A-485通过抑制P300/CBP诱导的H3K18ac/H3K27ac减轻糖尿病肾小管细胞脂质沉积

目的观察A-485对糖尿病小鼠肾小管损伤的保护作用及机制。方法将18只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)组和A-485治疗组。DKD小鼠模型构建采用高脂饲料饲喂8周联合腹腔注射链脲佐菌素5天的方法。随后,A-485治疗组隔日给予1次A-485(10 mg/kg)腹腔注射,共4周。治疗结束后,检测小鼠肾功能、P300酶活性及脂质沉积情况;Western blot法检测SREBP-1、FASN、ACC、ChREBP、P300、CBP、H3K18ac和H3K27ac蛋白的表达水平。结果与对照小鼠相比,DKD小鼠FBG(2.52倍)、BUN(2.89倍)、Scr(2.13倍)及UAE(4.21倍)显著升高(P<0.01);A-485干预能够降低BUN(0.511倍)、Scr(0.636倍)及UAE(0.574倍)的水平(P<0.01)。电镜及油红O染色结果显示,A-485干预抑制糖尿病小鼠肾小管细胞内脂滴形成及SREBP-1(0.544倍)、FASN(0.449倍)、ACC(0.306倍)、ChREBP(0.317倍)蛋白高表达(P<0.01)。同时,A-485干预下调P300酶活性(0.546倍),抑制H3K18ac(0.337倍)和H3K27ac(0.308倍)的表达(P<0.01)。结论A-485能够明显改善糖尿病小鼠肾组织脂代谢紊乱,该作用可能是通过抑制P300诱导的H3K18ac和H3K27ac实现的。

盐碱胁迫诱导的猴樟酵母cDNA文库构建及CbP5CS上游调控因子筛选

盐碱土壤环境是限制猴樟引种推广的主要因素,脯氨酸是植物适应盐碱胁迫过程中主要的渗透调节物质,筛选并鉴定出调控脯氨酸合成的转录因子对于猴樟耐盐碱分子机理研究具有重要意义。以猴樟实生苗为材料,在水培培养基础上,采用0 mmol/L和10 mmol/L的Na_(2)CO_(3)溶液分别进行处理,选取处理6 h、48 h的根系组织,提取总RNA,构建盐碱胁迫诱导的猴樟根系酵母c DNA文库;以猴樟根系总DNA为模板,克隆CbP5CS启动子序列,采用Y1H酵母单杂交技术筛选出与CbP5CS启动子存在互作的蛋白,并通过高通量测序技术鉴定出调控猴樟脯氨酸合成的转录因子。结果表明,所构建的cDNA文库库容为4.88×10^(7)CFU/mL,总克隆数为9.76×10^(7)CFU,文库插入片段平均长度在1000 bp左右,cDNA片段重组率为100%,符合酵母杂交试验的要求。克隆出的CbP5CS启动子序列长2012 bp,成功构建出诱饵质粒pHIS2-CbP5CS,利用共转化方法从文库中筛选到31个与CbP5CS互作的EST序列。经酵母回转验证,31个EST序列均与CbP5CS存在互作。经NGS测序和BLAST比对搜索,获得6个转录因子基因,分别为锌指CCCH结构域蛋白25异构体x1、AtbHLH104、转录因子TFIIIC、RING/FYVE/PHD锌指超家族蛋白、GATA型锌指转录因子家族蛋白、AtbHLH96。以上结果为进一步研究植物脯氨酸代谢响应盐碱胁迫的分子机制奠定基础。

P300/CBP相关因子在BCa细胞DNA损伤修复与肿瘤干细胞干性维持中的作用

目的探究P300/CBP相关因子(PCAF)在人膀胱癌(BCa)细胞DNA损伤修复与肿瘤干细胞干性维持中的作用。方法利用Ad-PCAF RNAi转染人膀胱癌细胞系5637,荧光显微镜和Western blot检测转染效果,选择顺铂诱导膀胱癌细胞DNA损伤,MTS法检测损伤细胞的增殖活性,免疫荧光染色检测损伤细胞内PCAF与γ-H2AX的募集情况,细胞彗星实验分析顺铂诱导细胞DNA损伤的程度;从膀胱癌细胞中分选CD44^(+)标记的肿瘤干细胞,Western blot检测Bca干细胞标志物67LR、OCT4及YAP1蛋白表达水平变化,细胞成球实验检测细胞干性变化。结果Ad-PCAF RNAi转染5637细胞后,明显抑制了细胞中PCAF表达(P<0.05);在下调PCAF表达后,20、40、60、80、100 nmol/L的顺铂处理下5637细胞活性下降,增强了5637细胞对顺铂的敏感性,细胞内γ-H2AX焦点形成明显增加,细胞拖尾较长,拖尾细胞数目和尾距均增加(P<0.05);经分选得到CD44^(+)比例为93%且67LR、OCT4及YAP1蛋白呈阳性表达的膀胱癌干细胞,通过下调PCAF表达,肿瘤干细胞的球体体积变小,成球个数也减少(P<0.05)。结论通过下调PCAF的表达能够抑制膀胱癌细胞DNA损伤修复,调控肿瘤干细胞的干性维持。

黄瓜CBP60基因家族鉴定及表达分析

CBP60s(Calmodulin-binding protein 60)是植物所特有的钙调素结合蛋白家族之一,在调节黄瓜生长发育及应对盐胁迫时发挥重要作用。本研究利用生物信息学方法对黄瓜全基因组中筛选鉴定到的17个CBP60基因家族成员,进行基因序列特征、染色体定位、亚细胞定位、基因结构、系统进化、启动子顺式作用元件和表达模式分析,探讨其基因功能及表达模式。黄瓜CBP60基因分子量为17307.87~99117.13 Da,等电点在5.55~9.96之间;17个CsCBP60基因家族成员不均匀分布在黄瓜染色体chr1、chr2、chr4、chr5上,部分基因在chr1上形成基因簇,并发生6个串联重复事件;亚细胞定位预测发现CsCBP60基因定位于叶绿体、细胞核、线粒体;CsCBP60基因均具有CaM结合结构域;CsCBP60基因家族可分为3个亚家族(ClassA-C),黄瓜与甜瓜的CBP60基因之间发生了10对共线性事件,与甜瓜亲缘最近。CsCBP60家族成员含有光响应和脱落酸响应、生长素响应、E-box、W-box等胁迫响应元件。在75 mmol/L NaCl处理24 h后,CsCBP60基因均有不同程度的响应,其中CsCBP60-1/3/7/8/9/11/15响应强烈,且在根部高表达,推测其可能在盐胁迫下发挥重要作用。本研究为进一步开展CsCBP60s功能研究提供了参考,有助于揭示该家族成员应对盐胁迫时的作用机制。

胰岛素联合硒抑制糖尿病心肌病大鼠p38MAPK/CBP通路减少心肌细胞凋亡

目的观察胰岛素联合硒对糖尿病心肌病大鼠p38丝裂原激活蛋白激酶/CREB结合蛋白(p38MAPK/CBP)通路的影响。方法 50只SD大鼠随机分为空白对照组、糖尿病心肌病组、糖尿病心肌病胰岛素治疗组、糖尿病心肌病硒治疗组、糖尿病心肌病胰岛素联合硒治疗组。流式细胞术检测细胞周期;末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法观察心肌细胞凋亡;Western blot法检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、cyclin E、Bax、Bcl-2、p38MAPK/磷酸化p38丝裂原激活蛋白激酶(p-p38MAPK)、CBP及Ku70的水平;免疫共沉淀法检测Ku70的乙酰化。结果胰岛素联合硒明显抑制心肌细胞凋亡,增加Bcl-2表达,降低Bax、cyclin D1、cyclin E、p38MAPK/p-p38MAPK、CBP、Ku70和乙酰化Ku70的表达水平。结论胰岛素联合硒通过抑制p38MAPK/CBP通路抑制心肌细胞凋亡。

以CBP为主体的高色纯度红色磷光有机电致发光器件

以铱配合物红色磷光体Ir(piq)2(acac)为掺杂剂,制备了基于CBP材料的一系列红色电致磷光器件(PLED),其结构为ITO/CuPC(1nm)/Ir(piq)2(acac):CBP(25nm)/BCP(10nm)/Alq3(35nm)/LiF(1nm)/Al(100nm),对4种不同的掺杂剂浓度进行了比较,研究了它们的电致发光特性。得出了Ir(piq)2(acac)的最佳掺杂比为8%,此时器件的色坐标都非常接近标准红色,且色纯度超过了98%以上;在16V时,色坐标为(x=0.67,y=0.32),色纯度为99.74%,基本满足了全色显示对红色发光的要求。

c-Jun和CBP在槲皮素抑制前列腺癌中的作用

目的探讨槲皮素抑制前列腺癌的作用机制。方法应用蛋白印迹技术检查槲皮素(quercetin)对雄激素受体(androgen receptor,AR)的辅调节因子c-Jun和cAMP应答元件结合蛋白的结合蛋白[cAMP response elem entb ind ing prote in(CREB)-b ind ing prote in,CBP]蛋白表达的影响;利用细胞转染技术检测c-Jun和CBP对AR功能的影响;免疫沉淀技术检验c-Jun与AR的蛋白-蛋白相互作用。结果槲皮素能够明显诱导c-Jun的高表达,高表达的c-Jun能够抑制AR的功能。槲皮素对CBP的蛋白表达水平无明显影响,而增加CBP的表达并不能逆转槲皮素对AR功能的抑制作用。免疫沉淀结果表明,c-Jun与AR存在蛋白-蛋白相互作用。结论槲皮素抑制前列腺癌的机制可能是通过c-Jun与AR的蛋白相互作用,而不是通过c-Jun竞争结合AR的辅激活因子CBP来实现的。

红景天甙对肝纤维化大鼠肝组织CBP、Smad基因表达的影响

目的:研究红景天甙对CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝组织CBP、Smad基因表达的影响. 方法:SD大鼠90只分为3组:正常对照组(C组)、模型组(M组)和红景天甙干预组(T组).以CCl4SC诱导肝纤维化,T组在造模同时给予红景天甙溶液ip.HE和Masson染色观察肝脏胶原沉积情况,原位杂交和免疫组化检测肝组织Smad 3,Smad 7和CBP基因表达. 结果:T组肝脏组织学积分减少(2.1±0.3 vs 3.6±0.8, P=0.041),胶原平均面积显著减少(1 38±66 vs 691±189 μm2,P=0.046);肝脏Smad 7蛋白表达阳性率增加[(4.27±0.43)%vs(2.86±0.86)%,P=0.035, P<0.05];Smad 3mRNA表达阳性率减少(0.18±0.03 vs 0.62±0.23,P=0.026),CBP mRNA表达吸光度值亦明显减少(0.092±0.032 vs 0.235±0.025,P=0.00012). 结论:红景天甙能有效抑制Smad 3和CBP基因表达, 促进Smad 7表达,从而干扰肝纤维化的形成.

锚定蛋白CD59与接头分子Cbp在T细胞上的定位及功能研究

目的研究CD59、Src羧基末端激酶结合蛋白(Cbp)在细胞膜的定位,及其在细胞活化及增殖中的相互作用。方法应用免疫荧光细胞化学技术,通过荧光显微镜分析系统对CD59、Cbp的定位进行了分析;Jurkat细胞转染pSUPER-siCD59重组质粒,并行RT-PCR和Western blot法检测转染细胞中CD59的表达及蛋白酪氨酸激酶癌基因家族(fyn)磷酸化水平。利用MTT比色法检测转染各组细胞的增殖效应。结果 CD59、Cbp主要分布在细胞膜上。转染pSUPER-siCD59重组质粒的Jurkat细胞中CD59表达量减少,磷酸化的fyn含量也随之减少,细胞增殖能力也低于其他各组。结论 CD59是一种膜蛋白,在细胞活化及增殖中与Cbp分子共同发挥作用。

脂筏微域内CD59趋引CBP蛋白介导T细胞下游信号的转导研究

目的探讨Cbp(Csk-binding protein)在Jurkat细胞中的过表达对其生物学功能的作用以及GPI锚定蛋白CD59通过Cbp对细胞的效应机制。方法构建Cbp-EGFP慢病毒载体,转染建立稳定的过表达Cbp-EGFP的Jurkat细胞株。采用免疫荧光技术,通过共聚焦显微镜观察CD59、Cbp的表达及定位关系;检测CD59抗体刺激前后细胞的增殖效率及细胞凋亡情况;Western blot检测Jurkat细胞中信号转导通路相关蛋白分子的变化。结果共聚焦显微镜下可见CD59、Cbp定位于胞膜上,在抗体刺激后,Cbp组与对照组均出现明显的荧光高亮聚集现象。转染Cbp-EGFP后细胞增殖速率明显降低(P<0.05),而中晚期凋亡现象显著高于阴性对照组(P<0.05)。CD59单抗作用前后相比,酪氨酸激酶蛋白(Fyn、Lck、ZAP-70)的表达量均有所下降,而Csk的表达量增加。结论 Cbp过表达能有效抑制Jurkat细胞的增殖,GPI锚固蛋白CD59可通过Cbp分子调控细胞信号转导通路中重要蛋白酪氨酸激酶的表达,进而影响Jurkat细胞的生物学活性。

下调Cbp分子促进GPI锚固蛋白CD59参与T细胞活化

目的采用RNA干扰技术构建针对Cbp基因的pSUPER-siCbp重组载体,以建立其高效转染表达体系。方法设计针对Cbp基因的寡核苷酸序列,克隆至线性化的pSUPER载体中并进行鉴定。采用电转染方法转染Jurkat细胞,荧光显微镜观察GFP基因表达,并行RT-PCR和Western blot检测转染细胞中Cbp的表达。利用噻唑蓝(MTT)比色法检测转染重组载体前后各组Jurkat细胞的增殖效应;应用ELISA检测细胞上清中白介素2(IL-2)的变化水平,比较各组差异。结果经过限制性内切酶双酶切分析、DNA PCR和DNA测序鉴定,证实重组质粒pSUPER-siCbp的序列正确。转染重组质粒的Jurkat细胞,可表达绿色荧光蛋白,转染J2-pSUPER-siCbp重组质粒的Jurkat细胞中Cbp基因表达量明显低于其他各组;其细胞增殖能力,IL-2分泌高于其他各组。结论成功构建了靶向人Cbp基因的pSUPER-siCbp载体,转染Jurkat细胞中Cbp表达降低,为以后的CD59与Cbp在T细胞信号转导通路中相互作用研究奠定了基础。

CBP基因对肺鳞癌NCI-H520细胞生长侵袭的抑制作用

目的:研究CSK结合蛋白(CSK-binding protein,CBP)基因转染对人肺鳞癌NCI-H520细胞体外生长侵袭的影响。方法:构建CBP真核表达质粒pcDNA3.0-CBP,以脂质体转染法转染体外培养的人肺鳞癌细胞株NCI-H520,G418筛选出抗性克隆。Western-blotting和RT-PCR分别检测转染前后CBP蛋白和mRNA水平的变化,MTT法分析细胞生长抑制作用,Transwell体外侵袭实验和Wound-healing实验观察细胞的侵袭和迁移能力。结果:稳定转染CBP基因的细胞株有外源目的基因的整合和相应蛋白的高表达。MTT检测表明,pcDNA3.0-CBP转染组活细胞数低于未转染组和pcDNA3.0(-)空载体质粒细胞转染组(P<0.01)。细胞侵袭、迁移实验表明转染pcDNA3.0-CBP的瘤细胞侵袭与迁移能力均明显下降(P<0.01)。结论:外源性CBP基因稳定转染可抑制人肺鳞癌NCI-H520细胞增殖、侵袭的恶性表型。

关于CBP算法的一种新型滤波函数和它的性质

用卷积反投影 (CBP)算法作CT重建 ,滤波函数是关键 .本文建议一种新型滤波函数 ,给出了用它作CT重建的误差估计 ,分析了该滤波函数的时频特性 ,并用来作局部重建 .

APACHEⅡ评分在CBP治疗MODS时机选择中的应用研究

目的探讨APACHE Ⅱ评分在指导选择连续性血液净化(CBP)治疗MODS最佳时机中的作用和价值.方法按APACHE Ⅱ评分不同,将136例MODS患者分别在APACHE Ⅱ评分<15分;15～25分;>25分3个分数段内分为CBP治疗组和非CBP治疗组.在不同APACHE Ⅱ评分分数段内分别比较是否行CBP治疗的两组患者的病死率、住院时间、医疗费用等的差异.结果 APACHE Ⅱ评分<15分时,CBP治疗组和非CBP治疗组患者均无患者死亡,医疗费用也无显著差异;但CBP治疗组患者住院时间明显短于非CBP治疗组(P<0.05).APACHE Ⅱ评分15～25分时,CBP治疗组患者病死率、住院时间明显低于非CBP治疗组(P<0.05,P<0.01),2组间的医疗费用则无显著性差异.APACHE Ⅱ评分>25分时,2组患者病死率无显著差异,但CBP治疗组住院时间、医疗费用明显高于非CBP治疗组(P<0.05,P<0.01).结论 APACHE Ⅱ评分为15～25分是CBP治疗MODS患者的最佳时机,可以产生最佳的'效-价'比.APACHE Ⅱ评分可以作为确定MODS患者是否选择进行CBP治疗,以及何时进行CBP治疗的指标之一.

家蚕不同茧色品种中cbp基因的结构和表达分析

类胡萝卜素结合蛋白(CBP)是唯一已被确认与家蚕黄色茧形成密切相关的主要蛋白质。文章选择12个有色茧和白茧蚕品种,调查了cbp基因结构、转录产物mRNA类型和丝腺类胡萝卜素紫外可见光吸收特征与其茧色的关系。结果表明:黄色茧蚕品种含有2种或3种cbp基因结构,同时转录具有CBP功能性的完整mRNA和缺少第2外显子的mRNA;绿茧品种间cbp基因结构存在差异,转录缺少第2外显子的mRNA;白茧蚕品种cbp基因只有1种结构,转录缺少第2外显子的mRNA。文章在黄茧品种中新发现的cbp基因第1内含子序列可能具有茧色品种特异性,家蚕黄茧品种丝腺的紫外可见吸收光谱特征显著区别于绿茧和白茧品种,cbp基因的结构和表达特征与家蚕茧色密切相关。

青蒿素对狼疮性肾炎小鼠外周血单个核细胞GRα mRNA、GRβ mRNA及肾组织P300/CBP蛋白表达的影响

目的:探讨青蒿素对狼疮性肾炎小鼠外周血单个核细胞GRαmRNA、GRβmRNA及肾组织P300/CBP蛋白表达的影响。方法:40只雌性B6D2F1代杂交小鼠随机分为正常对照组、模型组、泼尼松组(泼尼松混悬液灌养:6.45 mg/kg)及青蒿素组(青蒿素混悬液灌养:150 mg/kg)。通过诱导方法建立狼疮性肾炎小鼠模型,分别采用RT-PCR及免疫组化(SP)法等检测技术测定外周血单个核细胞GRα mRNA、GRβ mRNA表达及肾组织转录共激活因子P300/CBP蛋白表达情况,观察青蒿素对上述指标的影响。结果:与模型组比较,青蒿素组动物外周血单个核细胞GRαmRNA和肾组织转录共激活因子P300/CBP蛋白表达均有不同程度升高(P<0.01),GRβ mRNA表达显著降低(P<0.05或P<0.01),且青蒿素对GR αmRNA和转录共激活因子P300/CBP蛋白表达的影响明显优于泼尼松组(P<0.01)。结论:青蒿素治疗狼疮性肾炎的作用机制可能与调节外周血单个核细胞GRα mRNA、GRβ mR-NA及肾组织P300/CBP蛋白表达有关。

PRRSV在感染早期通过活化CREB竞争抑制p65与CBP结合

为研究细胞内cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的结合蛋白(CBP)在高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)感染后的结合动态对Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)表达的影响,本研究利用HP-PRRSV强毒Hu N4株感染宿主细胞,采用CO-IP方法分析CREB的磷酸化情况及其结合动态。结果显示Hu N4株感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)能够引起CREB明显磷酸化,Hu N4株感染PAMs和Marc-145细胞使p38磷酸化水平显著上调,PKA通路抑制剂可以明显抑制Marc-145细胞中CREB的磷酸化水平,但不影响PAMs中CREB的磷酸化水平。并且Hu N4株感染Marc-145细胞1 h后磷酸化的CREB能够与CBP结合,并抑制了p65与CBP的结合。当抑制剂H-89和SB203580抑制Marc-145细胞中CREB的磷酸化后,CREB与CBP的结合同时受到抑制。本研究表明HP-PRRSV Hu N4株感染细胞后,可以通过激活p38 MAPK通路而活化CREB,活化的CREB与p65竞争结合CBP,而抑制p65与CBP的结合,使得HP-PRRSV在感染早期抑制了IFN-β的表达。本研究为深入研究HP-PRRSV的免疫抑制机理提供了实验依据。

基于Kipp和CBP模型确定含水层渗透性的现场微水试验对比研究

结合泰州长江公路大桥南、北锚碇沉井排水下沉工程,在现场开展了传统的常规抽水试验和基于自主研发的岩土体渗透性参数现场快速测试系统的微水试验以确定场区含水层渗透性。通过计算结果的对比分析表明,抽水试验法和微水试验法计算结果基本一致,但由于微水试验法具有试验周期短、成本低、设备简单、分层测试、无污染的特点。因此,与其他技术如抽水试验、示踪试验和实验室渗透试验相比,微水试验法有其独特的优越性,而且其精度与准确度完全能够满足实际测定含水层渗透性的需要,在确定含水层渗透性方面具有良好的应用前景。

TSG101与P21及P300/CBP在肺鳞癌和肺腺癌中的表达及意义

背景与目的在成纤维细胞3T3随机突变试验中证实肿瘤易感基因TSG101(tumor suscepti-bility gene101)是一个潜在的肿瘤抑制基因。本研究的目的旨在探讨TSG101在肺鳞癌和肺腺癌组织中的表达,以及与性别、年龄、肿瘤大小、组织类型、肿瘤分化、分期、淋巴结转移的关系,分析其与P21及P300/CBP是否存在相关性。方法采用免疫组织化学方法(SP法)检测79例肺鳞癌和肺腺癌组织及相应癌旁正常肺组织中TSG101、P21及P300/CBP的表达情况,并结合临床病理资料进行分析。采用Western blot方法检测TSG101在26例肺癌及其在相应正常肺组织中蛋白的表达情况。结果TSG101、P21及P300/CBP在肺鳞癌和肺腺癌组织中的表达率分别为59.49%、60.76%及56.96%,TSG101的表达与P21、P300/CBP的表达呈显著正相关。TSG101、P21及P300/CBP在中高分化肺癌中的表达显著高于低分化肺癌(P均<0.05);不伴有淋巴结转移的肺癌组织中TSG101、P21及P300/CBP的表达显著高于伴有淋巴结转移者(P<0.05)。TSG101在肺鳞癌和肺腺癌中的蛋白水平显著低于其在相应正常肺组织中的表达。结论TSG101、P21及P300/CBP的表达与肺鳞癌和肺腺癌组织的分化、转移密切相关,且三者在肺癌中的表达呈显著正相关,可作为评价肺癌浸润、转移的生物学标志。

CBP抢救重症横纹肌溶解症致急性肾功能衰竭(附3例报告)

目的探讨CBP在抢救重症横纹肌溶解症致急性肾功能衰竭中的治疗作用。方法回顾性分析2005年间所抢救的3例患者、均在军事演习训练中引发急性重症横纹肌溶解症,及时采用CBP治疗。结果全组中2例在发病后24h、1例在发病后72h内进行CBP治疗,3例分别在CBP治疗后9、14和22d肾功能恢复。结论重症横纹肌溶解症起病急、病程进展迅速、容易诱发肾功能衰竭,CBP是抢救横纹肌溶解症中的重要治疗方法、效果确切。