CtBP1 SUMO化修饰的分子机制研究

目的在体外重组表达、纯化CtBP1发生SUMO化修饰时参与反应的各个蛋白:CtBP1(底物)、SUMO1(SUMO蛋白)、Ubc9(E2结合酶)和PC2(E3连接酶),体外组装CtBP1 SUMO化修饰复合体CtBP1-SUMO1-Ubc9-PC2,通过结构解析捕捉CtBP1发生SUMO化修饰的中间状态,阐明CtBP1 SUMO化修饰的分子机制。方法通过pRSFDuet-1载体构建人源CtBP1、SUMO1、Ubc9、PC2表达质粒,系统表达纯化各蛋白组分,并通过分子筛检测并优化各个蛋白的状态,以及CtBP1-SUMO1-Ubc9-PC2复合体的形成,通过单颗粒冷冻电镜解析复合体结构。结果通过原核表达系统成功表达并纯化获得了参与CtBP1 SUMO化反应复合体中的各个蛋白CtBP1、SUMO1、Ubc9与PC2,获得了CtBP1 SUMO化修饰复合体,通过负染和冷冻电镜的样品优化初步获得了CtBP1 SUMO化修饰复合体的冷冻电镜结构。结论成功获得了CtBP1 SUMO化反应中间状态CtBP1-SUMO1-Ubc9-PC2复合体蛋白以及初步的冷冻电镜结构,为阐明CtBP1发生SUMO化修饰的分子机制奠定了重要基础。

CtBP2在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的:研究羧基末端结合蛋白2(C-terminal binding protein 2,CtBP2)在食管鳞状细胞癌组织中的表达情况及其与食管癌发生发展的关系。方法:Western blot法检测8对食管鳞状细胞癌新鲜冰冻组织、免疫组化法检测90例食管鳞状细胞癌石蜡切片组织中CtBP2表达情况,结合临床病理和随访资料分析CtBP2表达与患者临床病理参数及总生存率的关系。结果:两法检测结果均显示CtBP2食管鳞状细胞癌组织中的表达明显高于对应的癌旁组织,且CtBP2的表达水平与食管癌的组织学分级(P=0.002)、浸润深度(P=0.032)相关,而与年龄、性别等参数无相关性。Kaplan-Meier分析结果显示,CtBP2高表达组患者的总体生存率明显低于CtBP2低表达组患者。结论:CtBP2在食管鳞状细胞癌组织中表达显著上调,提示其可能与食管鳞状细胞癌的发生发展相关。

体外分化Th17细胞IL-17f,ctBP和Gfi1的表达

目的检测小鼠Th17细胞诱导分化模型中IL-17f,ctBP和Gfi1的表达情况并探讨其临床意义。方法提取小鼠脾淋巴细胞,采用免疫磁珠纯化CD4+CD62L+T细胞后,空白对照组用RPMI 1640培养,Th17分化组用anti-CD3ε,anti-CD28,anti-IFN-γ,anti-IL-4抗体及IL-6,TGF-β1和IL-23等细胞因子培育,诱导原始T细胞向Th17细胞分化。两组细胞分别培养72 h后,采用Realtime-PCR检测IL-17f,ctBP,Gfi1 mRNA的表达情况。结果 Th17分化组细胞经相关抗体及细胞因子刺激诱导分化后,其IL-17f mRNA表达明显增高(分化前为1,分化后达194.011721),但ctBPmRNA,Gfi1 mRNA表达均明显低于空白对照组,以上差异均有统计学意义(P均<0.01),对照组ctBPmRNA分化前为1,Th17分化后为0.45375958,Gfi1 mRNA表达在对照组分化前为1,Th17分化后为0.00430432。结论 ctBP和Gfi1在Th17分化组中表达显著下调,但上述两种转录辅抑制因子是否参与了Th17细胞的分化调控值得进一步研究。

卵巢癌患者组织中lncRNA NEAT1和CTBP2表达水平及其与临床病理特征的关系

目的探讨卵巢癌患者组织中长链非编码RNA(lncRNA)NEAT1和羧基末端结合蛋白2(CTBP2)表达水平及其与临床病理特征的关系。方法采集2013年1月至2016年1月收治的60例卵巢癌患者的癌组织及其配对的癌旁组织。采用实时荧光定量PCR方法检测lncRNA NEAT1和CTBP2在癌组织及癌旁组织的表达,并分析二者表达与卵巢癌患者临床病理特征及预后的关系。结果 lncRNA NEAT1和CTBP2在卵巢癌组织中的表达量明显高于癌旁组织(P<0.05);lncRNA NEAT1和CTBP2表达与年龄、组织学类型、肿瘤直径均无相关性(P>0.05);与FIGO分期、肿瘤分级、淋巴结转移密切相关(P<0.01);随着癌组织中lncRNA NEAT1表达水平升高,CTBP2表达呈明显升高趋势,lncRNA NEAT1与CTBP2表达呈显著正相关(r=0.562,P=0.001);lncRNA NEAT1高表达组预后2年存活率为55.50%,lncRNA NEAT1低表达组预后2年存活率为70.00%,lncRNA NEAT1高表达组存活率显著低于低表达组存活率,两组比较差异有统计学意义(χ~2=5.00,P=0.025);CTBP2高表达组预后2年存活率为51.70%,CTBP2低表达组预后2年存活率为68.30%,CTBP2高表达组存活率显著低于低表达组存活率,两组比较差异有统计学意义(χ~2=6.106,P=0.013)。结论 lncRNA NEAT1和CTBP2在卵巢癌患者组织中高表达,两者具有相关性,且与FIGO分期、肿瘤分级、淋巴结转移以及预后密切相关,可作为卵巢癌的早期诊断标记与治疗靶点。

SOX2和CTBP1相互作用对非小细胞肺癌转移的意义

目的探讨SOX2和CTBP1异常表达在非小细胞肺癌(NSCLC)转移中的作用机制。方法 Western blot检测新鲜NSCLC组织及相应的癌旁组织中SOX2和CTBP1蛋白表达;免疫沉淀法分析SOX2和CTBP1在非小细胞肺癌细胞和组织中有无相互作用;用免疫组织化学染色法(IHC)检测114例NSCLC石蜡标本中SOX2和CTBP1蛋白表达;通过转染质粒分析SOX2-CTBP1相互作用的调节机制及其对非小细胞肺癌转移的影响。结果 SOX2和CTBP1的表达水平在肺癌组织中要明显高于癌旁组织(P<0.05);SOX2-CTBP1能形成复合物,SOX2、CTBP1在NSCLC转移组中的表达水平明显高于非转移组的表达水平(P<0.05)。CTBP1的高表达与肿瘤分期、组织分化程度﹑SOX2表达、Ki-67表达相关(P<0.05)。在细胞水平,干扰CTBP1表达可下调SOX2及其下游靶基因Snail的表达,从而使H1299细胞体外迁移能力受到抑制。结论 SOX2和CTBP1的异常表达可能与NSCLC发生、发展有关,并且SOX2-CTBP1相互作用可能促进了NSCLC的侵袭转移。

新疆哈萨克族及汉族食管鳞状细胞癌组织中CtBP1、CyclinD1的表达及意义

目的探讨新疆哈萨克族及汉族食管鳞状细胞癌组织中CtBP1与CyclinD1蛋白的表达情况及其与临床病理参数的关系。方法应用免疫组化法检测125例食管鳞状细胞癌组织及其癌旁正常组织中CtBP1、Cyclin D1的表达。结果(1)哈萨克族及汉族食管鳞状细胞癌均多见于中老年人,食管鳞状细胞癌好发于中下端。(2)CyclinDl阳性染色细胞主要分布于肿瘤组织细胞核中,CyclinD1在食管鳞状细胞癌组织的阳性表达率(50.4%)显著高于癌旁正常组织的阳性表达率(20%)(P<0.01);而CtBP1在癌旁正常鳞状上皮的阳性表达率(88%)高于食管鳞状细胞癌组织的阳性表达率(66.4%),差异有统计学意义(P<0.01)。(3)哈萨克族食管鳞状细胞癌组织中CyclinDl阳性表达率(65%)高于汉族食管鳞状细胞癌组织的阳性表达率(36.9%),差异有统计学意义(P=0.02);(4)在哈萨克族食管鳞状细胞癌组织中,肿瘤直径≥3 cm和<3 cm者CtBPl的表达差异有统计学意义(P=0.037),同时在不同肿物类型中CtBP1的差异有统计学意义(P=0.02);在汉族食管鳞状细胞癌组织中,CtBP1的阳性表达在不同性别、不同年龄组、肿瘤部位、肿瘤大小、大体类型、浸润深度、分化程度、淋巴结转移、血管侵犯、神经侵犯等临床指标差异均无统计学意义(P>0.05)。CtBP1和CyclinD1在食管鳞癌组织的表达呈正相关。结论Cyclin D1、CtBP1可能在哈萨克族食管鳞状细胞癌的发展中发挥着重要作用,二者联合检测可能对哈萨克族与汉族食管鳞状细胞癌的诊治具有指导意义。

CtBP2异常表达对前列腺癌PC3细胞增殖效应影响的研究

目的:探讨CtBP2在前列腺癌中的表达情况,并明确其异常表达对前列腺癌PC3细胞增殖效应的影响。方法:采用免疫组化、qPCR及Western blot检测CtBP2的表达情况,采用细胞计数法、单克隆集落形成实验及MTT法检测细胞的增殖能力。结果:在前列腺癌组织中CtBP2蛋白高表达率为97.5%(156/160),表达水平较良性前列腺增生组织显著升高(P<0.05);细胞计数及MTT实验结果表明CtBP2 Silencer组较Vector control组及Parent control组,其增殖能力降低分别为70%及75%(P<0.05);单克隆集落形成实验结果显示Blank control组、Vector control组和Silencer组PC3细胞培养12 d后可见克隆数分别为(136±11)、(128±12)和(56±9)(P<0.05),克隆面积为(342±22)mm^2、(322±23)mm^2和(122±16)mm^2(P<0.05)。结论:CtBP2在前列腺癌中高表达,而减低其表达水平可显著抑制前列腺癌细胞增殖能力。

lncRNA CTBP1-AS2靶向miR-205-5p影响髓核细胞凋亡及炎症反应的分子机制研究

目的:探讨lncRNA CTBP1-AS2对IL-1β诱导的大鼠髓核细胞凋亡及炎症反应的影响及可能作用机制。方法:采用IL-1β诱导大鼠髓核细胞建立细胞损伤模型,随机分为:对照组、模型组、si-NC+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+模型组、miR-NC+模型组、miR-205-5p+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miR-NC+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miR-205-5p+模型组;qRT-PCR检测lncRNA CTBP1-AS2、miR-205-5p表达;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA检测TNF-α、IL-6水平;双荧光素酶报告实验检测lncRNA CTBP1-AS2与miR-205-5p的靶向关系;Western blot检测Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组lncRNA CTBP1-AS2表达、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-6水平及细胞凋亡率均明显升高,miR-205-5p表达降低(P<0.05);与si-NC+模型组比较,si-lncRNA CTBP1-AS2+模型组细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-6水平明显降低(P<0.05);与miR-NC+模型组比较,miR-205-5p+模型组细胞凋亡率、TNF-α、IL-6、Cleavedcaspase-3、Bax蛋白水平明显降低(P<0.05);lncRNA CTBP1-AS2可负调控miR-205-5p表达;与si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miRNC+模型组比较,si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miR-205-5p+模型组细胞凋亡率、TNF-α、IL-6、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白水平均明显升高(P<0.05)。结论:干扰lncRNA CTBP1-AS2表达可通过促进miR-205-5p表达抑制细胞凋亡及炎症反应,从而减轻IL-1β诱导的大鼠髓核细胞损伤。

CtBP1在上皮性卵巢癌组织中表达及意义

目的探讨CtBP1在上皮性卵巢癌组织中表达及其与临床病理相关因素之间的关系。方法采用Western blot检测5例正常卵巢组织组、10例卵巢良性肿瘤组织及50例上皮性卵巢癌组织中CtBP1蛋白的表达变化,SPSS统计软件分析它们与临床病理参数之间的关系及其相关性。结果卵巢癌组织中CtBP1阳性表达显著高于正常卵巢及卵巢良性肿瘤组织(P<0.05);CtBP1表达水平与卵巢癌手术病理分期明显相关(P<0.05)。结论上皮性卵巢癌组织CtBP1的过表达与卵巢癌的发生发展密切相关,其有可能成为辅助上皮性卵巢癌组织诊断的重要辅助性指标之一。

食管癌组织中CtBP2与P16^(INK4A)的表达及其相关性分析

目的:探讨Ct BP2与P16INK4A在食管癌组织中的表达,并且分析两者之间的相关性。方法:使用免疫组化法(PV二步法)对我院90例食管癌患者组织中Ct BP2与P16INK4A的表达进行检测,并使用统计软件对两者的相关性进行分析。结果:在不同分期中,Ⅰ期和Ⅱ期患者食管癌组织中的P16INK4A阳性率为55.77%,Ⅲ期以上为18.42%,差异较为显著(=7.176,P<0.05);在淋巴结转移中,CtBP2阴性和阳性的差异比较大(=10.986,P<0.01);P16INK4A与Ct BP2呈现典型的负相关关系,r=-0.417,P<0.01。结论:Ct BP2可以通过抑制细胞周期抑制因子P16INK4A来实现细胞增殖,两者对于细胞的调控是从相反的两个方向进行的。

CtBP2对人胶质瘤细胞增殖、侵袭和上皮-间质转化的影响

目的:探讨CtBP2对胶质瘤细胞增殖、侵袭和EMT的影响。方法:将体外培养的恶性胶质瘤细胞系(U87MG、LN229)和人正常星形胶质细胞(Astrocyte)分为转染组、对照序列组和空白组,分别转染后6小时,更换培养基。48小时后收集细胞进行Western blot、CCK-8及Transwell侵袭测定。结果:CtBP2在胶质瘤细胞中高表达;在胶质瘤中高表达的CtBP2促进胶质瘤细胞增殖,且促进其侵袭、转移;高表达的CtBP2导致了EMT的诱导,抑制了E-cadherin的表达,促进了Vimentin的表达。结论:在胶质瘤细胞中高表达的CtBP2不仅促进胶质瘤细胞增殖、侵袭并且导致了EMT的诱导。

GMA诱导16HBE恶性转化细胞中LncRNA CTBP1-AS1的表达及意义

目的探讨LncRNA CTBP1-AS1在甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)诱导的16HBE恶性转化细胞中的表达水平及意义。方法收获经8μg/m L GMA诱导的第30代16HBE恶性细胞及同代龄DMSO对照组细胞,应用高通量LncRNA芯片比较两组样本表达谱差异。通过差异倍数、邻近编码基因信息分析等策略筛选出16HBE恶性转化细胞LncRNA CTBP1-AS1及其最可能的蛋白质编码基因CTBP1,采用全基因组表达谱芯片和实时荧光定量PCR(qPCR)验证LncRNA CTBP1-AS1和CTBP1 mRNA的相对表达量。结果LncRNA芯片结果显示,与同代龄DMSO对照组相比,GMA诱导的16HBE恶性转化细胞中CTBP1-AS1上调2.20倍,CTBP1 mRNA上调1.26倍;qPCR结果显示,与同代龄DMSO对照组(26.74±0.23)×10^-5相比,GMA诱导的16HBE恶性转化细胞(91.70±0.70)×10^-5中LncRNA CTBP1-AS1表达明显上调(P<0.05),并与LncRNA芯片结果一致。结论GMA可以诱导16HBE细胞LncRNA CTBP1-AS1表达上调,LncRNA CTBP1-AS1可作为GMA诱导的16HBE恶性转化细胞中相关特异分子标志物。

沉默CtBP1基因逆转人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR^(+/+))的多药耐药性

目的:探讨短发夹式RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰羧基末端结合蛋白1(C-terminal-binding proteins 1,CtBP1)基因表达是否可以逆转多药耐药基因1(multidrug resistant gene 1,MDR1)介导的人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR+/+)的多药耐药性。方法:采用脂质体转染法将特异性的shRNA1和shRNA2及非特异性的shRNAHK质粒转染入人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR+/+)中,RT-PCR法检测各组细胞MDR1基因表达水平,Western印迹法检测各组细胞P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达,MTT法测定各组细胞对多柔比星的敏感性变化。结果:RT-PCR结果显示,shRNA1组和shRNA2组细胞中MDR1基因被抑制,基因表达抑制率约50%;Western印迹结果显示,shRNA1组和shRNA2组细胞P-gp蛋白的表达水平显著降低;MTT检测发现,shRNA转染48和72h时shRNA1组和shRNA2组细胞对多柔比星的敏感性增加(P<0.01)。结论:沉默CtBP1基因可抑制人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR+/+)中MDR1基因和P-gp蛋白的表达,降低细胞的耐药性。

CtBP1基因shRNA真核表达载体的构建及其干扰效果的初步鉴定

目的：构建C-末端结合蛋白-1（CtBP1）基因RNA干扰（RNAi）的真核表达载体,转染人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1（ADR＋/＋）,初步鉴定其干扰效果。方法：以人CtBP1基因为靶基因,以pGenesil-1质粒为载体,根据GenBank数据库提供的CtBP1基因核苷酸序列,选择设计两条siRNA干扰序列,将带9个碱基茎环结构的干扰序列插入带有绿色荧光蛋白（EGFP）基因、卡那霉素（Kanr）抗性基因及U6启动子的真核表达载体pGenesil-1中,构建针对CtBP1基因的shRNA真核表达载体,转化大肠杆菌DH5α菌株,提取质粒,进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析。确认载体构建成功后,用脂质体LipofectamineTM2000将重组质粒瞬时转染人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1（ADR＋/＋）,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,计数转染细胞数,计算转染效率,RT-PCR法检测载体对CtBP1基因的表达抑制效果。结果：构建针对CtBP1基因的pGenesil-1-CtBP1小发夹RNA（pGenesil-1-CtBP1-shRNA）,经限制性内切酶酶切、PCR和DNA测序证实与设计完全一致;在荧光显微镜下观察到B-MD-C1（ADR＋/＋）细胞表达绿色荧光蛋白（EGFP）,证实重组质粒己转染入细胞,转染效率达到60%-70%;RT-PCR结果显示B-MD-C1（ADR＋/＋）细胞中CtBP1基因被特异抑制,基因表达抑制率达40%以上,与转染试剂对照组、空白对照组和阴性序列对照组间的差异均具有统计学意义（P均〈0.05）。结论：成功构建CtBP1基因的shRNA表达载体,可以有效抑制B-MD-C1（ADR＋/＋）细胞上CtBP1基因表达。为进一步研究CtBP1基因功能进而逆转肿瘤的多药耐药奠定基础。

非小细胞肺癌组织CtBP1和P16蛋白的表达及意义

目的探讨CtBP1和P16蛋白在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及其与NSCLC发生、发展的关系。方法采用免疫组化方法分别检测66例肺癌组织及30例癌旁组织中CtBP1和P16蛋白表达,分析其与NSCLC临床病理学参数之间的关系。结果肺癌组织CtBP1和P16蛋白阳性表达率分别为91.0%和47.0%,P16蛋白在癌旁组织中的阳性表达率高于肺癌组织（χ^2=9.196,P〈0.05）,而两者CtBP1蛋白的表达差异无显著性（P=0.662）。肺癌组织CtBP1蛋白与P16蛋白的表达呈负相关性（r=-0.392,P〈0.05）。P16蛋白表达与肺癌的临床分期、有否淋巴结转移和肿瘤分化程度有关（χ2=5.079~9.333,P〈0.05）,而与病理类型无关（P〉0.05）;CtBP1蛋白表达与上述临床病理学参数均无关（P〉0.05）。结论 P16表达缺失与NSCLC的发生、发展密切相关;联合检测CtBP1和P16可作为判定NSCLC恶性程度及评估其侵袭性、转移性的重要方法。

CtBP1在神经胶质瘤组织中表达及意义的研究

目的研究人脑神经胶质瘤组织中CtBP1蛋白的表达,旨在了解其与人脑神经胶质瘤恶性生物学行为之间的关系,并探讨其在人脑胶质瘤中的作用及其临床意义。方法采用免疫组织化学测定50例人脑神经胶质瘤手术切除标本及6例癫痫患者手术切除的正常脑组织标本中CtBP1的表达水平变化。结果 CtBP1蛋白的表达随着人脑胶质瘤级别的升高而逐渐升高,而在正常脑组织中表达水平极低;正常脑组织组、低级别人脑胶质瘤组及高级别组之间表达的差异有明显统计学意义(P<0.05);CtBP1蛋白的表达水平与人脑胶质瘤的病理级别之间呈现正相关(P<0.05)。结论 CtBP1蛋白的高表达可以反映人神经脑胶质瘤的恶性生物学行为,在人脑胶质瘤的发生过程中起着重要作用,它可能是脑胶质瘤抗凋亡、恶性增殖的一个关键性的调控因子。

shRNA沉默CtBP2基因对前列腺癌细胞的增殖作用

目的探讨RNA干扰技术沉默羧基末端结合蛋白(CtBP)2基因表达对前列腺癌PC3细胞增殖能力的影响。方法实验分为空白对照组、转染空质粒组、转染shRNA组。设计并合成针对CtBP2的3条特异性短发卡RNA(shRNA)模板,构建CtBP2-shRNA重组质粒,转染PC3细胞。通过RT-PCR检测CtBP2 mRNA的表达水平;采用Western blot法检测CtBP2蛋白表达的水平,运用MTT法检测沉默CtBP2对PC3细胞体外增殖的抑制作用。结果将CtBP2-shRNA转染前列腺癌PC3细胞后,CtBP2 mRNA以及蛋白的表达水平均明显下降。沉默CtBP2表达后,MTT结果显示转染shRNA组的PC3细胞较空白对照组、转染空质粒组细胞增殖能力明显减弱,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 CtBP2-shRNA可抑制CtBP2在前列腺癌细胞中的表达并抑制肿瘤细胞生长,提示CtBP2可作为前列腺癌基因治疗的一个新靶点。

CtBP1、E-cadherin蛋白在胆管细胞癌中的表达及临床意义

目的对比羧基末端集合蛋白1(CtBP1)与E-钙黏蛋白(E-Cadherin)在胆管细胞癌组织以及正常的癌旁组织中的表达情况,分析其临床意义。方法收集2014年1月至2019年1月平舆县人民医院接受胆管细胞癌治疗并行切除手术的60例患者的癌组织和癌旁正常组织标本,采用免疫组织化学染色法检测组织中CtBP1和E-Cadherin的表达情况,并分析二者与胆管细胞癌临床病理特征的关系和表达的相关性。结果胆管细胞癌组织CtBP1的阳性率显著高于癌旁正常组织阳性率(P<0.05),E-Cadherin的阳性率显著低于癌旁正常组织阳性率(P<0.05)。胆管细胞癌组织中CtBP1的表达与癌症的分化程度有关(P<0.05),E-Cadherin的表达与癌症分化程度及淋巴结的转移均有关(P<0.05)。胆管细胞癌组织CtBP1和E-Cadherin的表达呈负相关性(P<0.05)。结论CtBP1和E-Cadherin在胆管细胞癌组织中表达异常,二者可能存在调控关系,其联合检测可以为胆管细胞癌的临床诊断提供参考价值。

木犀草素调控CTBP1-AS2/miR-493-5p对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞损伤的影响

目的探讨木犀草素对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞(hRECs)损伤的影响,分析其保护机制是否与调控长链非编码RNA(lncRNA)C-末端结合蛋白-1反义RNA2(CTBP1-AS2)和miR-493-5p表达有关。方法用30 mmol/L葡萄糖处理hRECs 48 h建立细胞损伤模型。将hRECs分为正常糖(NG)组、高糖组(HG)、甘露醇组(MA)、HG+木犀草素低剂量组、HG+木犀草素中剂量组、HG+木犀草素高剂量组。为探讨木犀草素是否调控CTBP1-AS2/miR-493-5p影响高糖诱导的hRECs损伤,将hRECs分为HG+pcDNA组、HG+pcDNA-CTBP1-AS2组、HG+木犀草素+si-CTBP1-AS2组。实时定量PCR检测hRECs中CTBP1-AS2和miR-493-5p表达水平;流式细胞术检测hRECs凋亡率;试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。荧光素酶报告实验确定CTBP1-AS2和miR-493-5p靶向关系。结果与NG组比较,HG组细胞凋亡率、MDA含量、miR-493-5p表达量显著升高,SOD活性、CTBP1-AS2表达量显著降低(均P<0.05)。与HG组比较,HG+木犀草素低剂量组、HG+木犀草素中剂量组、HG+木犀草素高剂量组细胞凋亡率、MDA含量、miR-493-5p表达量显著降低,SOD活性、CTBP1-AS2表达量显著升高(均P<0.05)。与HG+pcDNA组比较,HG+pcDNA-CTBP1-AS2组细胞凋亡率、MDA含量、miR-493-5p表达量显著降低,SOD活性显著升高(均P<0.05)。miR-493-5p是CTBP1-AS2的靶基因。与HG+木犀草素高剂量组比较,HG+木犀草素+si-CTBP1-AS2组细胞凋亡率、MDA含量、miR-493-5p表达量显著升高,SOD活性显著降低(均P<0.05)。结论木犀草素可减轻高糖诱导的hRECs凋亡和氧化应激损伤,其机制可能是通过上调CTBP1-AS2/miR-493-5p途径实现的。

CtBP在肿瘤发生发展中作用的研究进展

羧基末端结合蛋白(C-terminal Binding Protein,CtBP)是在多种肿瘤组织中过表达的致癌共转录因子,参与早期发育、细胞周期调控和转化。以往研究证明CtBP与肿瘤的发生发展有密切关系,能够介导阻遏肿瘤抑制基因的转录,促进上皮细胞间充质,并且可以作为凋亡拮抗剂。CtBP蛋白的功能缺失会导致转录失衡,是肿瘤研究的重要方面。因此,开发靶向CtBP的辅助抑制因子治疗可能成为治疗多种肿瘤的有效方法。本篇综述主要介绍了CtBP的结构、在肿瘤进展中的作用以及靶向CtBP的抑制剂的研究进展。