海南黄灯笼椒辣椒素合成酶基因克隆及表达研究

辣椒素是辣椒果实最重要的品质性状,在食品、医药和工业上都具有重要应用前景,其含量高低决定辣椒辣度大小。辣椒素合成酶(CS)被认为是调控辣椒素合成过程关键酶,此研究根据Genbank已经报道的辣椒素合成酶csy1基因序列设计引物,通过RT-PCR法从黄灯笼椒中克隆了一片段csy-h。序列分析表明,csy-h长750bp,与数据库报道的csy1基因同源性高达98%以上,蛋白质同源性达100%。表达证实,csy-h在辣椒果实胎座组织表达,且随果实发育表达量先增加后下降。研究CS活性和辣椒素含量发现,随着果实发育,胎座组织CS活性和果实辣椒素、二氢辣椒素含量均呈先上升后下降趋势,前者最高峰值出现在花后35天,后者峰值出现在花后42天。上述结果暗示,csy1基因表达量决定CS活性,后者决定辣椒素和二氢辣椒素的含量。

斯氏副柔线虫免疫相关基因CSY原核表达载体的构建及生物信息学分析

采用RT-PCR克隆斯氏副柔线虫CSY基因的CDS区,限制性内切酶对目的片段与pET30a（＋）原核表达载体进行双酶切,构建重组表达载体,利用生物信息学软件对该基因理化性质、结构特点进行分析。结果显示：CSY基因全长774bp,编码255个氨基酸,蛋白质理论大小值为29 240,理论等电点为7.53,蛋白质不稳定指数为40.09;跨膜结构和信号肽分析表明CSY蛋白无跨膜区,无信号肽区域。结果表明：成功构建了pET-30a（＋）-CSY重组表达载体;生物信息学分析表明CSY蛋白是一种抗原性较高的亲水性蛋白,可能有7个B细胞抗原表位和8个T细胞抗原表位,有望用于斯氏副柔线虫的免疫诊断抗原和疫苗候选抗原。