基于中国HIV-1 CRF01_AE重组亚型gp41 NHR结构域亚单位疫苗的研究

目的:构建基于中国HIV-1 CRF01_AE重组亚型包膜糖蛋白gp41 NHR结构域N51的亚单位疫苗,并进行免疫原性研究。方法:设计4条引物,运用重叠延伸PCR方法扩增出N51Fd基因,将其插入真核表达载体pFUSE-hIgG1-Fc2,构建重组质粒pFUSE/N51Fd并进行序列测定。Western blot法检测N51FdFc-AE重组蛋白的表达。用纯化蛋白免疫BALB/c小鼠后,ELISA法检测小鼠的抗体反应。结果:成功构建了pFUSE/N51Fd重组质粒,N51FdFc-AE重组蛋白在真核体系获得了高效表达,Western blot结果显示在相对分子质量(Mr)35 000处有目的蛋白条带。小鼠抗血清能特异性识别源于gp41 NHR的抗原,效价高达1∶102 400,平均效价为1∶51 200。结论:改造后的亚单位疫苗能有效激活机体的免疫响应,可用于HIV候选疫苗的研发。

HIV-1 CRF01_AE毒株gp41蛋白生物信息学预测

目的:对HIV-1 gp41蛋白的膜外区和跨膜区进行预测,并分析该蛋白的结构和功能。方法:从NCBI GenBank数据库获取gp41基因及其蛋白编码序列,利用ExPASy ProtParam tool、ProtScale、SignalP 4.0 Server、TMHMM Server v.2.0、SWISSMODEL、PredictProtein等工具对gp41蛋白的生物学特性进行预测。结果:HIV-1 gp41基因ORF长度为666 bp,编码222个氨基酸,蛋白分子式为C1164H1815N317O325S6,等电点(isoelectric point,pI)=8.60,属于稳定、疏水性蛋白。该蛋白具有跨膜区,信号肽切割位点位于第20和21位氨基酸处。其二级结构由无规则卷曲、β折叠和α螺旋组成,属于全螺旋型蛋白。而且该蛋白具有N-端信号肽,能引导蛋白分泌到胞外。此外gp41蛋白具有4个蛋白质-蛋白质和1个蛋白质-核酸结合位点,这些位点能调控gp41蛋白的多种生物学功能。结论:对gp41蛋白的结构和功能进行了预测,为深入研究其参与疾病发生发展的分子机制奠定了基础。

表达HIV-1 CRF01_AE亚型结构基因小鼠模型的建立和鉴定

目的:构建并鉴定表达HIV-1 CRF01_AE亚型结构基因的小鼠模型。方法:使用哺乳动物密码子优化的HIV-1 CRF01_AE gp160基因,通过慢病毒包装系统构建重组慢病毒LV-GFP-AE gp160,将上述重组慢病毒感染小鼠肺上皮细胞TC-1,经嘌呤霉素抗性筛选获得稳定表达gp160基因的TC-1细胞。采用RT-PCR、流式细胞术检测gp160基因在细胞内的表达稳定性,将稳定表达Gp160蛋白的TC-1-HIV AE gp160细胞接种小鼠,用免疫组化方法检测小鼠体内细胞团块中HIV Gp160蛋白的表达。结果:菌落PCR、酶切鉴定和测序表明重组质粒pLVX-AE gp160构建正确,RT-PCR、GFP荧光及流式细胞术结果均显示gp160基因能在细胞TC-1中稳定表达,免疫组化结果也表明小鼠体内接种的细胞可以稳定表达HIV Gp160蛋白。结论:建立了稳定表达HIV-1 CRF01_AE亚型Gp160蛋白的TC-1细胞及小鼠模型,为HIV-1 CRF01_AE亚型HIV疫苗的临床前研究提供了可靠的体外、体内免疫原性评价工具,为该疫苗的进一步开发奠定了坚实的实验基础。

保定市1株新型HIV-1重组毒株的近似全长基因组鉴定分析

目的对保定市新发现的1株pol区不能明确分型的HIV-1毒株(BD226AJ)进行近似全长基因组扩增,并分析其亚型、重组模式和基因特点。方法提取患者血浆中HIV-1RNA并逆转录为cDNA,使用近末端稀释法分2段对其进行近似全长基因组扩增并测序。使用jpHMM和SimPlot 3.5软件对近似全长基因组序列进行重组模式和重组断点分析,采用MEGA 6.0软件分片段构建Neighbor-joining系统进化树进一步确认重组断点的准确性。构建该近似全长基因组序列及各亚型片段Neighbor-joining系统进化树,分析该毒株的亲本来源。结果经过近似全长基因组扩增、测序、序列拼接后,获得1条长度为8830 bp的HIV-1近似全长基因组序列。重组分析结果显示,该序列是由CRF01_AE和B亚型重组形成的,其近似全长基因组序列被3个断点分成了4个亚型片段,分别为ICRF01_AE(HXB2,823—4224 nt)、Ⅱ_(B)(HXB2,4225—5991 nt)、ⅢCRF01_AE(HX B2,5992—9295 nt)、ⅣB(HXB2,9296—9406 nt)。各亚型基因片段的系统进化树分析进一步表明该序列的可能亲本来源为CRF01_AE和B亚型。HIV BLAST的结果显示,该序列与CRF112_01B的相似性为96%,系统进化树分析进一步验证该序列与北京市男男性行为者(men who have sex with men,MSM)中的CRF112_01B序列聚集。结论本研究在保定市MSM人群中发现了1例由CRF01_AE和B亚型重组的新型重组毒株CRF112_01B,提示HIV-1CRF112_01B已通过MSM人群传入河北,并开始在保定市传播,因此加强该亚型或者类似新型毒株的监测,对有关部门采取针对性防控措施和遏制新型重组毒株在本地区的传播和流行具有重要意义。

利用分子传播网络分析昆明市HIV-1 CRF01_AE毒株流行特点

目的 通过构建昆明市HIV-1 CRF01_AE毒株的分子传播网络,分析其流行特征并观察动态流行趋势,从而为当地制定疫情防控干预措施提供科学依据。方法 选择2015―2021年云南省传染病医院接受治疗的253例昆明市HIV-1 CRF01_AE新发感染患者作为研究对象。运用反转录巢式聚合酶链式反应成功扩增其基因序列,序列比对后导入HyPhy 2.2.4软件进行成对基因距离的计算。运用GraphPad-Prism 8.0软件确定最佳基因距离阈值,使用Cytoscope 3.7.2软件实现网络可视化。运用Network-Analyzer和MCODE(Molecular Complex Detection)工具进行网络特征分析。结果 在0.018最佳基因距离阈值下,253个研究对象中有118个(46.64%)进入网络分析,共形成了38个分子簇,其组成大小从2到17个节点不等。网络集群主要以异性传播(51.78%)和同性传播(37.94%)为主,年龄段主要分布于20~40岁(77.47%)。网络所有节点的总链接数为226,单个节点最高链接数为10。MCODE确定了3种重要的分子簇,3个分子簇分别定义为B、C、D型,B型由17个节点和19链接数组成,为同性传播集群呈低增长状态。C和D型均由5个节点和10链接数组成,为异性传播集群且呈静止状态。结论 昆明市HIV-1 CRF01_AE毒株分子传播网络中的分子簇具有一定特殊性和聚集性。同性传播和异性传播人群已经成为昆明市HIV-1 CRF01_AE毒株感染的两大风险群体,同时两个群体还有发生交叉传播的现象。传播网络中有一个同性传播组成的集群规模较大,其传播风险和活跃度较高,需加强对其监测,并制定针对性的干预措施对集群中的“核心人群”进行防控。

中国南方四省区流行的HIV-1 CRF01_AE病毒株基因特征研究

目的分析中国南方四省区HIV-1感染者中流行CRF01_AE病毒株的遗传特征。方法从广东、广西、江西和湖南省（自治区）2006年新报告HIV-1感染者的血浆样本中提取病毒RNA，用反转录／巢式PCR方法扩增gag和env基因片段，对获得的CRF01_AE病毒株核酸序列进行系统进化分析，并通过计算基因距离和Entropy核苷酸多态性差异方法分析毒株的遗传特征。结果从210例CRF01_AE病毒株感染者中，发现四省区流行的CRF01_AE病毒株存在2个主要的流行簇。流行簇Ⅰ共有123例样本，未发现与之直接相关的国际参考毒株。流行簇Ⅱ共有57例样本，与越南CRF01AE病毒株关系密切，且存在不同时间样本的混杂。gag和env基因遗传距离分析结果表明，流行簇Ⅰ内基因遗传多样性均明显小于流行簇Ⅱ；核苷酸多态性分析结果显示，在gag基因片段42个位点核苷酸组成具有显著差异，env基因片段40个位点核苷酸组成存在显著差异；流行簇Ⅰ相对于流行簇Ⅱ多态性减少的位点上有61个，多态性增加的位点有21个。结论在中国南方四省区流行的CRF01_AE病毒株中首次观察到2个独立的流行簇。流行簇I病毒株为该地区最主要的CRF01_AE病毒株，其流行时间相对较短，在人群中所占比例较多，可能是病毒在流行过程中形成的具有传播优势的病毒株。流行簇Ⅱ病毒与来自于越南的CRF01_AE病毒株有较高同源性，且存在与越南病毒株问的多次传播。

人类免疫缺陷病毒-1CRF01_AE毒株在我国的分子流行特征分析

目的了解HIV-1CRF01_AE毒株在我国的分子流行特征。方法计算机检索相关数据库并结合文献追溯的方法提取数据，按地区和研究人群分组进行Meta分析，计算HIV-1CRF01_AE感染者占不同高危人群的比例。从美国洛斯阿拉莫斯国家实验室HIV基因数据库（LosAlamosdatabase）中下载中国地区的CRF01_AEpol区基因序列，利用FastTree2．1构建系统进化树进行成簇分析。根据BEASTV1．6．2和Spread计算贝叶斯因子分析空间地理传播关联。结果HIV-1CRF01_AE毒株在我国6个地区的MSM人群中所占比例均〉45．0％；在东部、北部、西南和中南地区的异性性行为人群中所占比例均〉30．0％；在中南地区的静脉药瘾人群中所占比例最高，为57．3％（95％CI：35．1％～79．6％）；而输血传播人群仅在中南地区占有较低的比例，为10．6％（95％CI：6．2％～14．9％）。系统进化分析表明，该毒株在我国形成7个独立的传播簇，其中簇1、3、5主要流行于异性性行为感染人群中，簇2及簇6主要流行于MSM人群中，簇4主要流行于性行为感染人群中。簇1～5均在西南地区流行，中南地区主要流行簇7和簇1，北部地区主要流行簇2和簇6，东部地区主要流行簇2和簇4，东北地区主要流行簇6。贝叶斯因子分析结果显示，该毒株在我国东部、中南部、西南部、北部及东北部的省份之间传播关系错综复杂。结论CRF01_AE毒株活跃在我国各个地区的多个高危人群中，不同地区之间的传播关联错综复杂。

人类免疫缺陷病毒-1 CRF01_AE毒株在我国的分子传播网络分析

目的构建我国HIV-1 CRF01_AE毒株分子传播网络，并分析网络特征。方法从洛斯阿拉莫斯国家实验室HIV基因数据库（Los Alamos database）下载中国地区的CRF01_AE pol区基因序列并进行人口学信息核对。通过构建系统进化树、提取传播簇、最小基因距离选择及传播网络可视化4个步骤构建传播网络。运用卡方检验分析不同人群参与网络形成的比例和网络中度的分布。描述性分析不同人群和不同地区之间的传播关联。结果2 419条序列共形成250个大小介于2～25的传播网络，包括847个节点和610条边。度≥2的个体虽然只占网络中个体总数的26.4%（224/847），但与66.5%（563/847）的个体存在关联。男男同性性行为者（MSM）、男性异性性行为者、静脉药瘾者（IDUs）及女性异性性行为者参与网络形成的比例分别为37.6%（669/1 781）、28.4%（102/359）、16.1%（10/62）和30.4%（66/217），差异有统计学意义（χ^2＝23.774，P〈0.001）。MSM人群中度≥2的比例（10.8%，193/1 781）显著高于男性异性性行为者（5.6%，20/359）和女性异性性行为者（4.6%，10/217）（P值分别为0.002和0.004）。网络中绝大多数（95.5%，639/669）MSM与其他MSM之间存在传播关联，仅有2.4%（16/669）的个体与女性异性性行为者之间存在传播关联，但有15.1%（10/66）的女性异性性行为者与MSM之间存在传播关联。男性异性性行为者与女性异性性行为者之间存在传播关联的比例为35.3%（36/102），与MSM之间具有传播关联的比例为9.8%（10/102）。网络中20.9%（177/847）的个体与其他省份之间存在传播关联。结论较少比例的超级传播者在CRF01_AE毒株的分子传播网络形成中起到了核心作用，不同人群和不同地区之间的毒株进行着活跃的传播。

上海市男男性行为者中感染HIV-1的CRF01_AE毒株传播簇分析

目的了解上海地区男男性行为者(MSM)中,感染艾滋病病毒1型(HIV-1)的CRF01_AE重组型的流行情况、成簇特性,为HIV防控工作提供科学数据。方法从2009-2013年每年新诊断的MSM HIV-1感染者血浆样本中提取RNA,并对HIV-1 pol基因片段进行反转录和巢式PCR扩增、DNA测序和亚型分析。对CRF01_AE重组型序列进行系统进化学和社会人口学信息分析。结果 1262名MSM感染者中,CRF01_AE重组型感染782人(62.0%),其序列在系统进化树上形成6个流行簇。使用不同参数界定传播簇并进行比较,选择以Bootstrap≥90%及基因距离≤0.03作为传播簇的界定标准,形成112个传播簇,其中由10条及以上序列形成的传播簇有5个;年龄、文化程度、婚姻状况、性病史和CD4+T淋巴细胞计数与样本的成簇性有统计学关联。结论 CRF01_AE重组型毒株是上海市MSM HIV-1感染者中的优势传播株,具有较强的成簇性,并且与相关的社会人口学和流行病学背景相关。

2009年浙江省HIV-1型CRF01_AE流行株分布特征

目的了解2009年浙江省HIV-1型CRF01_AE重组毒株在浙江省随访HIV感染者和艾滋病患者中的分布特征。方法以浙江省地市为单位进行分层，对2009年随访的H1V感染者和艾滋病患者随机抽样确定303例研究对象，收集调查对象信息并采集样本提取DNA，用PCR方法扩增gag部分基因片段，测定序列并进行分子流行病学分析。结果303例研究对象中扩增阳性并成功测序的共有225例。其中，CRF01_AE重组型占58．67％（132／225）。感染CRF01_AE毒株的调查对象中，性传播者占90．91％（120／132），其中异性性传播占65．91％（87／132），男男性行为传播者占25．00％（33／132）。系统树分析表明，感染CRF01_AE毒株的HIV感染者及艾滋病患者的病毒系统进化树存在3个分支簇，组内基因遗传距离分别为0．037±0．011、0．034±0．008、0．047±0．010（P〈0．05）。同性传播感染者序列高度集中在簇1（96．97％，32／33），且与异性传播感染者序列并存，且与江苏、河南郑州、辽宁和河北石家庄流行株有亲缘关系。结论CRF01_AE毒株在浙江省随访的HIV感染者及艾滋病患者中分布最广，以性传播为主（异性传播居多），同性传播毒株自成体系，但有向异性传播感染者扩散的现象。

1992--2008年深圳HIV-1CRF01_AE重组株的流行趋势与进化规律

目的了解HIV-1CRF01_AE重组株在深圳地区的流行情况，并分析其流行趋势及进化规律。方法收集深圳地区1992--2008年HIV确认阳性血液样本489份，应用巢式聚合酶链反应（Nested-PCR）技术，对样本膜蛋白（Env）基因进行扩增，并对其基因区核苷酸序列进行测定，判定亚型结果。对获得的CRF01_AE重组株核酸序列进行系统进化分析，并计算基因离散率。结果共有465份样本获得分型结果，其中CRF01_AE重组株样本300份（占64．5％）。1992-1999、2000—2005和2006--2008年3个时间段CRF01_AE重组株所占比例分别为56．8％（21／37）、68．4％（78／114）和64．0％（201／314）；在这3个时间段内，经异性性传播的比例分别为52．4％（11／21）、43．6％（34／78）和45．8％（92／201），经同性性传播的比率上升明显，分别为4．8％（1／21）、0．0％（0／78）和22．4％（45／201），经吸毒传播的比例分别为19．0％（4／21）、51．3％（40／78）和30．8％（62／210）。系统进化分析发现，不同时间段的样本出现明显的时间聚集现象，并伴有传播途径的聚集及交叉感染现象。各时间段CRF01_AE重组株组内基因离散率分别为（8．783±4．717）％、（11．054±7．141）％、（13．218±4．080）％，有明显的增大趋势。结论HIV-1CRF01_AE重组株是深圳地区的主要流行株，主要经异性性行为、同性恋和吸毒人群传播，随着时间的推移毒株变异程度逐渐增大。

大连地区HIV-1 CRF01_AE亚型株基因特征分析

目的了解大连地区HIV-1 CRF 01_AE亚型株的基因特征及其可能传播链。方法对2008—2012年新确认144份全血标本进行血浆分离和HIV RNA提取,巢式PCR扩增Env基因并进行序列测定,并对CRF 01_AE亚型毒株序列进行生物信息学分析。结果得到的HIV感染者有效基因序列中,CRF 01_AE亚型占62.14%(64/103),所有病例均为性接触途径传播。系统进化树分析大连CRF 01_AE存在2个簇,分别以男男同性传播和异性传播毒株为主,其中男男同性性接触人群(MSM)簇组内平均基因离散率小于异性性接触者(Hetero)簇;与其他地区的CRF 01_AE亚型株构建的系统进化树显示2簇内均无其他国家序列,MSM簇与辽宁(除大连地区,下同)、北京和吉林MSM人群的CRF 01_AE亚型株位于同一分支,Hetero簇毒株则与辽宁、北京的MSM流行株及东南沿海地区异性传播CRF 01_AE亚型株遗传距离相近。结论大连市HIV-1 CRF 01_AE株主要通过性接触传播,男男同性传播毒株占主导优势,毒株传入大连时间晚于异性性接触者簇流行株;MSM存在2个以上传播链,与北方部分地区MSM人群中CRF 01_AE亚型株存在多次传播。

艾滋病病毒1型CRF01_AE毒株的过去、现在和将来

CRF01_AE是我国目前流行的主要HIV-1毒株，具有独特的流行病学特征。本文从该毒株的发现起源与命名、在国内外的流行过程、参与形成的重组毒株以及致病性等方面进行介绍，并讨论了与流行病学特征密切相关的社会和生物学因素。

长春市HIV感染者病毒基因亚型分布状况及CRF01_AE毒株基因特征

目的了解长春市艾滋病病毒（HIV）感染者病毒基因亚型分布状况及当前主要流行株CRF01_AE毒株的基因变异特征。方法采集HIV感染者血液标本,提取病毒核糖核酸（RNA）,应用巢式聚合酶链反应对HIV的gag区（HXB2：863~1486）基因进行扩增并测序。PhyML3.0软件构建系统进化树,采用HIV database数据库中Entropy、N-Glycosite、VESPA对CRF01_AE毒株两个独立进化簇的氨基酸多态性、糖基化位点、特征性氨基酸进行分析。结果成功测得gag序列的97例感染者中,经男男同性传播感染者71例（73.2%）;经异性传播感染者13例（13.4%）,双向传播感染者1例,12例感染途径未知。基因亚型分析结果显示,CRF01_AE 73例（75.3%）,CRF07-BC 18例（18.6%）,B亚型5例（5.2%）。URFs1例（0.1%）。系统进化树显示CRF01_AE在感染者中形成两个独立的进化簇,其中簇Ⅰ44株（61.1%）,簇Ⅱ28株（38.9%）。进一步对CRF01_AE两个进化簇分析显示：这两个独立进化簇有10个特征性氨基酸存在差异,簇Ⅰ糖基化位点多态性大于簇Ⅱ,但氨基酸位点多态性小于簇Ⅱ。结论长春市HIV感染者主要以男男同性接触感染为主,CRF01_AE已成为本地最主要流行株。CRF01_AE毒株流行簇Ⅰ和Ⅱ存在特征性氨基酸,糖基化位点和氨基酸位点存在多态性差异,提示应密切关注本地区HIV的基因变异特征。

我国HIV-1 CRF01_AE毒株辅助受体利用的基因预测可行性研究

目的探讨HIV-1辅助受体基因预测工具对我国流行的CRF01_AE毒株辅助受体利用的可行性。方法从北京市、广西壮族自治区、四川省的HIV-1感染者中分离出CRF01_AE毒株22株,利用基因型方法(11/25规则、WebPSSM和geno2pheno)对病毒辅助受体利用情况进行预测,将预测结果与经GHOST细胞系检测的表型实验结果进行比较。结果经GHOST细胞系检测,22株CRF01_AE毒株中,4株利用CCR5/CXCR4辅助受体,18株利用CCR5辅助受体。11/25规则预测与表型实验的一致率为86.4%;geno2pheno中,G2p-clinical、NGS-sanger和G2p-colon模型预测与表型实验的一致率分别为95.5%、86.4%和68.2%;WebPSSM中,PSSM-sinsi_B、PSSM-x4r5和PSSM-sinsi_C模型预测与表型实验的一致率分别为86.4%、72.7%和45.5%。结论对于我国CRF01_AE毒株的HIV-1感染者,在使用辅助受体拮抗剂之前应进行辅助受体利用的预测,Geno2pheno是较准确的辅助受体基因预测工具。

中国部分地区HIV-1 CRF01_AE流行情况

近几年我国艾滋病病毒1型(HIV-1)的流行情况复杂,性接触传播逐渐成为感染HIV-1的最主要途径。CRF01_AE毒株在中国部分地区所占比例呈现逐年上升趋势,且与性传播密切相关,尤其在男男同性性行为者中广泛流行。本文对46篇针对CRF01_AE亚型研究的文献进行了综述,总结了我国HIV-1流行情况,并对我国黑龙江、河北、江苏、浙江、广西、广东、上海地区的HIV-1 CRF01_AE流行情况进行汇总,获得2004-2015年CRF01_AE亚型在HIV-1感染者基因亚型中所占比例变化规律,并分析了此毒株流行情况变化的原因。CRF01_AE毒株的快速传播和广泛分布为我国HIV-1感染的防控带来了挑战,在今后的防控工作中应密切关注该亚型毒株的变化情况。

南京地区HIV-1 CRF01_AE毒株分子流行特征及传播网络分析

目的 了解南京地区HIV-1 CRF01_AE毒株分子流行特征及传播网络情况,为该毒株的疫情防控提供参考依据。方法 收集2015年9月至2019年6月南京市新确诊的HIV-1感染者血样及人口学信息。扩增HIV-1 pol区基因片段,经判定CRF01_AE毒株共401条。以最大似然法构建系统进化树;通过Tamura-Nei 93成对基因距离法构建传播网络并分析其特征。结果 CRF01_AE毒株在南京地区共形成了3个全国相关流行枝(Clade 4a、Clade 4b、Clade 5)以及1个独特的南京流行枝(NJ-Clade),这4个流行枝分别包括23.69%(95/401)、18.20%(73/401)、13.72%(55/401)和30.92%(124/401)的南京序列。NJ-Clade中感染者年龄显著低于其他流行枝(χ^(2)=34.286,P<0.001),并且具有更高比例的同性性向(χ^(2)=19.129,P=0.024)和男男性行为(χ^(2)=14.293,P=0.027)。71.82%(288/401)的CRF01_AE毒株形成83个传播网络。多因素分析显示,相比Clade 4a(a OR=0.464)、Clade 4b(a OR=0.363)、Clade 5(a OR=0.483)流行枝,NJ-Clade具有更高的网络形成率。结论 南京地区HIV-1 CRF01_AE毒株流行情况复杂,除包含全国相关流行枝外,已形成了独特的南京流行枝,应持续监测各流行枝的进化传播情况。

1996-2014年中国HIV-1毒株CRF01_AE亚型传播簇和传播网络研究

目的了解我国HIV-1毒株CRF01_AE亚型在省内和省际的传播规律和风险因素,为实施精准干预提供参考依据。方法收集我国19个省份1996-2014年已有的2094条CRF01_AEpol区基因序列,利用PhyML3.0软件构建系统进化树,确定传播簇,利用Cytoscape3.6.0软件构建传播网络,结合背景信息分析传播风险。结果发现82个传播簇,包含255条序列(12.18%,255/2094),省内传播簇数量和包含序列数(61个,173条)明显多于跨省传播簇(21个,82条)。传播簇中男男性传播人群的成簇比例随时间上升趋势明显,由1996-2008年的2.41%(2/83)上升为2013-2014年的23.61%(72/305)(χ^2=27.800,df=1,P=0.000)。跨省传播簇的男男性传播人群比例明显高于省内传播簇,由1996-2008年的0.67%(2/297)上升为2013-2014年的6.36%(30/472),具有随时间的上升趋势(χ^2=20.276,df=1,P=0.000)。跨省传播簇中男男性传播的比例(86.59%,71/82)明显高于省内传播簇(56.65%,98/173),差异有统计学意义(χ^2=22.792,P=0.000)。含2种及以上传播途径的跨省传播簇的比例(33.33%,7/21)明显高于省内传播簇(13.11%,8/61),差异有统计学意义(χ^2=4.273,P=0.039)。传播网络分析发现,跨省传播簇内高传播风险人群比例(51.22%,42/82)明显高于省内传播簇(26.59%,46/173),差异有统计学意义(χ^2=14.932,P=0.000)。跨省传播簇以男男性传播人群为主。结论我国HIV-1毒株CRF01_AE亚型存在复杂的传播网络,跨省传播簇快速增长,其中高风险传播者对HIV-1亚型的大范围传播起到重要作用,应深入进行传播网络研究以指导精准干预。

云南省HIV-1 CRF01_AE毒株基因型耐药研究

目的 了解云南省HIV-1 CRF01_AE毒株的流行分布及基因型耐药情况。方法 收集2018—2021年云南省抗病毒治疗失败的HIV/AIDS患者的人口学资料,采集患者血浆,逆转录聚合酶链反应扩增HIV-1 pol基因蛋白酶和逆转录酶区并进行序列测定,对基因型为CRF01_AE的序列进行耐药情况分析。结果 通过基因型耐药检测共获得967例亚型为CRF01_AE序列,其中男性682例(占70.5%),耐药509例,耐药率为52.6%,异性性传播813例(占84.1%),同性性传播95例(占9.8%)。同性性传播的耐药率最高,为65.3%;治疗时长<12个月的耐药率最低,为35.9%,36~<48个月耐药率最高,为58.1%。核苷类反转录酶抑制剂(NRTIs)耐药率为33.9%,非核苷类反转录酶抑制剂(NNRTIs)的耐药率为48.5%,蛋白酶抑制剂(PIs)的耐药率较低为1.3%。NRTIs类药物中阿巴卡韦(ABC)、恩曲他滨(FTC)和拉米夫定(3TC)耐药率较高,分别为为32.9%、32.4%和32.4%;NNRTIs类药物中奈韦拉平(NVP)和依非韦仑(EFV)耐药率较高,分别为47.6%和47.5%,均以高度耐药为主。一线治疗方案耐药率56.2%高于二线治疗方案耐药率29.5%,差异有统计学意义(P<0.001)。NRTIs耐药突变位点中,以M184V/I突变位点为主,突变率为30.0%;NNRTIs耐药突变位点中,以K103N/Q/S突变位点为主,突变率为28.1%;PIs耐药位点突变率相对较低,主要的耐药突变位点是L33F,突变率为3.7%。结论 云南省抗病毒治疗失败亚型CRF01_AE的患者耐药率有所降低,但部分地区及人群的耐药率仍较高,应加强对重点地区和人群的管理,加强耐药监测,对治疗失败的患者及时掌握耐药情况,合理调整治疗方案。

Laos is Affected by HIV CRF01_AE and the Newly Identified CRF97_01B

Laos is the only landlocked country in Southeast Asia and borders Thailand,Myanmar and Cambodia,the three countries in this region that have been hardest hit by human immunodeficiency virus(HIV).Laos has been regarded as a low-HIVprevalence country for decades.To understand the status of HIV in Laos in recent years,a retrospective study was performed among 2851 patients visiting a hospital in Vientiane,the capital of Laos,from November 2011 to May 2012.Whole blood samples were obtained from the patients,and DNA was extracted.HIV status was determined by HIV gag fragment-specific PCR assay.Sixty-nine samples were detected as HIV proviral DNA positive with a positive rate of 2.4%(69/2851).Sixty-one near full-length genomic sequences were obtained from the positive samples.The results of phylogenetic analysis showed that the vast majority(91.8%)of the HIV strains belonged to CRF01AE,and the other five(8.2%)strains were identified as a new HIV circulating recombinant form CRF9701B,which had a CRF01AE backbone with an insertion of subtype B in the gag-pol region.Phylogeographic analysis revealed that HIV CRF01AE circulating in Laos were multiply introduced from Thailand.These results indicated that Laos might be suffering a considerably more serious impact of HIV than previously believed.To keep this country from undergoing the same increase in HIV prevalence observed in its neighbors,immediate intervention measures and sufficient epidemiological research are urgently needed.