用于生产L－苯丙氨酸的基因工程菌CTB2的研究

本文对用于生产Ｌ－苯丙氨酸的基因工程菌ＣＴＢ２的培养条件、催化苯丙酮酸生成Ｌ－苯丙氨酸的反应条件及其稳定性进行了研究。当苯丙酮酸钠盐浓度为２％，Ｌ－天冬氨酸浓度为５％，５－磷酸吡哆醛浓度为１００ｕｍｏｌ／Ｌ，溴化十六烷基三甲铵（ＣＴＡＢ）浓度为０．０３％，菌浓度为０．０２ｇ／ｍｌ，ｐＨ７．５，３０℃时，反应１小时，ＣＴＢ２菌催化苯丙酮酸转化为Ｌ－苯丙氨酸的转化率为８１％，生成Ｌ－苯丙氨酸的速度为１４．４ｇ／Ｌ．ｈ。

用于生产L－苯丙氨酸的基因工程菌的构建

本文报道用含ｔｙｒＢ基因（在大肠杆菌中编码芳香族氨基酸转氨酶）的质粒ｐＫＢ７转化不同的突主菌，筛选出ＣＴＢ２菌（ｐＫＢ７转化ＪＭ１０７得到）表达的芳香族氨基酸转氨酶活力最高。进一步研究证明ＣＴＢ２菌在菌浓度为２０ｍｇ／ｍｌ，温度３０℃，反就６０分钟．能催化苯丙酮酸加氨生成大量的Ｌ－苯内氮酸，而没有付产物酪氨酸生戊。以从ＣＴＢ２菌中提取纯化出的质粒为模板，经ＰＣＲ扩增反应可以得到约长１．２ｋｂ的ｔｙｒＢ基因片段，ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳实验表明ＣＴＢ２菌可溶性蛋白在分子量约４００００，有一条明显加深的蛋白区带，这与理论估算的芳香族氨基酸转氨酶的分子量４３０００基本一致。而ＪＭ１０７和含ｐＫＫ２３３－２空质粒的ＪＭ１０７在该位点的区带则没有加深，该加深区带的蛋白含量占到总溶性蛋白的２０％左右。

聚乙烯醇固定化基因工程菌CTB_2的研究

本文报道用聚乙烯醇（ＰＶＡ）为介质固定化基因工程菌ＣＴＢ＿２的研究。ＰＶＡ是一种新型固定化载体，研究结果表明：ＰＶＡ包埋的固定化细胞酶活力回收率为８９％。固定化细胞的最佳反应温度为３５℃，最适ｐＨ为８．０。固定化细胞酶的半衰期为１１批次。

表达芳香族氨基酸转氨酶基因工程菌的细胞固定化初步研究

表达芳香族氨基酸转氨酶基因工程菌的细胞固定化初步研究史燕东，吴梧桐，张玉彬，周艳，黄晓风（中国药科大学生物技术中心，南京２１０００９）关键词卡拉胶；聚丙烯酰胺凝胶；明胶－戊二醛；固定化细胞；芳香族氨基酸转氨酶；ＣＴＢ２ｐＫＢ７重组质粒由大肠杆菌ｔｙｒ...