沙眼衣原体CT703蛋白原核表达及免疫原性鉴定

目的构建沙眼衣原体CT703原核表达质粒pGEX/CT703,在大肠杆菌BL21中表达CT703蛋白,并鉴定其免疫原性。方法从沙眼衣原体(chlamydia trachomatis,CT)L2血清型基因组中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增出全长CT703基因,亚克隆到原核表达载体pGEX中。重组质粒经酶切和测序鉴定后,转化到E.coli BL21感受态细胞中,IPTG诱导融合蛋白表达。融合蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,ELISA和Western blot实验检测CT703蛋白的免疫原性及免疫反应性。结果经酶切和测序鉴定,成功构建了原核重组表达质粒pGEX/CT703,IPTG诱导后,表达出相对分子量81kD的融合蛋白,Western blot检测免疫小鼠血清能与CT703蛋白特异性结合,ELISA检测免疫小鼠的血清效价为1:32000。结论 CT703蛋白在大肠杆菌BL21中能有效表达,并具有较好的免疫原性。

冰片提取物对沙眼衣原体感染Hela细胞CT703及CT259表达的影响

目的探讨冰片提取物对沙眼衣原体感染Hela细胞CT703及CT259表达的影响。方法建立沙眼衣原体感染Hela细胞模型,将被感染后的Hela细胞放入A、B两培养瓶中培养,其中A培养瓶培养基中加入冰片提取物0.3 g,而B培养瓶只是加入等量的培养基,采用RT-PCR及Western印迹法检测选取培养6、12、24 h后Hela细胞中CT703及CT259基因及蛋白表达水平。结果 A培养瓶加入冰片提取物后,被感染的Hela细胞CT703、CT259 m RNA表达水平随着培养时间的延长而逐渐降低(P<0.05);B培养瓶中被沙眼衣原体感染的Hela细胞CT703、CT259 m RNA表达水平随着培养时间的延长未出现明显变化(P>0.05)。A培养瓶加入冰片提取物后,被感染的Hela细胞CT703、CT259蛋白表达水平随着培养时间的延长而逐渐降低(P<0.05);B培养瓶中被沙眼衣原体感染的Hela细胞CT703、CT259蛋白表达水平随着培养时间的延长未出现明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。结论被沙眼衣原体感染的Hela细胞中的CT703及CT259基因及蛋白表达均处于高水平,冰片提取物能够明显抑制Hela细胞中CT703及CT259基因及蛋白表达,临床能够用于沙眼衣原体感染的治疗。

沙眼衣原体基因CT703在HeLa细胞中的表达

本文旨在探讨沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)L2血清型感染HeLa细胞后,在急性感染和持续感染状态下基因CT703mRNA表达水平的变化。透射电子显微镜下确定Ct急性感染和持续感染模型的建立;姬姆萨染色显示,细胞内包涵体体积增大且出现异常增大的网状体;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测显示,持续感染状态下Ct基因CT703mRNA表达水平显著低于急性感染状态,推测这可能是Ct在细胞内持续感染的形成机制之一。