三子养亲汤对正常高值血压痰湿壅盛证大鼠PPARα/CPT-1通路的影响

目的:基于过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARα)/肉毒碱棕榈酰基转移酶-1(CPT-1)通路探究三子养亲汤对正常高值血压痰湿壅盛证大鼠脂质代谢的影响。方法:将50只Wistar大鼠随机分成空白组10只及造模组40只,空白组给予维持饲料,造模组采用高脂饲料饲养+高盐(6%盐水)灌胃方式制备正常高值血压痰湿壅盛证大鼠模型,造模8周,模型构建成功后将40只大鼠随机分为模型组及三子养亲汤低、中、高剂量组,每组各10只。其后,空白组给予生理盐水灌胃,造模组继续给予高脂饲料加6%盐水灌胃,同时三子养亲汤各组给予相应浓度水煎液灌胃。灌胃8周后,检测各组大鼠体质量、血压、血脂四项及肝脏生化指标,观察肝脏病理形态及脂质沉积情况,检测大鼠肝脏中PPARα、CPT-1、酰基辅酶A氧化酶(ACOX1)基因和蛋白的表达。结果:与模型组比较,三子养亲汤高剂量组体质量、血压及血清甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶均显著下降(P<0.05或P<0.01)。空白组大鼠肝细胞排列整齐,细胞核形态完整,无红色脂质沉积;模型组大鼠肝细胞排列不整齐,出现细胞核消失的现象,肝细胞内出现部分脂质沉积;三子养亲汤高剂量组肝细胞排列规则、细胞核完整,有较少红色脂质沉积;三子养亲汤中、低剂量组细胞核较完整,肝细胞排列较整齐,有少量红色脂质沉积。与模型组比较,三子养亲汤高剂量组PPARα、CPT-1、ACOX1蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01),中剂量组ACOX1蛋白表达水平升高(P<0.05)。与模型组比较,三子养亲汤高剂量组PPARα、CPT-1、ACOX1mRNA水平升高(P<0.05或P<0.01),三子养亲汤低、中剂量组ACOX1mRNA水平升高(P<0.01)。结论:三子养亲汤可改善正常高值血压痰湿壅盛证大鼠体质量、血压、血脂及肝脏生化指标等。其机制可能与三子养亲汤调控PPARα/CPT-1信号通路,促进脂肪酸氧化分解,进而调控肝脏脂质代谢相关。

L-carnitine对缺氧/复氧新生大鼠心肌细胞能量生成及CPT-Ⅱ mRNA表达的影响

目的 探讨L 肉毒碱 (L carnitine ,L Car)对缺氧 复氧培养新生大鼠心肌细胞能量生成的影响及其机制。方法 以原代培养新生大鼠心肌细胞建立缺氧 复氧损伤模型 ,高效液相色谱检测单纯缺氧 复氧以及L Car预处理缺氧 复氧心肌细胞ATP、ADP、AMP生成改变 ;RT PCR方法检测心肌细胞肉毒碱脂酰基转移酶 Ⅱ (carnitinepalmitoyltransferase Ⅱ ,CPT Ⅱ )mRNA表达。结果 与正常对照组比较 ,培养心肌细胞缺氧 2 4h复氧 0、2、4、8h后 ,心肌细胞ATP、ADP均明显下降。与单纯缺氧 复氧组比较 ,L Car预处理组心肌细胞缺氧 复氧后ATP含量明显增高 ;培养心肌细胞缺氧 2 4h后 ,CPT ⅡmRNA表达除复氧 2h有所上升外 ,复氧 4、8h表达渐次降低。L Car预处理使缺氧 2 4h复氧 4h心肌细胞CPT ⅡmRNA表达呈浓度依赖性增高 ,5 0nmol L处理组CPT ⅡmRNA表达显著高于 0nmol L处理组。结论 心肌细胞缺氧 复氧过程中能量生成明显降低 ,其损伤可能与三羧酸循环中呼吸酶CPT Ⅱ表达降低有关 ;L Car对培养仔鼠心肌细胞缺氧复氧损伤具有显著保护作用 ,其机制可能是与L Car从转录调控水平改善CPT Ⅱ合成有关。

不同训练方式对静息骨骼肌糖酵解能力及线粒体PDK4、CPT-1基因转录的影响

目的:比较耐力训练和间歇性速度训练对静息骨骼肌糖酵解能力及线粒体PDK4、CPT-1基因转录的影响;方法:30只大鼠随机分为3组:安静组(C,n=10)、耐力训练组(E,n=10)、间歇性速度训练组(S,n=10),训练8周。间歇性速度训练:每天9～10次10s极量强度(≥42m/min)的跑台运动,间歇时间30～60s;耐力训练:每天30～60min低强度(≤16.7m/min)的持续跑台运动;每周均训练6天。最后一次训练结束后的24～48h内切取腓肠肌,比色法检测丙酮酸、乳酸、HK、PK活性,Real-timePCR检测PDK4、CPT-1的mR-NA表达;结果:1)E组和S组丙酮酸均非常显著地高于C组(P<0.01),E组与S组无显著差异;乳酸浓度E组与C组无显著差异,但S组显著高于E组(P<0.05)和C组(P<0.01);2)E组(P<0.05)和S组(P<0.01)HK活性显著高于C组,但E组、S组PK活性与C组无显著差异;E组与S组的HK、PK活性均无显著差异;3)E组PDK4mRNA表达显著低于C组(P<0.05),S组CPT-1mRNA表达显著高于C组(P<0.05),E组与S组的PDK4、CPT-1mRNA表达均无显著差异;结论:1)耐力训练与间歇性速度训练都能提高静息骨骼肌的丙酮酸水平,但只有间歇性速度训练提高静息骨骼肌的乳酸水平,说明间歇性速度训练很可能使骨骼肌在静息时的无氧代谢已处于活跃状态。耐力训练使丙酮酸升高则可能是脂肪酸氧化能力提高所必需的匹配效应;2)耐力训练与间歇性速度训练都能提高HK活性,但对PK活性无影响。耐力训练与间歇性速度训练在糖脂代谢中有着许多类似效应。间歇性速度训练也能作为一种节省时间的方式提高有氧代谢能力,但在提高有氧代谢能力的同时也能促进静息骨骼肌丙酮酸向乳酸的转化;3)耐力训练使PDK4转录抑制,间歇性速度训练使CPT-1转录上调,这与各训练方式下静息骨骼肌的乳酸水平有着高度一致性。

有氧运动对C57BL/6小鼠骨骼肌PPARα及CPT-1的影响

目的:研究8周有氧运动对高脂饮食小鼠血脂及骨骼肌中脂质代谢相关因子的影响,探讨过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)与运动改善脂质代谢的关系。方法:雄性C57BL/6小鼠60只,随机分为正常饮食安静(NC)及运动组(NE)、高脂饮食安静(HC)及运动组(HE)。其中,HC与HE组均喂以高脂饲料;NE和HE组进行为期8周的无负重游泳训练。实验结束后,采用酶法和比色法分别检测血脂和游离脂肪酸(FFA)水平,并采用NorthernBlot、WesternBlot检测各组小鼠骨骼肌中PPARα、肉毒碱棕榈酰转移酶1(CPT-1)基因及蛋白表达。结果:高脂饮食条件下,运动组血清TG、TC、LDL及FFA比安静组显著降低,HDL显著升高;并且运动组骨骼肌PPARα及CPT-1的mRNA和蛋白表达均较安静组有所提高,尤其HE组表达量较HC组显著提高。结论:运动可有效促进脂肪酸的利用而改善血清脂质水平,并且可使骨骼肌PPARα、CPT-1表达量在转录和翻译水平上均有所提高,提示PPARα作为一个重要的脂质调节因子,在运动改善血脂中发挥着积极的作用。

ACC-β/CPT-1β基因多态性与有氧耐力的相关性研究

目的:探讨乙酰辅酶A羧化酶-β(ACC-β)和肉碱脂酰转移酶-1β(CPT-1β)基因多态性与有氧耐力的相关性,寻找与有氧耐力表型相关的遗传学分子标记。方法:应用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱检测技术,对123名中国北方汉族优秀长跑运动员与127名中国北方汉族普通大学生ACC-β和CPT-1β基因区的5个SNP位点进行解析并比较分析。结果:运动员组5个SNP位点的基因型和等位基因频率与对照组相比均无显著性差异(P>0.05)。ACC-β基因的rs2300455和rs2268393位点(D'=0.95,r2=0.161)存在强连锁不平衡。CPT-1β基因的rs470117和rs131758位点(D'=0.98,r2=0.535)存在强连锁不平衡。构建单体型分析,未发现不同单体型频率与有氧耐力表型相关联。结论:ACC-β基因rs2075260、rs2300455和rs2268393多态位点及CPT-1β基因rs470117、rs131758多态位点与有氧耐力不相关,不能作为耐力表型的遗传标记。

耐力训练对AMPKα2基因敲除小鼠骨骼肌CPT-1表达的影响

目的:研究耐力训练对AMPKα2基因敲除小鼠骨骼肌CPT-1mRNA和蛋白表达的影响,探讨耐力训练中AMPKα2调节脂肪酸代谢的可能途径。研究方法:两月龄C57BL/6J野生(WT)和AMPKα2基因敲除(KO)小鼠各20只,各自随机分为安静对照组,耐力训练组,每组10只。两训练组进行4周,每天1 h,速度为12 m/min的跑台训练,测定股四头肌CPT-1 mRNA和蛋白表达以及血清FFA、TG水平。结果:4周耐力训练之后,WT鼠和KO鼠骨骼肌CPT-1 mRNA和蛋白表达,与安静对照组相比均显著升高,且两训练组之间无显著差异。结论:耐力训练中AMPKα2不是CPT-1的唯一上游调节因子,可能有其他途径参与CPT-1表达的调节。

电针对肥胖大鼠骨骼肌AMPK/ACC/CPT-1信号通路的影响

目的观察电针对肥胖大鼠骨骼肌腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路的影响,探讨电针治疗肥胖的机制。方法30只刚断乳(3周龄)的SPF级SD雄性大鼠,随机挑选6只普通饲料喂养并设为正常组,另24只高脂饲料喂养造模12周,将造模成功的12只随机分为模型组和电针组。测定各组大鼠体质量、脂肪质量、血脂等相关指标,qPCR检测各组大鼠骨骼肌中AMPKα1、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、肉毒碱棕榈酰转移酶1(CPT-1)的mRNA表达变化,Western blot法检测骨骼肌AMPK、ACC磷酸化水平和CPT-1蛋白水平。结果与正常组比较,模型组体质量显著升高(P<0.01),显示肥胖大鼠造模成功。与模型组相比,电针组大鼠的体质量、内脏脂肪质量和血脂均显著降低(P<0.05~0.01);骨骼肌AMPKα1、ACC、CPT-1 mRNA的表达量显著上升(P<0.05~0.01)。电针使AMPK磷酸化水平显著提高(P<0.01),激活AMPK的活性;ACC磷酸化水平显著提高,抑制ACC活性;同时提高CPT-1蛋白水平。结论电针可以降低肥胖大鼠的体质量并改善其脂肪代谢的紊乱,其机制可能通过调节骨骼肌组织AMPK/ACC/CPT-1信号通路实现的。

CPT-11联合5-FU/FA方案治疗局部晚期或转移性结直肠癌的临床研究

目的 评价CPT-11(开普拓)联合5-FU／FA治疗局部晚期或转移性结直肠癌的临床疗效及不良反应。方法 符合收治标准者19例,可评价疗效者17例,入组Arm A方案8例,Arm B方案9例,ArmA方案:CP-11 270mg/m2静滴d1;FA200mg／m2,5-FU 425mg／m2分别静滴,均d1-5,每3周重复,两次CPT-11(6周)评价疗效。ArmB方案:CPT-11 180mg/m2静滴d1,LA200mg/m2,静滴d1-2,5-FU 400mg／m2静推,然后5-FU 600mg／m2,d1-2,每2周重复,应用3次CPT-11(6周)为一个周期。结果 17例患者,CR 1例,PR 5例,SD 9例,PD 2例,总缓解率35％,稳定率52.9％,中位缓解时间7.5个月,中位稳定时间5个月。主要剂量限制毒性为迟发性腹泻及中性粒细胞减少。结论 CPT-11联合5-FU／FA两种方案治疗局部晚期或转移性结直肠癌有较高的疾病缓解率和稳定率,主要剂量限制毒性为迟发性腹泻及中性粒细胞减少。

补充L-肉碱结合运动对肥胖小鼠骨骼肌FAT/CD36及CPT-1的影响

目的:研究补充L-肉碱结合运动对营养型肥胖小鼠骨骼肌FAT/CD36以及CPT-1的影响。方法:49只C57BL/6雄性小鼠,随机选取9只喂养普通饲料(C组),另外40只建立肥胖模型(H组)。建模成功后将小鼠随机分为肥胖安静组(H)、肥胖肉碱组(HL)、肥胖运动组(HE)、肥胖肉碱结合运动组(HLE)。HE、HLE组进行为期5周的游泳训练,5天/周,1小时/天。HL、HLE组小鼠每天训练前1小时灌胃L-肉碱。实验期间监测小鼠体重变化,实验结束后取腓肠肌检测相关指标。结果:1HE、HLE组体重低于H组,且HLE组体重低于HL组;2HE、HL组和HLE组的FFA含量显著低于H组,而HE、HLE组的FFA含量也明显低于HL组;3HL、HE组和HLE组的CPT-1酶含量显著低于H组;4HE组的FAT/CD36表达量高于H组,HLE组则低于H组;5CPT-1酶含量和FAT/CD36表达量与体重均呈中度正相关。以上差异均具有统计学意义,P<0.05或P<0.01。结论:1与补充L-肉碱相比,运动和运动结合L-肉碱有更显著的控体重效果和促进脂肪酸氧化的作用。2单纯运动,补充L-肉碱以及运动结合L-肉碱均可降低骨骼肌内CPT-1酶的含量。3运动结合左旋肉碱可交互促进降低FAT/CD36的表达量。

环腺苷酸拟似物8-CPT-cAMP诱导M2b型急性髓系白血病细胞系Kasumi-1细胞分化的研究

为了解环腺苷酸拟似物8-对氯苯硫基环腺苷酸(8-CPT-cAMP)对M2b型急性髓系白血病(AML-M2b)细胞的作用,以AML-M2b细胞株Kasumi-1细胞为模型,通过观察细胞生长、形态、表面分化抗原、细胞周期分布以及对四氮唑蓝的还原能力的改变,研究8-CPT-cAMP对Kasumi-1细胞增殖及分化的影响,并应用半定量RT-PCR和Western blot检测药物处理前后Kasumi-1细胞内AML1-ETO融合蛋白的变化。结果发现,8-CPT-cAMP(200μmol/L)可明显抑制Kasumi-1细胞增殖而促使细胞趋向分化,但这种分化不是典型的完全终末性分化,8-CPT-cAMP对Kasu-mi-1细胞内AML1-ETO融合基因及其编码蛋白的表达无显著影响。结论:8-CPT-cAMP对AML-M2b细胞具有诱导分化效应。

OK-432增强CPT-11抗肿瘤活性的实验研究

目的:探讨OK-432增强CPT-11抗肿瘤活性的机制。方法:将荷B16黑色素瘤的C57BL/6小鼠随机分为对照组、CPT-11治疗组、联合治疗组,于接种后第3天腹腔分别注射生理盐水、CPT-11、CPT-11加OK-432。观察肿瘤生长体积;测定各组脾细胞分泌的IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IFN-γ,并在体外观察了SN-38对OK-432刺激这些细胞因子分泌的影响。结果:OK-432显著增强CPT-11对B16黑色素瘤生长的抑制(P<0.05);CPT-11在体内显著抑制小鼠脾细胞IL-12和IFN-γ的分泌,与OK-432联合使用显著增加小鼠脾细胞IL-2、IL-6、IL-12和IFN-γ的分泌(P<0.05);在体外SN-38对OK-432刺激的IL-6、IL-12分泌无显著影响(P>0.05)。结论:OK-432在体内可通过刺激IL-12和Th1细胞因子的分泌,增强CPT-11的抗肿瘤活性。

CPT-11联合5-FU/FA治疗复发转移性结直肠癌18例

2001年9月至2003年4月,作者采用CPT-11联合5-FU/FA方案治疗复发转移性结直肠癌18例,报道如下.

通心络和人参总皂苷对过度疲劳致血管内皮功能障碍大鼠主动脉CPT-I和AMPKα表达的干预作用

目的观察通心络和人参总皂苷对过度疲劳致血管内皮功能障碍大鼠主动脉CPT-I和AMPKα表达的干预作用。方法采用"基础饮食+负重游泳法"建立疲劳应激动物模型,给予通心络和人参总皂苷进行干预,观察大鼠一般状况、主动脉内皮细胞形态和结构,血中ET-1和NO水平,采用Real-Time PCR检测主动脉CPT-I、AMPKαmRNA表达,Western blot检测主动脉CPT-I、AMPKα、p-AMPKα蛋白表达。结果过度疲劳应激可导致血管内皮结构和分泌功能损伤,同时CPT-I、AMPKαmRNA和蛋白表达降低;通心络和人参总皂苷可保护血管内皮结构和功能完整性,升高CPT-I、AMPKαmRNA和CPT-I、AMPKα、p-AMPKα蛋白表达。结论通心络和人参总皂苷可通过增强血管AMPK mRNA基因和蛋白表达及p-AMPKα蛋白表达,进而调控血管局部与脂质β氧化相关的CPT-I mRNA和蛋白表达,从而对过度疲劳大鼠血管内皮发挥保护作用。

复方斑蝥胶囊联合CPT-11+CF+5Fu治疗晚期大肠癌的临床观察

目的观察复方斑蝥胶囊联合CPT-11＋CF＋5Fu化疗治疗晚期大肠癌的近期疗效和不良反应。方法将87例大肠癌患者随机分两组,对照组40例,单用CPT-11＋CF＋5Fu化疗方案,用法：CPT-11 150-180 mg/m^2,第1、8天,亚叶酸钙200 mg/m2静脉滴注2 h,第1、2天,5-氟脲嘧啶300 mg/m2静脉推注,第1、2天,600 mg/m^2持续微泵推入22 h,第1、2天,21天为1个周期;治疗组47例,在对照组治疗基础上加用复方斑蝥胶囊0.75 g,2次/日,连用15天。结果治疗组和对照组有效率分别是44.81%和33.6%,差异无显著性（P=0.3355）;KPS评分改善率分别是65.96%和40.00%,差异有显著性（P=0.0274）;1年生存率分别是53.19%和40.00%,差异无显著性（P=0.2193）,不良反应治疗组明显少于对照组,差异有显著性（P〈0.05）。结论复方斑蝥胶囊联合CPT-11＋CF＋5Fu方案治疗晚期大肠癌较单用CPT-11＋CF＋5Fu方案治疗疗效好,不良反应轻,生活质量改善明显,生存期有所延长。

断乳后饲料构成对大鼠肝脏CPT-ⅠmRNA表达影响

目的研究断乳后饲料构成对大鼠肝脏肉碱棕榈酰转移酶-I(CPT-I)mRNA表达的影响。方法新生Wistar雄性大鼠24 d断乳,按体重随机分为A、B、C、D 4组,分别喂饲高碳水化合物、高蛋白质、高不饱和脂肪酸和高饱和脂肪酸构成饲料3周后,基础饲料喂养2周,A组按体重随机再分为A1、A2 2组。A1组喂饲基础饲料作为对照组,A2和B、C、D 4组给予高脂饲料喂养6周,A2组作为高碳水化合物组。动态检测大鼠的体重、体脂含量、血糖及肝脏肉碱棕榈酰转移酶-I mRNA水平。结果实验末期,C组大鼠体重、体脂含量和血糖均明显低于A2组(P<0.05);B组大鼠体重和体脂含量明显低于A2组(P<0.05),但血糖水平高于A2组;D组大鼠体重明显低于A2组(P<0.05),但血糖和体脂含量与A2组差异无统计学意义(P>0.05)。动态观察表明,C组大鼠CPT-I mRNA水平持续升高,且在实验末期明显高于其他组。结论断乳后进食高不饱和脂肪酸构成饲料可能通过持续增加CPT-I基因表达,抑制大鼠肥胖形成。

CPT-Ⅱ基因4号外显子质粒构建与变异分析

背景:肉毒碱棕榈酰转移酶Ⅱ(Carnitine palmitoyltransferase-Ⅱ,CPT-Ⅱ)位于细胞线粒体内膜上,是脂肪酸氧化过程中起关键作用的酶之一。目前关于流感病毒感染与CPT-Ⅱ基因变异尚未见报道。目的:构建CPT-Ⅱ第4号外显子(E4)表达质粒及其核苷酸变异分析。方法:从流感病毒感染2例患者外周血中提取DNA,以PCR法扩增CPT-Ⅱ基因的第4号外显子,将其片段插入pGEM-T载体,以T4DNA连接酶,构建T-CPT-ⅡE4,转化大肠杆菌DH5α细胞,增菌,制备质粒,EcoRI酶切、测序和变异分析。结果与结论:成功构建重组表达质粒pGEM-T-CPT-ⅡE4,经DNA测序,证实质粒中插入CPT-Ⅱ第4号外显子完整序列,全长1305个核苷酸,编码435个氨基酸;与Genebank源序列对照比较,发现含有两个变异位点:1618(GTC→ATC)和1858(TTT→TCT),对应氨基酸为V368I和F448L。

贵州地方山羊CPT-1A基因在不同品种和组织中的表达差异

为揭示贵州地方山羊及南江黄羊CPT-1A mRNA水平的品种和组织差异,以黔东南小香羊、贵州白山羊、贵州黑山羊、黔北麻羊以及南江黄羊为研究对象,采用实时荧光定量方法对肝、肾、心、肺、背最长肌、半膜肌、皮下脂肪中CPT-1A基因的mRNA表达水平进行检测。结果表明,从器官组织分布模式来看,黔北麻羊和南江黄羊CPT-1A mRNA水平都以肾中最高(0.0019和0.0019),贵州黑山羊以肝中最高(0.0074),贵州白山羊以背最长肌中最高(0.0011),黔东南小香羊各组织中无差异;从品种差异来看,心和肾中CPT-1A mRNA水平以南江黄羊最高(0.0018和0.0019),肝和肺中以贵州黑山羊最高(0.0074和0.0027),皮下脂肪中以黔东南小香羊(0.0007)最高,背最长肌和半膜肌中各品种无差异。结果提示,贵州白山羊、贵州黑山羊、黔北麻羊以及南江黄羊CPT-1A基因的器官组织分布模式存在差异,肝、肾、心、肺和皮下脂肪中CPT-1A mRNA的表达存在品种间差异,此结果为研究该基因与贵州地方山羊脂肪沉积及肉质性状的关系提供了理论基础。

CPT-11联合CF/5-FU方案治疗胃肠道癌的Ⅰ期临床研究

目的 探索CPT-11(开普拓)联合CF/5-FU治疗胃肠道癌的最大耐受剂量(MTD)和剂量限制性毒性(DLT)。方法 CPT-11初始剂量为120mg/m2,然后150mg/m2,180mg/m2和200mg/m2 iv d1,递增剂量直至出现DLT。CF 200mg/m2 iv 2h,然后5-FU 400mg/m2快速静滴,接着5-FU 600mg/m2持续静滴22h,第1天、第2天给药,2周重复。结果 20例胃肠道癌患者共完成化疗111周期,中位数6周期。MTD为200mg/m2,DLT为腹泻和WBC减少。结论 我们推荐CPT-11180mg/m2联合CF/5-FU每2周重复的方法,作为国内PS为0-1胃肠癌患者的一线二线化疗方案。