黄芪、莪术配伍对胃癌MKN-45细胞COX-1、COX-2、NF-κB、VEGF、MMP-2表达的影响

目的观察黄芪、莪术配伍对胃癌MKN-45细胞VEGF、COX-1、COX-2、NF-κB、MMP-2表达的影响。方法以黄芪、莪术配伍作用于MKN-45细胞,并设塞莱希布组、黄芪组、莪术组和空白组相对照。通过ELISA法检测VEGF的水平变化,用RT-PCR以及Western blot方法检测加药后人胃癌细胞COX-1、COX-2、NF-κB、MMP-2的mRNA及COX-2蛋白表达情况。结果各药物组对VEGF表达的抑制效应起始于48 h,配伍组作用大于黄芪组和莪术组。各药物对COX-2 mRNA、NF-κB mRNA和MMP-2 mR-NA均有抑制作用。对COX-2的抑制以塞莱希布组和配伍组最明显,且呈时间依赖性。对NF-κB mRNA的抑制作用起始于48 h,配伍组在作用72 h后对其抑制作用最显著。对MMP-2的抑制作用以塞莱希布组和配伍组较明显,72 h时的作用最强。Western blot曝光结果可见,各组细胞在72kD处可见特异性的COX-2蛋白表达条带。进行灰度分析发现:各药物组对COX-2的抑制作用呈时间依赖性,以中药配伍和塞莱希布的抑制作用最强。结论黄芪、莪术配伍可能是通过对COX-2和NF-κB的调控影响MMP-2、VEGF的表达,从而抑制肿瘤细胞的浸润、转移。

补肾活血方对恒河猴PCO模型卵巢COX-1mRNA表达的影响

目的探讨补肾活血方对恒河猴多囊卵巢(PCO)模型卵巢局部环氧化酶-1(COX-1mRNA)表达的影响。方法选择健康育龄雌性恒河猴(6只)随机分为正常对照组、模型对照组、补肾活血方组;采用皮下注射丙酸睾丸酮(T)和绒毛膜促性腺激素(HCG)建立PCO模型,分别灌胃给予生理盐水、补肾活血方,采用原位杂交技术观察各组卵巢局部COX-1mRNA表达的变化。结果各组卵巢组织均可见COX-1基因表达的信号,以颗粒细胞表达最丰富;其中模型组卵泡膜细胞呈现异常高表达;补肾活血方组表达水平接近正常对照组。结论恒河猴PCO模型卵巢局部COX-1mRNA异常表达,可能与多囊卵巢综合征(PCOS)发病有关;补肾活血方有可能通过降低COX-1mRNA的表达而达到改善PCOS无排卵的状况。

赤芍801对小鼠巨噬细胞COX-1和COX-2活性、mRNA及蛋白表达的影响

目的研究赤芍801（propyl gallate，PrG）对环氧酶（cyclooxygenase，COX）活性、mRNA及蛋白表达的影响。方法采用基于小鼠腹腔巨噬细胞的COX-1和COX-2体外筛选模型，用钙离子导入剂（calcium ionophore A23187）短时刺激小鼠腹腔巨噬细胞，测定培养上清液中的6-酮-前列腺素F1α（6-keto-PGF1α）的量反映COX-1活性；用脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）长时间刺激细胞，测定培养上清液中的前列腺素E，2（PGE2）的量反映COX-2活性。半定量RT-PCR法检测PIG对LPS刺激的Raw小鼠巨噬细胞COX-1、COX-2 mRNA表达的影响。Western blot法检测PrG对LPS刺激的Raw小鼠巨噬细胞COX-1、COX-2蛋白表达的影响。结果PrG体外10，5μmol·L^-1浓度下不影响6-keto-PGF1α生成（P〉0．05），而在1，0．5，0．1，0．05μmol·L^-1浓度下则诱导6-keto-PGF1α生成（P〈0．01），并呈较好的剂量依赖性。PrG体外1，10μmol·L^-1可抑制PGE2生成（P〈0．05）。PrG不同浓度对LPS刺激的Raw小鼠巨噬细胞COX-1、COX-2 mR-NA表达无明显影响。PrG（100，10，1μmol·L^-1）浓度下可抑制COX-2蛋白表达，但对COX-1蛋白表达无影响。结论在0．05～10μmol·L^-1。浓度范围内，PrG低浓度时促进6-keto-PGF1α生成，高浓度时抑制PGE2生成，提示其高浓度时抑制COX-2，低浓度时激活COX-1；不同浓度PrG对COX-1、COX-2 mRNA表达均无明显影响。PrG（1～100μmol·L^-1）浓度下可抑制COX-2蛋白表达，但对COX-1蛋白表达无影响。

益气活血方对消化性溃疡愈合质量及胃黏膜组织中COX-1、COX-2和PGE_2表达的影响

目的观察益气活血方对消化性溃疡溃疡愈合质量的影响及对溃疡黏膜组织中环氧合酶(COX)-1、COX-2和前列腺素E2(PGE2)的调节作用,探讨COX-1、COX-2和PGE2的表达水平与溃疡愈合质量的关系。方法根据随机对照原则将60例消化性溃疡患者分为中西医组和西医组,每组30例。中西医组给予益气活血方汤剂+奥美拉唑口服,西医组仅给予奥美拉唑口服,2组均以4周为1个疗程。2组中幽门螺杆菌阳性者均给予三联10d根除法治疗。治疗前后均行胃镜及常规病理检查,并取溃疡黏膜组织行COX-1、COX-2、PGE2免疫组织化学染色检测;观察比较2组临床疗效以及溃疡愈合质量。结果 2组临床疗效比较差异无统计学意义。中西医组内镜下再生黏膜成熟度Sc+Sb数量及再生黏膜组织学成熟度优良率有高于西医组的趋势,但差异无统计学意义。2组治疗后溃疡黏膜组织中COX-1、COX-2、PGE2表达水平均较治疗前明显升高(P均<0.05),且中西医组COX-1、COX-2、PGE2表达水平明显高于西医组(P均<0.05)。相关性分析显示,溃疡黏膜组织中COX-1、COX-2、PGE2表达水平与溃疡愈合质量呈正相关。结论益气活血方可能通过增加溃疡黏膜组织中COX-1、COX-2的表达和PGE2的分泌促进溃疡的愈合,提高溃疡愈合质量。

大鼠脑挫伤后脑组织COX-1/COX-2的表达

目的 观察脑损伤后COX 1和COX 2蛋白表达及其时序性变化 ,探讨脑损伤的分子机制及法医学脑损伤时间推断。方法 以自由落体撞击雄性SD大鼠右顶叶制备脑挫伤模型 ,用免疫组织化学SP法处理脑组织检材 ,观察不同时间 ( 1、 3、 5、 7、 14d)脑组织COX 1/COX 2蛋白的表达情况。结果 正常及手术对照组大鼠 ,脑组织内有低水平的COX 1/COX 2表达 ;脑挫伤后 1～ 5d ,大鼠脑组织内COX 1表达逐渐增加 ,14d时仍维持在高表达水平 ;脑挫伤后 1～ 3d ,大鼠脑组织皮质内COX 2表达逐渐增加 ,1d时海马COX 2表达达高峰。结论 脑挫伤后可诱导COX 1/COX 2蛋白在脑内表达 ,并呈现出时序性变化。

慢性低氧对大鼠肾脏组织COX-1蛋白表达及抗氧化的影响

目的探讨高原慢性低氧对大鼠肾脏组织氧化损伤情况及组织的抗氧化应激能力,揭示氧化应激反应是否是高原低氧对机体损伤的主要因素。方法将85只Wistar大鼠随机分为平原组(25只)和高原组(60只),其中高原组大鼠运至海拔4300 m地区喂养30 d。用ELISA方法对血液中的低氧诱导因子1(HIF-1)、活性氧(ROS)和肾组织中的抗氧化因子(SOD、CAT)进行测定,用Western blot方法对肾组织COX-1蛋白含量进行分析,并对肾脏组织细胞形态学进行电镜观察。结果高原组血液中HIF-1水平为(9.64±4.67)ng/ml,显著高于平原组〔(3.47±3.54)ng/ml(P<0.01)〕;高原组ROS为(91.48±61.86)U/L,显著低于平原组〔(240.63±120.03)U/L,(P<0.01)〕;与平原组相比,高原组SOD、CAT水平并未升高,2组间相比差异无显著性(P>0.05);高原组肾脏组织COX-1蛋白表达水平显著低于平原组(P<0.05);电镜观察结果表明,高原组肾脏组织细胞线粒体普遍出现水肿和坏死。结论高原组HIF-1升高表明机体对低氧易感,但高原组ROSS、OD、CAT和COX-1均处于低水平状态,提示这可能与高原慢性低氧对组织线粒体产生直接性的损伤作用有关。

限制性内切酶介导的重叠延伸在人环氧合酶-1(COX-1)基因克隆中的应用

建立一种用于克隆全长基因的、限制性内切酶介导的重叠延伸法 .对全长基因进行分段扩增 ,并利用适当的限制性内切酶对基因序列内相应的限制性位点进行酶切 ,从而使分段扩增片段得以重叠并互为模板 ,在DNA聚合酶的作用下延伸获得全长基因 .将环氧合酶 1 (COX 1 )基因的外显子 9巧妙地拼接到了缺失外显子 9的COX 1cDNA片段中 ,获得了COX 1基因的全长cDNA .该方法分 3步进行 .首先 ,通过RT PCR分别扩增跨外显子 9的cDNA片段和缺失外显子 9的cDNA片段 ,并克隆到pMD1 8 T载体上 ;其次 ,PCR扩增外显子 9片段 ,限制性内切酶StuI酶切缺失外显子9cDNA片段的重组质粒 ,二者以一定的比例混合 ,互为模板 ,在pfuDNA聚合酶的作用下进行延伸 ,从而产生一个双链的DNA分子 .最后 ,以延伸产物为模板 ,用COX 1cDNA两端的引物进行PCR扩增 ,产生包含外显子 9的COX 1基因的全长cDNA .这种限制性内切酶介导的重叠延伸方法 ,对于克隆mRNA剪接水平上受调控的基因尤为有用 。

应用线粒体12srRNA和COX-1基因进行种属鉴定

目的以线粒体DNA为目标序列,探讨生物检材的种属来源问题。方法收集人和7种动物的血液或肌肉组织样本,提取DNA定量后,复合扩增线粒体12srRNA和COX-1基因片段,2%琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物谱带。结果人类DNA扩增产物分别为436 bp、277 bp两条谱带,而鼠、鸡、猪、兔、猫、狗、羊的扩增产物仅有一条谱带,430～450 bp,即动物基于COX-1基因片段无扩增产物。结论复合扩增线粒体12srRNA和COX-1两基因片段进行种属鉴定,方法简单,灵敏度较高,可应用于法医学实践。

脑梗死患者COX-1及COX-2基因多态性与阿司匹林抵抗的相关性分析

目的分析脑梗死患者COX-1-1676A>G、C50T、-A842G及COX-2-765G/C位点基因多态性与阿司匹林抵抗(AR)关系。方法选取首次发作急性脑梗死,规律服用阿司匹林(ASP)7d进行血栓弹力图(TEG)检测,分为阿司匹林抵抗组(AR,25例)和阿司匹林敏感组(AS,45例);对两组患者COX-1及COX-2基因共4个功能多态性位点测序,比较其基因型差异;完善患者生化指标、危险因素等临床资料,规律服用ASP并进行半年临床随访。结果70例患者中AS组为64.3%,AR组为35.7%;两组一般临床特征无差异(P>0.05);COX-1C50T、-A842G位点未见多态性,两组COX-1基因-1676A>G位点及COX-2基因-765G/C位点的基因型频率比较无差异(P>0.05);半年随访,终点事件发生率AR组脑梗死复发率较AS组增高(P<0.05);COX-2-765G/C及COX-1-1676A>G基因型与临床主要终点事件脑梗死复发进行比较无差异(P>0.05)。结论AR组脑梗死复发率高;AR组和AS组COX-1基因-A842G、C50T均未发现突变;COX-1-1676A>G与COX-2-765G/C基因型与AR、主要终点事件脑梗死复发间比较未发现明显相关性。

新的卵巢癌标志物COX-1的临床评价

本文探讨环氧化酶 (COX 1)作为卵巢癌标志物的临床意义。共收集经病理确诊的卵巢良恶性肿瘤资料 97例 ,应用双夹心酶联免疫吸附实验的原理 ,测定各组标本的血清COX 1含量 ,并同时测定CA12 5。卵巢癌病例组的COX 1阳性率为 5 2 78% ,明显高于对照组 (P <0 0 1) ,与CA12 5联合检测的阳性率达 86 89%。研究显示 ,COX 1在诊断和监测卵巢癌患者中有一定价值 ,可作为卵巢癌联合检测的一项新指标。

新疆圆柏有效成分抑制COX-1/2、5-LO作用及对脂多糖诱导RAW264.7细胞释放TNF-α的影响

目前,临床上常用的抗炎药物主要为非甾体抗炎药,其疗效明显,但均存在潜在的副作用[1]。因此,寻找低毒高效的新型抗炎药是药物研究的一个重要课题。新疆圆柏（Juniperus Sabina）为柏科圆柏属植物常绿匍匐灌木,广泛分布于新疆、甘肃和陕北的干旱荒山和沙地之中。据《维吾尔药志》记载,新疆圆柏枝叶和果实常用于类风湿关节炎等疾病的治疗[2]。

桂皮醛对IL-1刺激下脑微血管内皮细胞COX-1、COX-2活性及释放PGE_2的影响

目的观察从桂枝汤中分离出的单体桂皮醛对白细胞介素1(IL-1)刺激大鼠脑微血管内皮细胞(rCMECs)与发热有关的信号转导通路上关键信号元件环氧酶(COX)和前列腺素E2(PGE2)的影响。方法建立rCMECs培养,进行Ⅷ因子相关抗原鉴定。待细胞生长至融合状态后加入不同浓度的桂皮醛(12.5、25、50、100及200mg/L)孵育3h,随后以30ng/ml的IL-1刺激12h。ELISA方法检测细胞培养液中PGE2的含量及细胞内COX-1、COX-2的活性。结果Ⅷ因子抗体免疫组化染色可见95%以上为阳性细胞,证实为rCMECs。暴露于浓度为30ng/ml IL-1后,rCMECs内COX-2活性及释放的PGE2量显著增加(P<0.01),COX-1活性无明显变化(P>0.05)。加入不同浓度的桂皮醛后,随浓度增加而下调IL-1升高的COX-1、COX-2活性及PGE2量,且呈一定的浓度依赖关系;至浓度为100mg/L时,COX-2活性及释放的PGE2与IL-1单独作用组比较差异均有显著性差异(P<0.05),COX-1活性无明显变化(P>0.05)。结论桂皮醛能下调IL-1刺激下rCMECs释放的PGE2,作用机制可能与抑制COX-2活性有关。

前列腺素E_2和F_(2α)对LPS刺激后奶牛子宫内膜上皮细胞COX-1和COX-2表达的影响

试验旨在阐明前列腺素E_2(prostaglandin E_2,PGE_2)和F_(2α)(prostaglandin F_(2α),PGF_(2α))对体外培养的奶牛子宫内膜上皮细胞中环氧合酶-1(cyclooxygenase-1,COX-1))与环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达的影响。培养奶牛子宫内膜上皮原代细胞和传代细胞,第4代细胞以1×106个/孔接种于6孔板,以10-7 mol/L PGE_2和PGF_(2α)分别预处理细胞24h,以100ng/mL细菌脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激细胞4、8和12h后分别提取RNA和总蛋白质,采用实时荧光定量PCR与Western blotting等技术检测COX-1与COX-2mRNA和蛋白质的表达量。结果表明,与对照组相比,COX-1 mRNA表达量在PGE_2单独作用4、8和12h后显著上调(P<0.05);COX-2mRNA表达量在PGE_2单独作用4和12h后显著上调(P<0.05),PGE_2单独处理使COX-1、COX-2蛋白表达量均显著上调(P<0.05)。与对照组相比,LPS刺激8和12h时COX-1mRNA表达量显著下调(P<0.05),LPS刺激后COX-1蛋白表达量无显著变化(P>0.05);LPS刺激后4、8和12h时COX-2mRNA表达量显著上调(P<0.05),LPS刺激后COX-2蛋白表达量显著上调(P<0.05)。与LPS单独处理组相比,LPS+PGE_2处理组在8和12h时COX-1和COX-2mRNA表达量均显著上调(P<0.05),同时COX-1和COX-2蛋白表达量也显著上调(P<0.05)。PGF_(2α)在LPS未刺激和刺激后对COX-1和COX-2mRNA的表达无显著影响(P>0.05),仅在PGF_(2α)单独处理8和12h后COX-1mRNA表达量上调(P<0.05)。两种激素联合处理与各自单独处理及LPS单独刺激相比,对COX-1和COX-2mRNA表达具有一定的协同诱导作用。

原发免疫性血小板减少症COX-1和COX-2水平与Th17、Treg细胞的相关性研究

目的探讨原发免疫性血小板缺少症(ITP)血清COX-1与COX-2水平与Th17/Treg细胞比例失衡的相关性。方法选择浙江衢化医院2017年9月-2019年3月ITP患者40例(ITP组),另选取28例同期在该院体检的健康者(对照组),ELISA法检测血清COX-1与COX-2的水平,流式细胞术检测外周血中Th17、Treg细胞,并分析ITP患者血清COX-1、COX-2与Th17、Treg及Th17/Treg的相关性。结果ITP组血清COX-1与COX-2水平、Th17细胞数、Th17/Treg细胞比例均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);而ITP组Treg细胞数低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。ITP患者的血清COX-1、COX-2水平与Th17/Treg呈正相关(r=3.35、r=4.23,P<0.05),与Treg细胞数呈负相关(r=-2.97,P<0.05)。结论检测COX-1与COX-2的水平可对ITP患者体内免疫状态进行及早判断。

COX-1和COX-2在结直肠腺瘤中的表达

目的观察COX-1和COX-2在结直肠腺瘤中的表达情况。方法16例经病理证实的散发性结直肠腺瘤活组织检查标本,15例肠镜检查无明显病变的IBS患者肠黏膜活组织检查标本。免疫组化染色观察COX-1和COX-2表达水平的变化。结果COX-2在结直肠腺瘤组织中的表达异常增高(P<0.05),而COX-1在正常组织和腺瘤中的表达水平没有明显的变化。结论在结直肠腺瘤组织中,COX-2表达明显升高,提示COX-2参与结直肠腺瘤的发生和发展。

四君子汤对脾胃虚弱证型消化性溃疡患者肠道微生态变化及COX-1、COX-2、PGE2表达的影响

目的探讨中药方剂四君子汤对脾胃虚弱症型消化性溃疡患者肠道菌群变化、环氧化酶(COX-1、COX-2)及前列腺素E2表达水平的影响。方法从2017年1月-2018年12月收治的消化性溃疡患者中按年龄组、性别、溃疡类型1∶1匹配后,随机分配于试验组与对照组(试验组与对照组各240名患者)。其中,对照组患者给予思密达治疗,试验组使用思密达协同四君子汤,分别治疗8周。比较治疗前后2组患者的治疗效果、肠道微生态变化、环氧化酶及前列腺素E2水平表达情况。结果治疗后,试验组的阳性与阴性杆菌数减少,阳性球菌数增多,且阳性球菌与阴性球菌数量均高于对照组。而对照组的阳性、阴性杆菌与阴性球菌均显著减少(P<0.05);2组的COX-1、COX-2、PGE2表达水平均增高(P<0.05),且中药组显著高于对照组(P<0.05)。结论在思密达基础上加用四君子汤治疗脾胃虚弱症型消化性溃疡可有效调节其胃肠道菌群平衡、增强对胃黏膜的覆盖保护作用。

替普瑞酮对大鼠胃黏膜COX-1、COX-2及PGE2水平表达的影响

目的 探讨替普瑞酮对胃黏膜的保护作用及其机制.方法 将大鼠随机分为对照组和替普瑞酮组.对照组给予0.9%NaCl溶液1.5ml灌胃,替普瑞酮组给予替普瑞酮200mg/kg灌胃,3次/d,连续3d.放射免疫法测定两组胃黏膜前列腺素E2(PGE2)的水平;免疫组织化学方法检测胃黏膜细胞中环氧合酶(COX)-1和COX-2蛋白表达水平并以平均吸光度值表示其表达强度;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测胃黏膜COX-1和COX-2基因表达变化.结果 替普瑞酮组和对照组胃黏膜PGE2含量分别为(654.15±75.88)pg/ul、(78.93±25.58)pg/ul,两组比较差异具有统计学意义(t=82.83,P<0.01);替普瑞酮组和对照组胃黏膜COX-1蛋白表达水平(吸光度值)分别为0.355±0.042、0.211±0.034,两组比较差异具有统计学意义(t=11.56,P<0.01);替普瑞酮组和对照组胃黏膜COX-1 mRNA表达水平分别为2.14±0.081、0.55±0.056,两组比较差异具有统计学意义(t=9.25,P<005).替普瑞酮组和对照组大鼠的胃黏膜细胞内均无COX-2蛋白及其COX-2mRNA表达.结论 替普瑞酮对胃黏膜具有保护作用,可能与其促进胃黏膜PGE2合成,增加胃黏膜COX-1基因和蛋白表达有关.