弱精子症患者精子中CRISP2基因及蛋白的初步研究

目的:探讨弱精子症患者精子中富含半胱氨酸的分泌蛋白2(CRISP2)mRNA及蛋白的表达水平,探讨其与精子活力的关系及相关的分子机制。方法:收集成年男性弱精子症患者精液78例,活力正常精液70例作为对照组,50% Percoll离心分离纯化后,提取精子总RNA及总蛋白,采用RT-PCR,SYBR Green实时定量PCR和Western印迹技术检测CRISP2 mRNA及蛋白相对表达量。结果:CRISP2基因在弱精子症患者精子中的表达量明显低于其在正常对照组精子中的表达量,下降达4.3倍;Western印迹发现CRISP2蛋白在弱精子症组较正常对照组下降达1.71倍,两组之间的表达量有明显的统计学差异(P<0.05)。结论:CRISP2基因及蛋白在弱精子症患者精子中的表达下调可能与精子活力下降有密切联系,提示CRISP2基因及蛋白可能成为弱精子症发病机制研究的一个分子靶标。

CRISP2基因及蛋白在弱精子症患者中的表达及其临床意义

目的弱精子症作为男性不育的重要因素之一,影响着全球15%的育龄夫妇,但其发病机制尚待阐明。课题组前期研究通过基因芯片技术发现CRISP2在弱精子症患者精子中表达明显下调,但其临床意义仍有待进一步阐明。方法收集2013年1月至2013年6月的弱精子症患者及健康男性精液标本各24例,检测这些精液样本中CRISP2基因及蛋白表达水平,探讨其与精子形态、运动能力及生育预后的相关性。结果弱精子症患者精液标本中CRISP2蛋白表达水平明显低于正常对照组,而CRISP2基因mRNA表达水平并无明显统计学差异。相关性分析显示CRISP2蛋白表达水平与形态正常精子率(r=0.6182,P=0.0037)及前向运动能力(r=0.6309,P=0.0029)呈明显正相关。经过密切随访,CRISP2蛋白高表达患者配偶受孕率明显高于CRISP2蛋白低表达患者(80.0%vs 20.0%,P=0.0230)。结论 CRISP2蛋白表达水平与弱精子症患者的精子形态、前向运动能力呈正相关,且CRISP2蛋白低表达的弱精子症患者生育预后不良,提示CRISP2作为弱精子症患者治疗新靶点的潜在价值。

版纳微型猪近交系不育和可育公猪CRISP2基因全长编码区序列克隆及睾丸差异表达分析

CRISP2作为弱精子症发生的重要候选基因,为深入研究CRISP2与精子活力的关系及其在体内的调节与功能提供基础资料,本研究以版纳微型猪近交系(BMI)不育和可育公猪为试验动物,通过RT-PCR方法扩增得到CRISP2基因全长编码区序列,不育和可育公猪序列无差异,提交Gen Bank数据库,获得登录号为"KP780059"。生物信息学分析显示,该基因编码244个氨基酸,蛋白分子量为27.05 ku,等电点为6.76。蛋白质结构分析得出,CRISP2存在2个保守域,无跨膜结构,存在信号肽及1个亮氨酸富集的核输出信号,N端、C端均疏水;亚细胞定位显示该蛋白分泌到细胞周质的概率为94.1%。系统进化分析表明,猪与牛、绵羊的亲缘关系较近。同时,利用荧光定量PCR法确定了CRISP2 mRNA在BMI不育及可育公猪14个组织中的表达量,发现其在睾丸中特异表达,CRISP2基因在不育公猪睾丸中的表达量明显低于可育公猪,两组之间的表达量有显著的统计学差异(P<0.05),表明CRISP2表达的减少可能导致精子活力下降。本研究为进一步研究猪CRISP2基因在精子发生方面的作用奠定研究基础。

CRISP2基因在不同类型精子发生障碍中的表达及其意义

目的探讨不同类型精子发生障碍男性精液中CRISP2 mRNA的表达水平及其意义。方法 150例男性不孕患者分为正常组、弱精子组、少精子组各50例,提取精液细胞总RNA,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)测定3组精子中CRISP2基因的mRNA转录水平并进行比较。结果 CRISP2在正常组中的相对表达量(10.281±2.173)显著高于弱精组(2.092±0.969),差异有统计学意义(P<0.05),正常组与少精子组(9.420±2.794)差异无统计学意义(P>0.05),而弱精子组的CRISP2相对表达量也显著低于少精组(P<0.05)。结论 CRISP2在不同精子发生障碍男性中的表达显著不同,CRISP2表达的减少可能导致精子活力下降。

版纳微型猪近交系CRISP2基因序列的生物信息学分析

为了获得版纳微型猪近交系(BMI)半胱氨酸分泌蛋白2(CRISP2)序列,通过生物信息学分析探讨弱精症猪分子机制,试验以BMI的精子为材料提取RNA,采用RT-PCR方法扩增CRISP2基因部分序列,利用在线分析软件进行生物信息学分析。结果表明:试验扩增出CRISP2基因序列。生物信息学分析结果表明,与其他猪(登录号为NM_001128437)相比,BMI的CRISP2基因序列在3'非编码区有4个核苷酸的缺失。

CRISP2蛋白研究进展

CRISPs(cysteine rich secretory proteins)蛋白家族有4个成员,CRISP2是唯一在睾丸中表达的CRISPs成员,组织特异性较高。精母细胞表达和分泌CRISP2,不受雄激素的影响。CRISP2分布于生精上皮内,定位于精母细胞和支持细胞间的连接处,可以增强精母细胞连接到支持细胞上的能力;继而存在于圆形精子细胞及延长型精子细胞,可结合到精子尾部和头部顶体,并最终定位于精子尾部以及顶体。CRISP2可能与精子顶体RyR3受体结合调节Ca^(2+)内流;此外,CRISP2可能还具有调节RyR受体之外的其他离子通道(如抑制K^(+)通道)的功能。研究表明,CRISP2参与了精子成熟和获能的全程,也在精卵结合的过程中起一定作用。综述CRISP2蛋白在睾丸的表达和分布、调控以及作用。