MiR-99a调控CTDSPL影响儿童急性髓性白血病细胞增殖及凋亡

目的探讨miR-99a对儿童急性髓性白血病(AML)的影响及其作用机制,为寻找新的靶向治疗方法提供理论依据。方法用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测57例AMLL患儿及10例对照患儿的骨髓标本中miR-99a的表达;在细胞系水平通过对miR-99a过表达或抑制表达,利用MTT细胞增殖及双染凋亡试验研究miR-99a对AML细胞增殖、凋亡的影响。用在线软件预测miR-99a可能的靶基因,并通过双荧光报告及蛋白印迹技术对其靶基因进行验证。结果miR-99a在AML患儿初诊时高表达,在完全缓解(CR)时低表达;miR-99a促进AML细胞的增殖,抑制其凋亡;采用双荧光报告及蛋白印迹技术在细胞系中验证出CTDSPL可能是miR-99a的靶基因;并通过蛋白印迹技术在AML患儿标本中验证出miR-99a抑制CTDSPL蛋白的表达。结论miR-99a通过靶向负调控CTDSPL基因影响AML细胞增殖及凋亡,靶向抑制miR-99a表达可能成为治疗AML的一个新策略。

miR-181a-5p靶向CTDSPL基因调节TGF-β信号通路在胃肠道间质瘤发生、发展中的作用

目的探讨miR-181a-5p靶向羧基末端区域小磷酸化酶样蛋白(carboxy-terminal domainsmall phosphatase-like,CTDSPL)基因介导TGF-β信号通路对胃肠道间质瘤发生发展的影响。方法选择2016年1月至2019年12月于商丘市第一人民医院行手术治疗的胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumor,GIST)患者作为研究对象,术中取患者的肿瘤组织和癌旁正常组织。分析患者的临床病理资料;采用定量实时聚合酶联反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测CTDSPL基因mRNA和miR-181a-5p的表达量;采用western blot法检测CTDSPL基因及TGF-β信号通路相关因子的蛋白表达水平。将人胃肠道间质瘤细胞系(GIST-T1)分别转染miR-181a-5p mimic、miR-181a-5p inhibitor和CTDSPL过表达载体。MTT检测各组细胞增殖活力,Transwell检测各组细胞侵袭,流式细胞术检测各组细胞凋亡。结果相对于癌旁组织,GIST患者的肿瘤组织中miR-181a-5p及TGF-β信号通路相关因子表达增强,CTDSPL表达被抑制。肿瘤大小、浸润深度和改良NIH分级与GIST肿瘤组织CTDSPL基因mRNA表达量有关(P均<0.05)。相对于Blank组,敲除miR-181a-5p或过表达CTDSPL能抑制癌细胞增殖活力和侵袭,诱导细胞凋亡,而miR-181a-5p mimic对GIST-T1细胞的作用能被CTDSPL过表达挽救。结论miR-181a-5p可通过下调CTDSPL基因表达水平,激活TGF-β信号通路促进GIST的发生、发展。

过表达长链非编码RNA CTC-459F4.3抑制肝癌细胞的增殖和迁移

目的 观察长链非编码RNA CTC-459F4.3在肝癌组织和肝癌细胞中的表达,探索过表达CTC-459F4.3对肝癌细胞增殖和迁移的影响及作用机制。方法 qPCR检测CTC-459F4.3在28例肝癌组织和肝癌细胞株(Huh7、SMMC-7721、MHCC-97H和BEL-7404)中的表达。选择CTC-459F4.3表达最低的肝癌细胞株,分为阴性对照组(转染阴性质粒)和CTC-459F4.3组(转染CTC-459F4.3质粒)。MTT法和Transwell迁移实验分别检测过表达CTC-459F4.3对细胞增殖能力和迁移能力的影响。免疫组化检测肝癌组织中羧基末端区域小磷酸化酶样蛋白(CTDSPL)的表达。qPCR和Western blot分别检测过表达CTC-459F4.3对CTDSPL基因表达的影响。结果 与癌旁组织相比,CTC-459F4.3在肝癌组织呈低表达( P <0.01)。与人正常肝细胞相比,CTC-459F4.3在肝癌细胞株呈低表达( P <0.05),CTC-459F4.3在SMMC-7721细胞中的表达最低( P <0.01)。与阴性对照组相比,CTC-459F4.3组SMMC-7721细胞的增殖能力明显下降( P <0.05),细胞迁移能力明显降低( P <0.05)。与癌旁组织相比,CTDSPL蛋白在肝癌组织中的表达明显降低。与阴性对照组相比,CTC-459F4.3组SMMC-7721细胞中CTC-459F4.3表达明显增加( P <0.01)。结论 CTC-459F4.3在肝癌组织和肝癌细胞中呈低表达,过表达CTC-459F4.3可显著抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖能力和迁移能力,其作用机制可能是上调CTDSPL基因的表达。