA表达,其阳性细胞表达率分别为(93.16±13.25)％;(84.74±12.10)％;而10例下鼻甲组织嗜酸粒细胞中均有Bcl-2 mRNA表达,但仅有4例表达AQP-1 mRNA;AQP-1mRNA和Bcl-2 mRNA在下鼻甲组织嗜酸粒细胞中阳性细胞表达率分别为(19.54±4.98)％和(16.45±3.12)％。AQP-1 mRNA与Bcl-2 mRNA在鼻息肉组织嗜酸粒细胞的表达呈明显正相关(r=0.875,P<0.01)。结论 AQP-1能够平衡鼻息肉组织嗜酸粒细胞内外液体渗透压,维持其存活,在嗜酸粒细胞抗凋亡中具有重要的意义。

隔药饼灸对兔动脉粥样硬化斑块中基质金属蛋白酶-2,9 mRNA表达的影响

目的观察隔药饼灸对兔动脉粥样硬化(AS)中基质金属蛋白酶-2,9(MMP-2,9)表达的影响,探讨隔药饼灸对兔动脉粥样硬化斑块稳定性的影响。方法将75只新西兰大耳白兔,通过高脂饲料喂养及免疫损伤法建立兔AS模型。然后随机分为5组,每组15只,即:空白组(空白对照组);模型组(AS模型组);直接灸组(AS模型+艾炷直接灸);隔药饼灸组(AS模型+隔药饼灸);西药组(AS模型+阿托伐他汀)。运用原位杂交法检测兔动脉粥样硬化斑块中MMP-2,9mRNA的表达。结果隔药饼灸、直接灸和西药均能抑制兔动脉粥样硬化斑块中MMP-2和MMP-9mRNA的表达(P<0.01或P<0.05);隔药饼灸组和西药组MMP-2和MMP-9mRNA的表达低于直接灸组(P<0.01或P<0.05)。结论隔药饼灸、直接灸和西药通过抑制兔动脉粥样硬化斑块中MMPs的表达,起到稳定动脉粥样硬化斑块的作用,且隔药饼灸和西药抑制MMPs表达的作用优于直接灸。

左旋咪唑对实验性过敏性脑脊髓炎大鼠脊髓IL-1、IL-2及IL-6 mRNA表达的影响

目的 了解左旋咪唑 (LMS)对实验性过敏性脑脊髓炎 (EAE)大鼠脊髓内白细胞介素 (IL) 1、IL 2及IL 6mRNA表达的影响 ,为探讨LMS性白质脑病的发病机制提供实验依据。方法 用豚鼠全脊髓匀浆免疫Wistar大鼠建立EAE模型 ,EAE +LMS组大鼠分别于免疫后 0、2 4、48hipLMS 10mg/kg ;大鼠免疫后第 16天处死 ,采用RT PCR的方法检测大鼠脊髓内IL 1α、IL 1β、IL 2和IL 6mRNA表达的相对量。 结果 和正常对照组相比 ,EAE组大鼠脊髓内IL 1α(P <0 .0 5 )、IL 1β(P <0 .0 5 )、IL 2 (P <0 .0 1)和IL 6 (P <0 .0 5 )mRNA的表达量均明显升高。EAE +LMS组大鼠脊髓内IL 1α、IL 1β、IL 2和IL 6mRNA的表达量和EAE组相比则分别升高 131% (P <0 .0 5 )、12 1% (P <0 .0 5 )、95 % (P <0 .0 5 )和 2 8% (P >0 .0 5 )。结论 LMS能明显促进EAE大鼠脊髓内IL 1α、IL 1β、IL 2mRNA的表达 。

BMP-2 mRNA在实验性黄韧带骨化组织中的表达及其意义

目的 :从分子水平研究BMP 2在黄韧带骨化过程中的作用机理。方法 :以rhBMP 2诱导的黄韧带骨化 (实验组 ,O组 )为研究对象 ,分别于诱导物植入后 2、4、6周取实验节段黄韧带 ,提取总RNA ,采用Dotblot和Northernblot方法检测其BMP 2mRNA的表达程度 ,设立PBS溶液 /明胶海绵植入为实验对照组 (EC组 ) ,未手术动物为阴性对照组(N组 ) ,pSBMP 2质粒为阳性对照组 (P组 )。结果 :Dotblot和Northernbloe放射自显影图像显示 :rhBMP 2植入 2周时 ,黄韧带内BMP 2mRNA表达程度最高 ,然后逐渐下降 ,到 6周时明显减弱 ,与病理组织学研究中所见的韧带组织中成纤维细胞软骨化生的活跃程度呈正相关。实验对照组和阴性对照组均未见BMP 2mRNA表达。图像灰度扫描示 :0 2组、0 4组和 0 6组BMP 2mRNA的表达程度分别为 0 .6 15± 0 .14 84、 0 .443± 0 .0 982、 0 .2 32± 0 .0 749。结论 :rhBMP 2诱导的骨化过程中黄韧带组织内存在不同程度BMP 2mRNA的表达 ,其表达水平与成纤维细胞软骨化生的活跃程度呈正相关 ;内源性BMP -2可能参与黄韧带骨化的启动和持续发展。

油菜花粉多糖对荷瘤鼠脾细胞IL-2、TNF-α产生及其mRNA表达的影响

【目的】研究油菜花粉多糖(LBPP)对荷瘤鼠脾细胞IL-2、TNF-α的诱生及其mRNA表达的影响。【方法】通过动物抑制性肿瘤法制备肿瘤模型,采用双抗体夹心ELISA法检测IL-2、TNF-α含量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-2、TNF-α mRNA的表达。【结果】LBPP有明显抗肿瘤作用,200mg·kg-1高剂量组抑瘤率可达51.26%,明显优于环磷酰胺46.22%;LBPP可显著促进荷瘤鼠脾细胞IL-2、TNF-α分泌(P<0.01),提高荷瘤鼠脾细胞IL-2、TNF-α mRNA的表达(P<0.01),高剂量组提高率分别达56.37%、105.24%、1364%和1289%。【结论】LBPP通过提高机体IL-2、TNF-α mRNA的表达而发挥抗肿瘤作用。