微小隐孢子虫重组蛋白CP21的免疫特性

采用微小隐孢子虫CP21基因的原核表达蛋白的抗血清对微小隐孢子虫感染HCT-8细胞进行了体外阻断试验,检测不同浓度抗血清对HCT-8细胞感染隐孢子虫感染率的影响。同时应用纯化的重组CP21蛋白对小鼠进行免疫,检测体液免疫水平和细胞免疫水平的变化。对免疫后的小鼠接种微小隐孢子虫,检测重组CP21蛋白对微小隐孢子虫感染的保护效果。体外阻断试验结果显示,在培养基中分别加入1%、2%、5%和10%的抗重组CP21蛋白鼠血清时,HCT-8细胞感染隐孢子虫的平均感染率由82.0%分别下降到41.1%、35.2%、30.6%和23.5%;动物保护性试验体液免疫水平检测发现,试验组血清中IgG滴度随免疫次数增加而逐渐升高,第3次免疫后IgG滴度与对照组相比差异均极显著(P<0.01);细胞免疫水平检测证明CD4+/CD8+T淋巴细胞数值与对照组相比差异均极显著(P<0.01);攻虫保护试验结果表明试验组与对照组相比卵囊排出量显著减少(P<0.05),卵囊排出持续时间平均缩短4 d,减虫率达38%。体内外试验结果表明:CP21基因可用于作为预防和治疗隐孢子虫病的有效靶位点基因。

微小隐孢子虫黏附相关蛋白基因CP21的原核表达及鉴定

本研究旨在克隆微小隐孢子虫黏附相关蛋白基因CP21开放阅读框,构建其原核表达质粒,并对获得的融合蛋白进行鉴定。从含CP21基因的噬菌体中提取模板DNA,PCR扩增基因片段,构建pET-28a-CP21原核表达质粒,转化至埃希氏大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定。用原核表达蛋白免疫小鼠,制备抗重组蛋白多抗,对蛋白进行定位。结果表明成功扩增出CP21基因,并构建原核表达质粒,转化至大肠杆菌中表达出相对分子质量为25 ku的融合蛋白,Western blotting证明表达的CP21融合蛋白能与抗C.parvum多克隆抗体产生特异性反应。免疫荧光结果表明:CP21基因在子孢子和卵囊期均表达,且表达产物位于子孢子表膜和卵囊壁表面。CP21是一种与侵入机制有关的黏附相关蛋白。研究结果为微小隐孢子虫的免疫学诊断及疫苗研制奠定了基础。

穿越雨雾——CPS21玻璃防雾剂

家里有位戴眼镜的，有时也会因此带来点意外乐趣，有一回极冷的天气，我和他刚闪进屋内，就在脱鞋的那阵子，不经意地一回头看见身后站了个戴着白蒙蒙镜片的怪人，吓人一跳，再一看他这副行头还有点像咸蛋超人，把我给乐坏了。