期刊文献+
共找到110篇文章
< 1 2 6 >
每页显示 20 50 100
CP、Cys-C、RBP及其联合检测在喀什地区维吾尔族慢性肾脏疾病中的诊断价值
1
作者 夏木西卡马尔·买买提明 娄占本 韩素英 《右江医学》 2024年第6期496-501,共6页
目的分析尿外泌体铜蓝蛋白(CP)、血清胱抑素C(Cys-C)、视黄醇结合蛋白(RBP)及其联合检测对喀什地区维吾尔族早期慢性肾脏疾病(CKD)的诊断价值。方法选取2019年1月—2023年1月在新疆喀什地区第一人民医院就诊的225例维吾尔族CKD患者纳入... 目的分析尿外泌体铜蓝蛋白(CP)、血清胱抑素C(Cys-C)、视黄醇结合蛋白(RBP)及其联合检测对喀什地区维吾尔族早期慢性肾脏疾病(CKD)的诊断价值。方法选取2019年1月—2023年1月在新疆喀什地区第一人民医院就诊的225例维吾尔族CKD患者纳入CKD组,另选取同期在体检中心接受健康检查的186例维吾尔族体检者纳入健康对照组。收集两组的尿外泌体CP、血清Cys-C及RBP值。采用logistic回归分析影响早期CKD的因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析CP、Cys-C、RBP及其联合检测对早期CKD的临床诊断效能。结果与健康对照组比较,CKD组患者的血清白蛋白、C反应蛋白、血尿素、血沉均明显升高(P<0.05),肾小球滤过率降低(P<0.05)。与健康对照组比较,CKD组尿外泌体CP、血清Cys-C及RBP表达均明显升高(P<0.001)。Logistic回归分析显示,尿外泌体CP、血清Cys-C及RBP是影响早期CKD的独立因素(P<0.001)。ROC曲线分析显示,与尿外泌体CP、血清Cys-C、血清RBP比较,联合检测(并联)诊断早期CKD的AUC、特异度均明显升高。结论早期CKD患者的尿外泌体CP、血清Cys-C、血清RBP均明显升高,尿外泌体CP、血清Cys-C、血清RBP均可用于诊断早期CKD,但联合检测(并联)的诊断效能更高,为尽早诊断CKD提供参考。 展开更多
关键词 慢性肾脏疾病 铜蓝蛋白 胱抑素C 视黄醇结合蛋白 诊断价值
下载PDF
饲粮蛋白水平和酿酒酵母对秦川肉牛血常规指标和氮磷代谢的影响 被引量:2
2
作者 王晓慧 于胜晨 +5 位作者 梁成成 李炳志 王思虎 江中良 赵春平 昝林森 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2024年第2期40-50,共11页
【目的】研究不同蛋白水平饲粮及酿酒酵母(SC)对秦川肉牛血液生理生化指标和氮磷代谢的影响。【方法】选择18头14月龄初始体质量为(298±9.78)kg/头、健康的秦川肉牛(母牛)作为试验动物,采用2种蛋白水平(13.23%(A1)和(10.59%(A2))... 【目的】研究不同蛋白水平饲粮及酿酒酵母(SC)对秦川肉牛血液生理生化指标和氮磷代谢的影响。【方法】选择18头14月龄初始体质量为(298±9.78)kg/头、健康的秦川肉牛(母牛)作为试验动物,采用2种蛋白水平(13.23%(A1)和(10.59%(A2))饲粮和3种酿酒酵母添加水平(0(B1),4×10^(8) CFU/kg(B2),8×10^(8) CFU/kg(B3))作为两因素进行饲喂试验。采用全收粪(尿)法测定各处理秦川肉牛粪便和尿液中的氮磷含量,试验结束时于晨饲前采用颈静脉穿刺法采血,测定血常规指标和酶活性,试验期55 d。【结果】①试验期11~55 d,饲粮中添加8×10^(8) CFU/kg SC显著提高了秦川肉牛的采食量(P<0.05),A1B3组秦川肉牛采食量最高,显著高于A1B1组(P<0.05)。②B3组秦川肉牛血清中甘油三酯含量显著低于B1组(P<0.05),A2B3组秦川肉牛血清中总蛋白、白蛋白、球蛋白、免疫球蛋白G和免疫球蛋白M含量均显著高于A2B1组(P<0.05)。③B3组秦川肉牛粗蛋白(CP)和中性洗涤纤维(NDF)的表观消化率较B1组分别显著提高了8.44%和16.90%(P<0.05),A2B3组秦川肉牛的粗蛋白、有机物和酸性洗涤纤维表观消化率最高。④与A2B1组相比,A2B3组秦川肉牛粪氮排放减少了31.28%,尿氮排放减少了19.67%,氮消化率提高了7.66%,氮沉积率提高了62.57%。⑤B2和B3组秦川肉牛的粪磷含量显著低于B1组,A2B3组秦川肉牛磷消化率、磷沉积率相较于A2B1组显著升高了35.96%和45.94%(P<0.05)。【结论】本试验条件下,添加8×10^(8) CFU/kg酿酒酵母能够提高秦川肉牛的采食量、免疫水平和营养成分消化率,减少氮磷排放。在10.59%粗蛋白水平下,饲粮添加8×10^(8) CFU/kg酿酒酵母饲喂秦川肉牛效果最好。 展开更多
关键词 秦川肉牛 粗蛋白水平 酿酒酵母 氮磷代谢 血清指标
下载PDF
NSvc4和CP蛋白与水稻条纹病毒的致病相关 被引量:4
3
作者 袁正杰 贾东升 +2 位作者 吴祖建 魏太云 谢联辉 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期45-53,共9页
【目的】以水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)编码的NSvc4蛋白和CP蛋白的致病功能鉴定为切入点,研究RSV的致病机理。【方法】通过农杆菌介导在本氏烟中对RSV编码的6个蛋白进行细胞定位。采用双分子荧光互补(Bimolecular fluorescence... 【目的】以水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)编码的NSvc4蛋白和CP蛋白的致病功能鉴定为切入点,研究RSV的致病机理。【方法】通过农杆菌介导在本氏烟中对RSV编码的6个蛋白进行细胞定位。采用双分子荧光互补(Bimolecular fluorescence complementation,BiFC)技术鉴定NSvc4蛋白与其余5个蛋白间的互作关系,并用酵母双杂交体系(Yeast two-hybrid,YTH)对NSvc4与CP蛋白间的互作再次验证。利用马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)系统在本氏烟叶片研究NSvc4蛋白和CP蛋白的致病性,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术验证致病性鉴定结果。【结果】RSV NSvc4蛋白能与CP蛋白互作,且蛋白复合体在本氏烟细胞中能够定位到叶绿体。致病性鉴定显示,PVX-RSV-NSvc4侵染的本氏烟表现为花叶症状;PVX-RSV-CP能够在侵染叶上诱导花叶症状,但是系统叶却恢复健康;PVX-RSV-NSvc4与PVX-RSV-CP共侵染的本氏烟和PVX-RSV-NSvc4CP侵染的本氏烟的侵染叶、系统叶均表现出了严重病症。Real-time PCR结果显示,PVX载体在各侵染本氏烟中的累积量均较低,而RSV CP和NSvc4基因的表达量与本氏烟的发病症状紧密相关。【结论】NSvc4和CP蛋白均有致病性。CP蛋白的致病力不能持久,但是与NSvc4蛋白互作后具有持久致病力,表明二者协同在RSV致病过程中发挥作用。 展开更多
关键词 水稻条纹病毒 NSvc4和cp蛋白 致病性 本氏烟
下载PDF
甘蔗黄叶病毒CP蛋白基因ihpRNA表达载体构建及烟草转化 被引量:4
4
作者 张雨良 熊国如 +4 位作者 王健华 张树珍 官梅花 杨文君 刘志昕 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期537-542,共6页
为提高甘蔗抗病性,本研究根据甘蔗黄叶病毒海南分离物ScYLV-CHN-HN1全基因组序列(GenBank no.HQ342888),利用病毒CP蛋白介导的RNAi技术,针对病毒外壳蛋白CP,设计两对含有酶切位点的特异性引物,CPsf1/CPsr1和CPasf1/CPasr1,以构建好的pMD... 为提高甘蔗抗病性,本研究根据甘蔗黄叶病毒海南分离物ScYLV-CHN-HN1全基因组序列(GenBank no.HQ342888),利用病毒CP蛋白介导的RNAi技术,针对病毒外壳蛋白CP,设计两对含有酶切位点的特异性引物,CPsf1/CPsr1和CPasf1/CPasr1,以构建好的pMD19-T/CP质粒为模板,pRNAi1017为中间载体,分别合成构建干扰载体的正反向片段pRNAi-CP-F-R,将CP正反向片段分别插入表达载体pCAMBIA2300的相应位置,构建含有发卡结构的RNAi载体p2300-CP-F-R,经过PstⅠ酶切鉴定,证明载体构建成功。通过农杆菌介导的方法,以干扰表达载体p2300-CP-F-R转化烟草,经过PCR检测,得到12株阳性转基因植株,Southern blot杂交和半定量RT-PCR对其检测,证明干扰片段已经整合烟草基因组中并进行了转录,该结果为RNAi介导抗病毒甘蔗育种研究奠定基础。 展开更多
关键词 甘蔗黄叶病毒 cp外壳蛋白 RNA干扰 ihp表达载体 烟草转化
下载PDF
瞬时表达比较马铃薯X病毒CP基因3种结构对RNA沉默的诱导效果 被引量:5
5
作者 竺晓平 刘金亮 +3 位作者 田延平 于晓庆 李向东 刘红梅 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期1-4,共4页
RNA沉默是植物抵御病毒侵染的一种防卫机制,病原来源的抗性(pathogen-derived resistance,PDR)被认为是通过RNA沉默起作用的.转化的核酸片段在基因组中的位置、长短和不同排列结构等均影响RNA沉默的效率.用全长马铃薯X病毒(PVX)CP基因... RNA沉默是植物抵御病毒侵染的一种防卫机制,病原来源的抗性(pathogen-derived resistance,PDR)被认为是通过RNA沉默起作用的.转化的核酸片段在基因组中的位置、长短和不同排列结构等均影响RNA沉默的效率.用全长马铃薯X病毒(PVX)CP基因构建非翻译的正义、反义和反向重复结构转基因的植物表达载体,通过农杆菌渗入法瞬时表达测试了这些转基因对RNA介导抗性的诱导效率和有效性.结果表明,反向重复的PVXCP是更为有效的RNA沉默诱导因子,同时也证明让目的基因在受试植物中瞬时表达,在转化植物之前能比较快速地检测转基因的表达情况以及表达产物的功能,从而节约时间和资源,并减少盲目性. 展开更多
关键词 RNA沉默 马铃薯X病毒(PVX) 外壳蛋白(cp)基因 农杆菌渗入 抗性
下载PDF
中国马铃薯Y病毒的检测鉴定及CP基因的分子变异 被引量:29
6
作者 高芳銮 沈建国 +3 位作者 史凤阳 方治国 谢联辉 詹家绥 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第15期3125-3133,共9页
【目的】查明马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)病在中国的发生情况,及时、准确地鉴定出PVY并对其分子变异进行分析。【方法】采用ELISA方法对采自中国14个省(直辖市)马铃薯种植区疑似受PVY感染的样品进行了检测,并对其中的部分材料镜检... 【目的】查明马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)病在中国的发生情况,及时、准确地鉴定出PVY并对其分子变异进行分析。【方法】采用ELISA方法对采自中国14个省(直辖市)马铃薯种植区疑似受PVY感染的样品进行了检测,并对其中的部分材料镜检验证,然后根据CP基因序列设计1对简并引物针对随机选择感染PVY的14个省(直辖市)代表样品进行CP基因扩增克隆,将测序得到的序列进行分子变异分析,并使用贝叶斯法(Bayesian inference,BI)重建系统发育关系。【结果】ELISA检测结果表明,691份样品中220个样品与PVY抗体呈阳性反应,其余呈阴性反应;ELISA检测的阳性材料在透射电镜下均可观察到明显的风轮状内含体,14个PVY分离物均成功扩增出预期大小(约800 bp)的特异性片段,CP基因的核苷酸序列与已报道PVY不同株系的核苷酸序列一致性均在88%以上;在14个PVY分离物CP基因中共发现有29个多态性位点,其中6个简约信息位点,23个单一变异位点。系统发育分析结果显示,14个PVY分离物与PVYN:O株系相聚成簇,表明其在系统发育关系上,与PVYN:O株系的亲缘关系最近。【结论】PVY CP基因高度保守,但不同地区分离物也存在一定的分子变异,本研究可为今后了解PVY病毒病流行、变异趋势及其防治提供依据。 展开更多
关键词 马铃薯Y病毒 ELISA 外壳蛋白基因 分子变异 贝叶斯法
下载PDF
转CP基因线辣椒对CMV和CMV-RNA的抗病性比较 被引量:10
7
作者 徐秉良 商鸿生 王旭 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期132-137,共6页
本试验以转化 CMV- CP和 TMV- CP基因线辣椒纯合系作试材 ,比较了接种 CMV粒体和CMV- RNA后的发病特点和叶片中的病毒含量。结果表明 :转化线辣椒不仅能抵抗 CMV粒体的侵染 ,而且还能抵抗 CMV- RNA的侵染。不论接种 CMV粒体或 CMV- RNA,... 本试验以转化 CMV- CP和 TMV- CP基因线辣椒纯合系作试材 ,比较了接种 CMV粒体和CMV- RNA后的发病特点和叶片中的病毒含量。结果表明 :转化线辣椒不仅能抵抗 CMV粒体的侵染 ,而且还能抵抗 CMV- RNA的侵染。不论接种 CMV粒体或 CMV- RNA,CP(+ )线辣椒的系统症状都延迟出现 ,显症株率和病害严重度级别大幅度降低 ,病毒增殖和运转受到抑制 ,接种叶片与新生叶片中的病毒含量明显减低。这一结果证实 CMV- RNA不能克服线辣椒由 CP基因介导的抗病性。 展开更多
关键词 cp基因线辣椒 CMV CMV-RNA 抗病性 转基因线辣椒 抗病毒
下载PDF
侵染贵州甘蓝的芜菁花叶病毒CP基因序列分析 被引量:1
8
作者 刘学辉 李淳 +2 位作者 陈小均 何海永 王莉爽 《广东农业科学》 CAS 2020年第4期99-105,共7页
【目的】明确贵州省甘蓝芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)的发生分布,为科学防控提供指导。【方法】在贵州省安顺市、威宁县和修文县采集甘蓝病毒病样品,采用酶联免疫吸附试验法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和RT-... 【目的】明确贵州省甘蓝芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)的发生分布,为科学防控提供指导。【方法】在贵州省安顺市、威宁县和修文县采集甘蓝病毒病样品,采用酶联免疫吸附试验法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和RT-PCR对病样进行TuMV检测,利用相关生物学软件分析TuMV CP基因序列的一致性,并构建系统进化树。【结果】152份甘蓝样品中66份检测出阳性,检出率为43.42%;测序的15个TuMV CP基因核苷酸同源性为88.70%~100%,与已报道TuMV 6个组的分离物构建系统进化树发现,14个分离物属于basal-BR,1个分离物属于world-B组。【结论】TuMV在贵州省甘蓝不同种植区普遍发生,且basal-BR为感染甘蓝的优势毒源。 展开更多
关键词 甘蓝 芜菁花叶病毒 外壳蛋白(cp) 分子变异
下载PDF
低温胁迫对黄瓜花叶病毒CMV-BG株系cp基因多态性的影响 被引量:1
9
作者 张兴桃 李艳红 +4 位作者 高贵珍 曹稳根 刘小阳 王海潮 袁维风 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期292-295,共4页
研究了低温胁迫下黄瓜花叶病毒与三生烟互作后CMV cp基因序列的变化规律,并分析了植物RNA病毒的进化机制。用黄瓜花叶病毒北京甘蓝分离物(CMV-BG)侵染三生烟不同单株,置于不同温度条件下(常温和低温)培养30 d后,对CMV cp基因进行克隆、... 研究了低温胁迫下黄瓜花叶病毒与三生烟互作后CMV cp基因序列的变化规律,并分析了植物RNA病毒的进化机制。用黄瓜花叶病毒北京甘蓝分离物(CMV-BG)侵染三生烟不同单株,置于不同温度条件下(常温和低温)培养30 d后,对CMV cp基因进行克隆、序列测定和多态性分析。结果表明,侵染低温组植物CMV的cp基因多态性(Pi=0.001 76)高于常温组(Pi=0.001 14),IFEL分析检测到低温组第48个氨基酸位点为正选择位点,初步表明低温胁迫有助于提高CMV-BG cp基因序列的多态性,温度胁迫是植物RNA病毒与宿主互作过程中基因序列变异的一种重要的作用力。 展开更多
关键词 黄瓜花叶病毒 低温 cp基因 多态性
下载PDF
PRSV-CP正义、反义RNA植物表达载体的构建 被引量:2
10
作者 蔡群芳 魏军亚 周鹏 《生命科学研究》 CAS CSCD 2008年第3期222-226,共5页
利用基因工程方法构建了RNA介导的正义、反义植物表达载体,并通过电激法导入农杆菌中.经PCR和酶切鉴定证实,成功构建了PRSV-CP正义、反义RNA植物表达载体及其相应的农杆菌工程菌株.这为后续转基因研究及番木瓜抗PRSV分子育种奠定了基础.
关键词 PRSV-cp 正义RNA 反义RNA 农杆菌工程菌株
下载PDF
中国小麦花叶病毒CP和CRP蛋白的原核表达、抗血清制备及RNA2侵染性克隆构建 被引量:4
11
作者 孔凡惠 脱建波 +5 位作者 魏娇 唐伟 李向东 迟胜起 田延平 于金凤 《山东农业科学》 2015年第8期6-10,共5页
中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)引起的小麦土传花叶病在山东烟台、威海等地危害严重。本研究克隆了CWMV烟台分离物的衣壳蛋白(Coat protein,CP)及富含半胱氨酸蛋白(Cysteine-rich protein,CRP)基因,并将其连接到原... 中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)引起的小麦土传花叶病在山东烟台、威海等地危害严重。本研究克隆了CWMV烟台分离物的衣壳蛋白(Coat protein,CP)及富含半胱氨酸蛋白(Cysteine-rich protein,CRP)基因,并将其连接到原核表达载体p EHISTEV,转化大肠杆菌Rosetta。经IPTG诱导,表达出分子量均为19 k D的CP和CRP。将二者从凝胶中切下,乳化后免疫新西兰大耳兔4次,获得了两种蛋白的多克隆抗体。ELISA检测表明,CWMV CP和CRP抗血清的效价分别为1∶4096和1∶2048。Western blot分析证明该抗血清只与感染CWMV的小麦有特异性反应,而与健康或感染小麦黄花叶病毒的小麦无反应。利用含T3启动子的引物通过RT-PCR扩增出CWMV RNA2全长片段,经T/A克隆连接到p MD18-T,获得质粒p MD18-T-CWMV-RNA2。该质粒经XbaⅠ线性化后,利用T3 RNA聚合酶进行体外转录,转录产物摩擦接种本氏烟,15℃培养3天后,利用Western blot可从接种叶片中检测到瞬时表达的CWMV CP蛋白。 展开更多
关键词 中国小麦花叶病毒 衣壳蛋白(cp) 富含半胱氨酸蛋白(CRP) 抗血清制备 侵染性克隆
下载PDF
马铃薯卷叶病毒CP基因水溶性原核表达的研究 被引量:2
12
作者 牛倩雅 辛佳 +3 位作者 王晶珊 杨煜 李广存 郭宝太 《中国蔬菜》 北大核心 2015年第12期28-32,共5页
采用两种策略增强了马铃薯卷叶病毒(PLRV)CP基因的水溶性原核表达。首先,用5种可表达出分子伴侣的质粒分别转化重组菌TOP10(p BAD-LRCP),获得了既含p BAD-LRCP又含分子伴侣质粒的转化子;诱导转化子中PLRVCP基因与分子伴侣基因同时表达,S... 采用两种策略增强了马铃薯卷叶病毒(PLRV)CP基因的水溶性原核表达。首先,用5种可表达出分子伴侣的质粒分别转化重组菌TOP10(p BAD-LRCP),获得了既含p BAD-LRCP又含分子伴侣质粒的转化子;诱导转化子中PLRVCP基因与分子伴侣基因同时表达,SDS-PAGE结果表明,从转化子提取的水溶性蛋白中有明显的PLRV重组CP条带,即分子伴侣增进了重组CP的水溶性表达。其次,将PLRV-CP基因定向插入p ColdⅠ中构建了该基因的冷激诱导原核表达载体p Cold-LRCP,15℃、IPTG诱导24h,SDS-PAGE分析表明,从重组菌BL21(p Cold-LRCP)提取的上清蛋白中有明显的PLRV重组CP条带。试验结果表明,分子伴侣与冷激蛋白基因csp A的启动子均可提高PLRV-CP基因的水溶性表达,且后者的表达水平高于前者。 展开更多
关键词 马铃薯卷叶病毒 cp基因 分子伴侣 冷激蛋白启动子 原核表达 重组蛋白 水溶性
下载PDF
Immunoproteomic Assay of Antigenic Surface Proteins in Streptococcus equi ssp. zooepidemicus 被引量:1
13
作者 MAO Ying FAN Hong-jie +1 位作者 ZHOU Yong-hua LU Cheng-ping 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2011年第7期1096-1105,共10页
Streptococcus equi ssp. zooepidemicus (S. zooepidemicus) is a zoonotic pathogen with worldwide distribution. Lacking suitable vaccine and virulent maker is still bottleneck to control this infection. An immunoproteo... Streptococcus equi ssp. zooepidemicus (S. zooepidemicus) is a zoonotic pathogen with worldwide distribution. Lacking suitable vaccine and virulent maker is still bottleneck to control this infection. An immunoproteomic approach has been used to screen the membrane-associated and cell wall-associated proteins of S. zooepidemicus isolate in China CY to discover vaccine candidate antigens and therapeutic agents. Finally, 11 membrane-associated proteins, and 13 cell wall-associated proteins were successfully identified. BLAST (www.sanger.ac.uk) results also indicated that nucleotide sequences of majority identified proteins shared high homology (60%) with S. zooepidemicus, except for AC1-3, AC5, AC8, and AC13. Moreover, genes for 7 of the identified proteins were detected from CY; compared with ST171, 3 of them (AM1, AM8 and AC11) were only found in virulent strains (CY). All of the proteins identified in this study remain not to be reported in S. zooepidemicus. Some of the proteins serve a vital role in the immune system and reproduction of host species according to available data, while the functions of the rest were seldom researched. 展开更多
关键词 membrane-associated proteins (MAP) cell wall-associated proteins cp IMMUNOPROTEOMICS S. zooepidemicus
下载PDF
类风湿性关节炎患者血清RA-CP,抗CCP抗体及RF检测对RA的实验诊断意义 被引量:28
14
作者 陈建芸 廖海平 +2 位作者 孙朝晖 李林海 张宏斌 《现代检验医学杂志》 CAS 2020年第5期38-40,50,共4页
目的分析不同血清类型的类风湿性关节炎(RA)患者血清中的类风湿性关节炎特异性抗原瓜氨酸化蛋白(RACP)的水平,比较RA-CP与抗环瓜氨酸多肽(CCP)抗体、类风湿因子(RF)在RA诊断中的价值。方法用酶联免疫吸附法(ELISA)检测103例RA患者、71... 目的分析不同血清类型的类风湿性关节炎(RA)患者血清中的类风湿性关节炎特异性抗原瓜氨酸化蛋白(RACP)的水平,比较RA-CP与抗环瓜氨酸多肽(CCP)抗体、类风湿因子(RF)在RA诊断中的价值。方法用酶联免疫吸附法(ELISA)检测103例RA患者、71例其他风湿病患者、105例健康体检者血清中RA-CP,抗CCP抗体和RF的水平。根据抗CCP抗体和RF测定结果将RA患者分为4种血清类型:抗CCP抗体阳性/RF阳性的RA、抗CCP抗体阳性/RF阴性的RA、抗CCP抗体阴性/RF阳性的RA、抗CCP抗体阴性/RF阴性的RA,分析各种血清类型RA患者血清中RA-CP的水平。结果RA组的血清中RA-CP浓度水平中位数为4.51(1.80~7.49)单位,高于其他疾病组的0.53(0.40~0.76)单位和健康对照组的0.52(0.35~0.69)单位。RA-CP,抗CCP抗体和RF对RA的敏感度分别为77.7%,65.0%和69.9%,RA-CP对RA的敏感度高于抗CCP抗体和RF(P<0.05);特异度分别为95.5%,97.2%和89.2%。在4种血清型的RA中RA-CP的检出率分别为100.0%(57/57),40.0%(4/10),100.0%(15/15)和19.0%(4/21)。在抗CCP抗体阴性的RA中RA-CP的检出率为52.8%(19/36)。结论血清中RA-CP对RA的诊断比抗CCP抗体和RF具有更高的敏感度,可提高类风湿性关节炎的检出率。因此RA-CP可作为RA临床诊断的新辅助指标。 展开更多
关键词 类风湿性关节炎特异性抗原瓜氨酸化蛋白 类风湿性关节炎 抗环瓜氨酸多肽抗体 类风湿因子
下载PDF
李痘病毒CP基因在大肠杆菌中的表达、纯化及其抗血清制备 被引量:1
15
作者 邱德义 杨雷亮 +3 位作者 岳巧云 管维 王章根 陈定虎 《植物检疫》 2008年第5期271-274,共4页
用RT-PCR的方法克隆李痘病毒的外壳蛋白(CP)基因,然后将其连接到原核表达载体pET29(a)上,得到pET29a-PPV重组载体,将该载体转化大肠杆菌BL21(DE3)后,IPTG诱导表达产物经过SDS-PAGE分析,结果表明PPVCP基因在大肠杆菌中得到了高效表达。... 用RT-PCR的方法克隆李痘病毒的外壳蛋白(CP)基因,然后将其连接到原核表达载体pET29(a)上,得到pET29a-PPV重组载体,将该载体转化大肠杆菌BL21(DE3)后,IPTG诱导表达产物经过SDS-PAGE分析,结果表明PPVCP基因在大肠杆菌中得到了高效表达。分别用亲和柱法和切胶法回收特异性表达蛋白,再免疫家兔,获得PPV特异性抗血清,经过酶联免疫吸附法测定其效价分别为3.2×104和4×103,且具有较高的特异性。 展开更多
关键词 李痘病毒 外壳蛋白 原核表达抗血清
下载PDF
樱桃小果病毒1号胶体金免疫层析试纸的研发与应用
16
作者 郭静静 田利光 +4 位作者 陈呈涛 赵怡琳 迟胜起 原雪峰 曹欣然 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期201-207,216,共8页
近年来,病毒病在甜樱桃主产区的发生呈上升趋势,制约了甜樱桃产业升级和发展。能够侵染甜樱桃的病毒种类中,樱桃小果病毒1号(little cherry virus 1,LChV-1)导致樱桃果实缩小,彻底丧失经济价值,对甜樱桃产量影响较大。LChV-1通常具有潜... 近年来,病毒病在甜樱桃主产区的发生呈上升趋势,制约了甜樱桃产业升级和发展。能够侵染甜樱桃的病毒种类中,樱桃小果病毒1号(little cherry virus 1,LChV-1)导致樱桃果实缩小,彻底丧失经济价值,对甜樱桃产量影响较大。LChV-1通常具有潜伏侵染的特性,在樱桃苗期难以通过症状进行判断。同时,多数品种对LChV-1敏感,因此该病毒的早期检测对甜樱桃的生产尤为重要。传统的病毒检测手段需要专业仪器,不能满足田间快速检测的需求。本研究获取了LChV-1外壳蛋白的多克隆抗体,并研发了一种能够准确检测LChV-1病毒的胶体金免疫层析试纸,确定了胶体金的最佳抗体标记浓度为0.24 mg/mL,检测线最佳重组蛋白浓度为0.25 mg/mL,质检线最佳羊抗兔IgG抗体浓度为0.04 mg/mL。运用该试纸检测只需10~15 min,检测时间短、成本低、结果容易判断,可用于田间快速检测。本研究为樱桃小果病的综合防控提供了有效的监测和检测手段。 展开更多
关键词 樱桃小果病毒1号 病毒检测 胶体金免疫层析试纸 外壳蛋白
下载PDF
猕猴桃种传潜隐病毒外壳蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
17
作者 杨馥韩 余兆耀 +3 位作者 尹世欣 龙友华 王勇 陈相儒 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期187-192,共6页
猕猴桃种传潜隐病毒(actinidia seed borne latent virus, ASbLV),属于乙型线状病毒科Betaflexiviridae李属病毒属Prunevirus,是一种在我国猕猴桃上广泛发生的病毒。本研究通过RT-PCR方法克隆ASbLV的外壳蛋白基因,并连接到原核表达载体p... 猕猴桃种传潜隐病毒(actinidia seed borne latent virus, ASbLV),属于乙型线状病毒科Betaflexiviridae李属病毒属Prunevirus,是一种在我国猕猴桃上广泛发生的病毒。本研究通过RT-PCR方法克隆ASbLV的外壳蛋白基因,并连接到原核表达载体pET28a(+)上,转化大肠杆菌Rosetta (DE3),经IPTG诱导后可表达分子量约为28 kD的融合蛋白。经过Ni^(2+)-NTA树脂纯化融合蛋白,然后以其为抗原制备多克隆抗体。Western blot结果表明,多克隆抗体的效价为1∶4 000。该多克隆抗体只与ASbLV发生特异性反应,而不与猕猴桃病毒1、猕猴桃病毒A、苹果茎沟病毒、柑橘叶斑驳病毒、黄瓜花叶病毒和马铃薯X病毒发生反应,说明该多克隆抗体特异性良好。利用间接ELISA对36份猕猴桃田间样品进行了ASbLV检测,检测结果表明其中20份样品被ASbLV侵染,且间接ELISA检测结果与RT-PCR检测结果一致。本研究建立的间接ELISA方法能够有效地应用于猕猴桃田间样品中的ASbLV检测。 展开更多
关键词 猕猴桃种传潜隐病毒 外壳蛋白 原核表达 多克隆抗体
下载PDF
齿兰环斑病毒RT-qPCR检测方法的建立 被引量:1
18
作者 徐匆 黄皓 +3 位作者 黄晓彦 陈彦 李昀哲 郑芝波 《贵州农业科学》 CAS 2023年第4期86-92,共7页
【目的】针对齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)建立快速、有效检测方法,对于保障兰花规模化生产有重要意义。【方法】以齿兰环斑病毒为材料,根据NCBI上已登录的齿兰环斑病毒外壳蛋白(coat protein,cp)基因序列分析其序... 【目的】针对齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)建立快速、有效检测方法,对于保障兰花规模化生产有重要意义。【方法】以齿兰环斑病毒为材料,根据NCBI上已登录的齿兰环斑病毒外壳蛋白(coat protein,cp)基因序列分析其序列保守区,使用Primer Premier 5.0设计反转录荧光定量PCR引物及TaqMan荧光探针,建立检测齿兰环斑病毒的一步法RT-qPCR。构建齿兰环斑病毒cp基因克隆质粒,并以该质粒作为标准品进行荧光定量PCR标准曲线测定;以齿兰环斑病毒、建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的病毒RNA为模板进行一步法RT-qPCR特异性检测;以10倍倍比稀释的cp基因质粒为模板进行灵敏性检测;用该法对大田18个兰花样品进行齿兰环斑病毒感染情况监测。【结果】齿兰环斑病毒一步法RT-qPCR检测法仅检出齿兰环斑病毒阳性模板,其余模板检测结果为阴性,说明检测方法具有特异性;该方法能够检测到的齿兰环斑病毒cp基因最低拷贝数为130;大田兰花样品感染齿兰环斑病毒的检出率为100%。【结论】一步法RT-qPCR是一种特异性强、灵敏度高,且适合监测实际生产过程中兰花感染齿兰环斑病毒情况的检测方法。 展开更多
关键词 兰花 齿兰环斑病毒(ORSV) 反转录-荧光定量PCR(RT-qPCR) 外壳蛋白(cp)基因
下载PDF
非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体制备和鉴定
19
作者 侯浩宇 郑南南 +7 位作者 吴宏举 陈寅龙 李潮 张昂克 姬鹏超 万博 杜永坤 张改平 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期1241-1249,共9页
【目的】制备非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p30蛋白的单克隆抗体,为非洲猪瘟快速诊断检测方法的建立和疫苗研究提供材料。【方法】构建p30原核表达质粒pET-30a(+)-p30,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达... 【目的】制备非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p30蛋白的单克隆抗体,为非洲猪瘟快速诊断检测方法的建立和疫苗研究提供材料。【方法】构建p30原核表达质粒pET-30a(+)-p30,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,通过镍柱亲和层析获得目的蛋白。p30复性后,每2周对BALB/c小鼠免疫3次,将免疫小鼠的脾脏与骨髓瘤细胞融合制备单克隆抗体,通过ELISA方法和亚克隆筛选分泌抗体的杂交瘤细胞。将筛选出的单克隆细胞注射进小鼠腹腔制备腹水,通过Western blotting检测、免疫荧光测定(IFA)和抗体亚型分析来鉴定单克隆抗体。【结果】试验成功构建了p30蛋白的原核表达质粒,并使用IPTG诱导、纯化获得了原核系统表达的重组p30蛋白;成功制备出4株能稳定分泌针对ASFV p30蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为:1H3B4、3F2F5、6E3A1和9D6B9。经ELISA测定抗体腹水效价在1∶100000~1∶1000000之间。经Western blotting和IFA鉴定筛选得到的单克隆抗体与p30蛋白能发生特异性反应。经亚型鉴定,3F2F5和9D6B92株单克隆抗体的重链均为IgG2b,轻链均为Kappa;6E3A1株单克隆抗体的重链为IgM,轻链为Kappa;1H3B4株单克隆抗体的重链为IgG2b,轻链为Lambda。【结论】试验成功制备了4株针对ASFV p30蛋白的单克隆抗体,并分析了单克隆抗体的免疫学特性,为p30蛋白的生物学功能研究和ASFV血清学检测提供依据。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒(ASFV) p30蛋白 单克隆抗体 cp 204 L基因
下载PDF
蛋白质循环排列与新型生物传感器的开发
20
作者 邢一莹 秦晓红 米立志 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1673-1684,共12页
循环排列(circular permutation,CP)是自然界中蛋白质进化中产生的一种氨基酸序列重排现象。重排后的某些突变体仍具有类似该野生型蛋白质的天然构象和活性。生物传感器由分子识别单元和信号报告单元2部分组成,其分子识别单元通过分子... 循环排列(circular permutation,CP)是自然界中蛋白质进化中产生的一种氨基酸序列重排现象。重排后的某些突变体仍具有类似该野生型蛋白质的天然构象和活性。生物传感器由分子识别单元和信号报告单元2部分组成,其分子识别单元通过分子间相互作用,将生物体内的配体、离子浓度变化等微观过程转变成信号报告单元的可量化的可视化信号,从而实现生物学信号感知与检测。目前,蛋白质循环排列被广泛应用到生物传感器的设计中,成为近年来发展最为迅速的生物探针设计方法,已应用于生物分子的特异性识别和生命活动的实时监测,为病理研究、疾病预防和诊断提供了重要的手段。如何运用蛋白质循环排列,开发出新型可靠的生物传感器,是当前生物传感器设计中面临的1个重要科学问题。为此,本文总结并论述了以下3点工作。首先,本文简述了循环排列的发展历史,总结了循环排列的2种形成机制,通过实例详细阐述了循环排列对蛋白质结构的影响。其次,针对循环排列生物传感器的设计,本文主要以循环排列荧光蛋白(circular permutation fluorescent protein,cpFP)为例,总结了分子识别单元和信号报告单元两方面的设计策略,并汇总了循环排列蛋白质相关数据库。最后,本文总结了循环排列蛋白生物传感器的最新研究进展,展望了循环排列未来的发展方向,分析了目前循环排列生物传感器开发过程中存在的问题,以期为新型生物传感器的开发提供借鉴。 展开更多
关键词 循环排列 循环排列荧光蛋白 生物传感器
下载PDF
上一页 1 2 6 下一页 到第
使用帮助 返回顶部