健脾化湿颗粒对D-IBS模型大鼠内脏敏感性和脑中CRF及其受体的影响

目的观察健脾化湿颗粒对腹泻型肠易激综合征(DIARRHEA-PREDOMINANT of Irritable Bowel Syndrome,D-IBS)模型大鼠内脏敏感性和脑中促肾上腺皮质激素释放因子(Corticotropin-Releasing Factor,CRF)及促肾上腺皮质激素释放因子受体1(Corticotropin-Releasing Factor Receptor 1,CRF-R1)mRNA表达的影响。方法 72只SD大鼠随机分为正常组、模型组、得舒特组和健脾化湿颗粒低、中、高剂量组;用番泻叶灌胃结合束缚应激法复制D-IBS大鼠模型;采用直肠扩张腹壁撤退反射(Abdominal With drawal Reflex,AWR)评分评价大鼠的内脏敏感性;采用PCR法检测大鼠脑中CRF、CRF-R1 mRNA的表达。结果与正常组相比,模型组AWR评分为3的注水量明显降低(P<0.01),脑中CRF、CRF-R1 mRNA的表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,健脾化湿颗粒中、高剂量组、得舒特组AWR评分为3的注水量明显升高(P<0.01),脑中CRF、CRF-R1mRNA的表达明显降低(P<0.01)。结论健脾化湿颗粒中、高剂量组可降低大鼠的内脏敏感性,其作用机制可能与降低中枢CRF及CRF-R1 mRNA的表达有关。

丙泊酚对老年雄性大鼠海马生物钟基因及CRF1R表达的影响

目的探讨丙泊酚对老年雄性大鼠海马生物钟基因及促肾上限素皮质激素释放因子(CRF)受体亚型(CRF1R)表达的影响。方法取2015年3月至2017年5月进行实验的老年SD大鼠60只,随机数字法分为空白对照组、小剂量丙泊酚组和大剂量丙泊酚组各20只。大、小剂量丙泊酚组分别给予50、30mg/kg丙泊酚腹腔麻醉,空白对照组给予相同剂量的乳剂,采用事件相关电位测试剂及眼动测定评估3组干预前后认知功能情况,分别在老年SD大鼠苏醒后进行水迷宫试验,测定完毕后断颈处死取海马组织,利用实时定量聚合酶链反应完成海马生物钟基因测定;利用荧光定量聚合酶链反应技术测定CRF1R相对表达量。结果大剂量丙泊酚组药物使用后电位P300的潜伏期显著高于小剂量丙泊酚组和空白对照组(P<0.05),电位P300波幅及眼动凝视点数(NEF)、反应性探索评分(RSS)显著低于小剂量丙泊酚组和空白对照组(P<0.05),游泳路径长度、找到平台时间显著长于小剂量丙泊酚组和空白对照组(P<0.05),游泳速度显著小于小剂量丙泊酚组和空白对照组(P<0.05);小剂量丙泊酚组药物使用后游泳路径长度、找到平台时间显著长于空白对照组(P<0.05),游泳速度显著小于空白对照组(P<0.05);大剂量丙泊酚组药物使用后1、6、24h海马生物钟基因、CRF1R相对表达量显著低于小剂量丙泊酚组和空白对照组(P<0.05),且小剂量丙泊酚组显著低于空白对照组(P<0.05)。结论丙泊酚会对老年雄性大鼠认知功能产生不同程度的影响,且呈浓度依赖性,能影响海马生物钟基因及CRF1R表达水平。

Nesfatin-1对内脏高敏感大鼠脑肠轴CRF-R1表达的影响

目的探讨Nesfatin-1对内脏高敏感大鼠脑肠轴不同部位促肾上腺皮质释放激素受体1(CRF-R1)表达的影响。方法将新生2 d龄雄性Spragne-Dawley大鼠随机分为健康对照组和模型组,模型组大鼠通过母婴分离和醋酸灌肠相结合的方法制备。模型验证成功后,分为干预对照组、低浓度干预组、中浓度干预组和高浓度干预组,健康对照组不给予任何处理;干预对照组大鼠给予侧脑室注射生理盐水0.5μL;低浓度组、中浓度组和高浓度组大鼠分别给予侧脑室注射0.5、5和50μmol/L的Nesfatin-1 0.5μL,应用免疫组化(IHC)和ELISA方法检测内脏高敏感模型大鼠脑肠轴不同部位CRF-R1的表达。结果 ELISA检测结果显示,健康对照组、干预对照组大鼠分别与低浓度组、中浓度组、高浓度组大鼠结肠CRF-R1水平进行比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。IHC检测结果显示,健康对照组、干预对照组分别与低浓度组、中浓度组、高浓度组在结肠组织、脊髓组织、脑组织中CRF-R1阳性表达之间的差异有统计学意义(P<0.05或0.01);Nesfatin-1不同浓度组大鼠脑肠轴CRF-R1阳性表达明显高于健康对照组、干预对照组,且脑组织中CRF-R1阳性表达最显著。结论 Nesfatin-1通过影响中枢和外周CRF-R1信号通路,参与内脏高敏感的形成及调控。

健脾理气方对功能性消化不良大鼠促肾上腺皮质激素释放因子相关通路的影响

目的研究健脾理气方对功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)大鼠中枢神经系统和外周十二指肠促肾上腺皮质激素释放因子(corticotropin releasingfactor,CRF)及CRF受体1(CRF-R1)的分布与表达的影响,探讨健脾理气方对FD治疗作用的可能机制。方法36只雄性大鼠随机分为3组,并接受幼年碘乙酰胺灌胃联合夹尾应激刺激方法建立FD动物模型,其中正常组及模型组予生理盐水灌胃,治疗组予健脾理气方中药汤剂灌胃。分别采用Western Blot(WB)或免疫组化染色(IHC)分析下丘脑、脊髓及十二指肠中CRF的分布及表达,定量PCR(qPCR)检测十二指肠中CRF-R1的表达水平。结果与正常对照组相比,模型组大鼠下丘脑、脊髓及十二指肠中CRF表达水平均明显升高(P<0.01),十二指肠组织中CRF-R1 mRNA表达水平明显增加(P<0.01);健脾理气方治疗组以上各指标均较模型组显著降低(P<0.01,P<0.01,P<0.05,P<0.01)。结论健脾理气方可能通过调节中枢神经系统及外周十二指肠CRF及CRF-R1的表达,从而对FD起到治疗作用。

针刺对急性手术创伤大鼠下丘脑促肾上腺皮质激素释放因子家族肽及其受体表达的影响

目的:通过观察针刺对急性手术创伤大鼠下丘脑促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)家族肽及其受体表达的影响,探讨针刺调节急性手术创伤所导致的下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴功能异常作用的神经内分泌机制。方法:雄性SD大鼠40只,随机分成正常组、创伤组、正常加电针组、创伤加电针组,每组10只。创伤动物在乙醚麻醉下行剖腹探查术。电针组动物电针"足三里""三阴交"30min。应用特异性放射免疫法检测各组动物血清促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质肌动蛋白(Cort)、促黄体生成素(LH)和肌钙蛋白(T)的水平,应用RT-PCR的方法观察各组动物下丘脑CRF家族肽和其受体mRNA的表达。结果:创伤组大鼠血清ACTH水平显著下降(P<0.05),创伤加电针组血清ACTH水平和创伤组相比显著升高(P<0.05);创伤组大鼠血清Cort水平较正常组显著上升(P<0.05),创伤加电针组血清Cort水平较创伤组显著降低(P<0.05);各组动物血清LH和T水平差异无统计学意义(P>0.05)。创伤组大鼠下丘脑CRF mRNA的表达和正常组相比降低(P<0.05),创伤加电针组大鼠下丘脑CRF mRNA的表达和创伤组相比升高(P<0.05);创伤组大鼠下丘脑Ucn1 mRNA的表达与正常组比较升高(P<0.05),创伤加电针组大鼠下丘脑Ucn1 mRNA的表达和创伤组相比下降(P<0.05);各组Ucn2、Ucn3和CRF受体1 mRNA的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:电针效应具有多环节、多靶点的特点,电针可能通过调整急性创伤大鼠下丘脑CRF和Ucn1 mRNA的表达,进而调整急性剖腹探查所致的大鼠HPA轴功能异常。