cAMP差异调控CD39^(+)、CTLA-4^(+)、PD-1^(+)T细胞亚群产生

目的:分析CD39、CTLA-4及PD-1在T细胞上的表达及表达模型,探讨环磷酸腺苷(cAMP)对其表达的影响,解析调控其表达的关键通路。方法:通过腺苷酸环化酶(ACs)激活剂、磷酸二酯酶(PDE)抑制剂、蛋白激酶A(PKA)抑制剂以及PKA-CREB抑制剂等小分子化合物体外刺激猕猴外周血单个核细胞,流式细胞术检测CD39、CTLA-4、PD-1阳性(CD39^(+)、CTLA-4^(+)、PD-1^(+))T细胞的比率变化,分析其表达模式,对比小分子对表达/共表达的阳性细胞比率的影响,明确表达模式及调控表达的分子与通路。结果:正常猕猴的CD4^(+)T和CD8^(+)T细胞中CD39^(+)、CTLA-4^(+)和PD-1^(+)细胞比率较低,且阳性细胞主要表达其中一种分子;增加胞内cAMP浓度,不影响CD39^(+)T细胞比率,显著增加CTLA-4^(+)T细胞比率,降低PD-1^(+)CD8^(+)T细胞比率,涉及细胞群为CTLA-4和PD-1单表达的细胞群;抑制PKA活性可降低PDE广谱抑制剂3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)对CTLA-4表达的增效作用,但不影响PD-1的表达;交换蛋白激动剂不影响CTLA-4的表达,但下调PD-1^(+)CD4^(+)/CD8^(+)T细胞比率;PDE4B选择性抑制剂对CTLA-4的上调作用与IBMX相似,而PDE3和PDE5A选择性抑制剂对PD-1表达的调控与IBMX相似。结论:CD39、CTLA-4和PD-1在T细胞上有不同表达模型,但受cAMP水平不同的调控,且参与表达调控的cAMP下游信号通路不同。

外周血PD-1、CTLA-4、T-reg、pDC与鼻咽癌患者临床特征及疗效的相关性

目的:探讨初治鼻咽癌患者治疗前外周血PD-1/CTL(%)、CTLA-4/CTL(%)、T-reg(%)、pDC与患者临床特征及即刻疗效的关系,以及以上指标在鼻咽癌患者及健康人群中的表达差异。方法:收集112例初治鼻咽癌患者治疗前临床资料及淋巴细胞亚群和树突细胞亚群数据,进行外周血PD-1/CTL(%)、CTLA-4/CTL(%)、T-reg(%)、pDC与鼻咽癌患者临床特征及即刻疗效的相关性分析,从112例鼻咽癌患者中随机选取30例患者作为病例组,年龄、性别匹配的30例同期体检健康者作为对照组,分析两组外周血PD-1/CTL(%)、CTLA-4/CTL(%)、T-reg(%)、pDC表达差异。结果:112例初治鼻咽癌患者中,年龄≥50岁组与年龄<50岁组相比,外周血PD-1/CTL(%)更高。CTLA-4/CTL(%)与T分期、N分期、TNM分期呈负相关,CTLA-4/CT(%)越高,疗效越好。T-reg(%)与N分期呈正相关,T-reg(%)与M分期存在“S”型曲线关系。pDC与N分期、TNM分期呈负相关。病例组与对照组外周血PD-1/CTL(%)、T-reg(%)差异存在统计学意义,病例组与对照组外周血CTLA-4/CTL(%)差异不存在统计学意义。结论:外周血CTLA-4/CT(%)越高,鼻咽癌T分期、N分期、TNM分期越早,外周血CTLA-4/CT(%)越高,疗效越好。外周血T-reg(%)越高,N分期越晚。当外周血T-reg(%)<20%时,鼻咽癌可能未发生远处转移,当外周血T-reg(%)为20%~50%时,外周血T-reg(%)表达越高,发生远处转移的可能越大,当外周血T-reg(%)>50%时,鼻咽癌已经远处转移的可能性大。外周血pDC越高,N分期、TNM分期越早。外周血以上指标可动态观察,有望成为预测鼻咽癌患者疗效及预后的生物标志物。

PD-1/CTLA-4双抗治疗妇科恶性肿瘤的疗效和安全性观察

目的分析妇科恶性肿瘤患者应用PD-1/CTLA-4双抗治疗后的血常规、影像学等相关数据,评价该药物在妇科恶性肿瘤患者治疗中的有效性及安全性。方法选取22例妇科恶性肿瘤患者,均接受程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)/靶向细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)双抗治疗加或不加化疗或靶向治疗,观察近期疗效、不良反应发生率。结果CR患者4例,占18.2%,PR 2例,占9.1%,SD 6例,占27.3%,总有效率27.3%(CR+PR),临床获益率54.5%(CR+PR+SD)。PD 10例,占45.5%。随访至2023年10月31日,存活患者14例,占63.6%,死亡患者8例,占36.4%。治疗相关不良事件(TRAEs)发生率95.5%(21/22),其中重度不良反应发生率为50.0%(11/22):血红蛋白降低发生率9.1%(2/22),白细胞减少发生率27.3%(6/22),中性粒细胞减少发生率13.6%(3/22),ALT及AST升高、血小板减低、过敏反应发生率均为4.5%(1/22)。与免疫治疗相关的重度不良反应发生率为:重度血红蛋白降低、重度血小板减低、重度肝功能损伤均为4.5%(1/22)。结论应用PD-1/CTLA-4双抗治疗晚期/复发妇科恶性肿瘤患者临床获益率较高,不良反应发生率低,具有较高的推广价值。

基于CD80/CTLA⁃4途径探究IL⁃7对脓毒症T淋巴细胞功能的机制研究

目的基于CD80/CTLA⁃4途径探究IL⁃7对脓毒症T淋巴细胞功能的影响。方法选取我院2021年1月1日~2023年6月6日收治的104例脓毒症患者,分离患者外周血中T淋巴细胞并纯化,刺激培养T淋巴细胞并分为3组,即对照组、IL⁃7组和CYAL⁃4组。流式细胞仪分别检测T淋巴细胞凋亡率和增殖代数;ELISA检测淋巴细胞IL⁃7、IFN⁃γ、TNF⁃α水平;流式细胞仪检测淋巴细胞表面CD80表达;免疫荧光法检测T淋巴细胞表面CTAL⁃4表达。结果与对照组相比,IL⁃7组和CTAL⁃4组T淋巴细胞凋亡率明显降低(分别为45.17±4.02、48.06±4.08),T淋巴细胞增殖代数(分别为6.01±1.04、5.92±1.02)、T淋巴细胞中IL⁃7(分别为115.46±9.07、112.39±9.01)、IFN⁃γ(分别为21.46±2.15、20.07±2.12)、TNF⁃α(分别为347.15±2.26、340.87±12.08)水平明显增加(P<0.05);但IL⁃7组T淋巴细胞凋亡率、增殖代数、IL⁃7、IFN⁃γ、TNF⁃α水平和CTAL⁃4组相比差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,IL⁃7组和CTAL⁃4组T淋巴细胞中CD80(分别为6.28±0.87、6.31±0.89)和CTAL⁃4阳性率(分别为3.68±0.57、3.65±0.55)明显降低(P<0.05);IL⁃7组T淋巴细胞中CD80和CTAL⁃4阳性率和CTAL⁃4组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论IL⁃7可抑制脓毒症患者T淋巴细胞凋亡,促进T淋巴细胞增殖,促进T淋巴细胞中IL⁃7、IFN⁃γ、TNF⁃α水平,其作用机制可能与抑制CD80/CTLA⁃4途径有关。

CTLA-4、STAT3在宫颈鳞状上皮内病变及宫颈癌组织中的表达及其意义

目的分析细胞毒性T淋巴细胞抗原4(CTLA-4)、信号传导及转录激活因子3(STAT3)在宫颈鳞状上皮内病变(SIL)与宫颈癌(CC)组织中的表达及其意义。方法将42例慢性宫颈炎患者、61例SIL患者与65例CC患者分别纳入对照组、SIL组、CC组,以专用人乳头瘤病毒(HPV)标本采样刷采集所有患者的宫颈脱落细胞,采用免疫组化法检测所有患者的CTLA-4、STAT3表达;同时,收集所有患者的一般资料,分析CTLA-4、STAT3阳性表达与患者临床病理特征的关系。结果CC组CTLA-4、STAT3阳性表达率高于SIL组与对照组,且SIL组CTLA-4、STAT3阳性表达率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);CTLA-4、STAT3表达与SIL患者的病理分级有关,与CC患者的国际妇产科联盟(FIGO)分期有关(P<0.05);CTLA-4、STAT3表达与SIL患者年龄无关,CTLA-4、STAT3表达与CC患者年龄、淋巴结转移、病理类型、宫颈肌壁浸润深度无关(P>0.05)。结论CTLA-4、STAT3在SIL、CC患者的机体内呈异常表达,随着疾病等级与分期的增加,两者阳性表达率不断提高。

三陰乳腺癌PD-L1(SP142)與CTLA-4、PTEN表達的關係研究

目的探討三陰乳腺癌PD-L1(SP142)與CTLA-4、PTEN表達的關係和意義。方法收集鏡湖醫院2008年1月~2018年6月間病理科136例乳腺癌標本,按乳腺癌分子分型分為三陰乳腺癌(TNBC)、管腔A型、管腔B型及HER2型乳腺癌,採用免疫組化檢測各型乳腺癌PD-L1(SP142)、CTLA-4和PTEN表達情況,並分析它們之間的關係。結果136例乳腺癌中,32.4%的病例PD-L1(SP142)陽性,其中48%(24/50)TNBC、11.9%(5/42)管腔A型、20%(3/15)管腔B型和41.4%(12/29)HER2型PD-L1(SP142)陽性;43.4%的病例CTLA-4陽性,其中52.0%(26/50)TNBC、31.0%(13/42)管腔A型、33.3%(5/15)管腔B型和50.9%(15/29)HER2型CTLA-4陽性;28.0%的病例PTEN陽性,其中52.0%(26/50)TNBC、31.0%(13/42)管腔A型、33.3%(5/15)管腔B型和50.9%(15/29)HER2型PTEN陽性。TNBC的PD-L1(SP142)表達與CTLA-4表達呈正相關(Spearman=0.409,P<0.05),與PTEN表達呈負相關(Spearman=-0.318,P<0.05)。結論TNBCPD-L1(SP142)與CTLA-4表達的正相關關係,提示聯合免疫治療可能使TNBC患者獲益,而TNBCPD-L1(SP142)與PTEN表達的負相關關係,提示TNBC同時遭受免疫逃逸和基因突變的雙重打擊,因此適合免疫治療和靶向PTEN聯合治療。

CTLA4Ig基因转染猪皮异种移植的体外实验研究

目的 探索重组腺病毒载体 (Recombinantadenovirus ,rAdv)介导CTLA4Ig基因转染猪皮异种移植免疫耐受的分子机制。方法 构建CTLA4Ig重组腺病毒载体 ,转染猪树突状细胞 (DendriticCell,DC) ,以猪表皮细胞匀浆液为刺激原 ,观察DC递呈猪表皮抗原刺激人T细胞增殖、活化及信号转导的影响 ;同时 ,以CTLA4Ig rAdv转染小鼠DC细胞 ,观察该DC膜表面分子CD40、CD80表达。结果 CTLA4Ig转染DC能显著抑制人外周血T淋巴细胞增殖能力 (P <0 .0 1)和T细胞肌醇磷脂信号系统转导活性 ,IL 2分泌亦受到明显抑制 (P <0 .0 5 ) ;转染CTLA4Ig的小鼠DC膜表面分子CD80表达降低 (P <0 .0 5 )。结论 腺病毒介导CTLA4Ig基因转染猪皮能诱导人外周血T淋巴细胞免疫耐受。

共刺激阻断剂CTLA4Ig基因重组腺病毒的构建与鉴定

目的 构建共刺激阻断剂CTLA4Ig基因重组的腺病毒载体。 方法 将CTLA4IgcDNA插入腺病毒表达质粒 ;将重组质粒与腺病毒基因组质粒共转染 2 93细胞 ,产生重组腺病毒 ;采用dot ELISA和PCR法筛选并获得CTLA4Ig阳性表达的重组腺病毒。结果 同源重组后 ,以dot ELISA法筛选到 2个 2 93细胞的CTLA4Ig蛋白阳性表达空斑 ,PCR证实为含CTLA4Ig基因和腺病毒基因的重组体AdvCTLA4Ig。结论 本研究构建了CTLA4Ig基因重组的复制缺陷型腺病毒AdvCTLA4Ig 。

CTLA4Ig基因表达对鼠皮肤移植免疫抑制作用的研究

目的 探讨静脉注射CTLA4Ig腺病毒后在大鼠体内的表达和对同种异体移植皮肤存活的影响 ,以及该载体应用的安全性 ,为该基因治疗方法在抑制器官移植排斥反应的临床应用奠定基础。方法 供体SD大鼠皮肤移植前 1周 ,用腺病毒作载体将CTLA4Ig导入Wistar大鼠体内 ,用蛋白质斑点印迹实验检测血清中CTLA4Ig的表达 ,用腺病毒荧光抗体检测腺病毒在脏器的分布。同时还观测了各脏器的病理改变及移植物生存时间。结果 CTLA4Ig腺病毒在肝、脾、心、肺、肾均有明显分布 ,但实质细胞均未见严重损伤性改变。CTLA4Ig基因能在血清中的表达高峰时间一般在 7d左右 ,移植皮肤的生存显著长于对照组 (P <0 .0 5 )。结论 从静脉注射导入的CTLA4Ig基因能在大鼠体内表达并对同种移植的排斥反应有明显的抑制作用。

中国人CTLA-4基因的PCR-SSCP和DNA序列分析

ＣＴＬＡ４是主要表达于成熟Ｔ细胞表面的蛋白分子，与Ｔ细胞参与的免疫应答负调控有关，目前有关ＣＴＬＡ４的分子生物学资料多为外国提供，为了掌握中国人ＣＴＬＡ４基因的第一手资料，我们对５０例中国人（其中２５例为正常人，２５例为类风湿性关节炎患者）的ＣＴＬＡ４基因Ｖ区进行了ＰＣＲ扩增，并对其中４例正常人进行了ＤＮＡ序列分析，结果显示中国人ＣＴＬＡ４Ｖ区的ＤＮＡ序列与国外报道有两个位点存在差异，其中第５４位密码子处中国人为ＡＴＧ（甲硫氨酸），第１１０位密码子处为ＡＣＣ（苏氨酸），进一步对正常人和类风湿性关节炎病人进行ＰＣＲＳＳＣＰ分析，结果显示在所分析的人群中不存在多态性，表明ＣＴＬＡ４分子具有高度保守性。

CTLA4-lg融合蛋白基因的表达及其生物学功能的初步研究

目的获得CTLA4全长基因并在真核表达系统中表达。方法通过RT PCR方法 ,从MT2细胞系克隆CT LA4全长基因 ;经引物重叠和半巢式PCR改造 ,获得含抑瘤素M信号肽的CTLA4胞外段DNA ,然后克隆至真核表达载体pIg ,转染COS和CHO K细胞表达。结果获得了CTLA4全长基因 ,序列分析表明 ,该序列与GenBank数据库中的序列一致。在COS和CHO K细胞培养上清中有CT LA4 Ig的表达 ,该产物能抑制淋巴细胞转化。结论真核表达体系表达了有生物学活性的CTLA4 Ig。

CTLA-4、PD-1和PD-L1在小细胞肺癌外周血中的分布及临床意义

背景与目的本研究旨在探索细胞毒性T淋巴细胞相关抗原(cytotoxic T lymphocyte associated antigen-4,CTLA-4)、程序坏死因子(programmed death 1,PD-1)和程序坏死因子配体(programmed death ligand 1,PD-L1)在小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)患者外周血中的分布情况,探索其免疫作用机制并评估其作为生物标志物的临床价值。方法招募290例SCLC患者及60例健康志愿者,收集治疗前和治疗2^(nd)周期末SCLC患者EDTA抗凝血2 mL。应用流式细胞仪检测CTLA-4、PD-1和PD-L1在外周血CD3、CD4、CD8及CD25的分布,分析其与临床病理特征的相关性;采用细胞免疫化学法和流式细胞法检测PD-L1在SCLC细胞系H446中的表达。结果 SCLC患者外周血中CTLA-4^+细胞和PD-1^+细胞水平分别为(1.56±1.24)%和(8.07±3.97)%、CTLA-4在CD3细胞和CD4细胞中的表达水平无明显差异,分别为(4.87±5.18)%和(3.85±2.60)%,均低于PD-1在CD3^+或CD4^+细胞中的表达(26.63±9.04)%和(20.79±9.41)%,与健康对照组相比,SCLC中CD4^+CD25^+CTLA-4^+细胞水平明显升高(1.91±1.27)%vs(7.09±5.09)%,P<0.001;PD-1^+(CD8^+)细胞表达水平明显降低,分别为(22.56±4.21)%vs(11.47±5.85)%,P<0.001。CD4^+CD25^+CTLA-4^+细胞或CD8^+PD-1^+细胞水平与患者的年龄、性别、吸烟状况、临床分期以及是否转移等因素无关(P>0.05)。化疗两周期末CD4^+CD25^+CTLA-4^+和CD8^+PD-1^+细胞的水平对比化疗前明显下降,分别为(5.11±2.60)%vs(6.94±4.91)%;(8.74±3.39)%vs(11.48±5.91)%,P值均<0.000,1,但与无疾病进展生存和总生存无显著相关性。PD-L1高表达于SCLC细胞系H446中并定位在细胞膜和细胞浆,但在外周血中未见表达。结论本研究首次证实SCLC外周血中CTLA4高表达于调节性T细胞中,而PD-1低表达于效应性T细胞,该结果为揭示SCLC免疫监测点免疫逃逸机制提供了理论依据,可能作为一种新的无创性且可实时监测的生物标志物。

自身免疫性甲状腺病CTLA-4基因外显子1A/G^(49)多态性研究

目的探讨细胞毒性 T淋巴细胞相关抗原 4(CTL A- 4)基因外显子 1的 49位点 A/G多态性与自身免疫性甲状腺病 (AITDs)的相关性。方法采用多聚酶链反应限制性片段长度多态性 (PCR- RFL P)技术分析 12 2例自身免疫甲状腺病患者 ,其中 Graves’病 (GD) 87例 ,桥本甲状腺炎 (HT) 35例 ,84例健康对照的 CTL A- 4基因外显子 1的 49位点基因型。采用 EL ISA技术检测 AITDs患者甲状腺功能 ,间接免疫荧光法检测甲状腺球蛋白抗体 (TGAb)和甲状腺抗过氧化物酶抗体 (TPO Ab)。结果 AITDs患者 CTL A- 4/G49等位基因频率显著高于对照组 (P<0 .0 0 0 1,其中 GD组 P<0 .0 0 0 1,HT组 P<0 .0 1) ;GD、HT组按性别分层分析后发现 CTL A- 4/G49等位基因在不同性别的分布均无显著性差异。结论 CTL A- 4基因外显子 1G49等位基因与 AITDs显著相关 ;GD、HT患者

CTLA4 Ig在诱导小鼠心脏移植免疫耐受中的作用

目的 通过建立小鼠心脏移植模型 ,探讨CTLA4Ig在免疫抑制和诱导免疫耐受中的作用。方法 建立小鼠心脏移植模型 ,供体分别为DBA/2和 6 15新生鼠心脏 ,受体为BALB/c小鼠 ,移植后分别予以CTLA4Ig 0 .1、1、5mg·kg-1·d-1,治疗 1周 ,观察不同剂量CTLA4Ig对新生鼠移植心脏存活时间的影响 ;BALB/c小鼠首次移植 2周后再次移植DBA/2或 6 15新生鼠心脏 ,观察CTLA4Ig对再次移植心脏存活的影响。结果 与对照组相比 ,CTLA4Ig 0 .1mg·kg-1·d组 ,移植心脏的存活时间不能延长 ,CTLA4Ig 1mg·kg-1·d和 5mg·kg-1·d-1组能显著延长心脏的存活时间 ,但两组间差异不显著 (P >0 .0 5 )。再次移植 6 15心脏各组 ,移植心脏的存活时间均无显著延长 ,而再次移植DBA/2新生鼠心脏 ,CTLA4Ig 1mg·kg-1·d-1和 5mg·kg-1·d-1组 ,其移植心脏的存活时间仍然能显著延长 (P <0 .0 1)。结论 CTLA4Ig能延长新生鼠心脏移植存活时间 。

gp96与免疫相关基因CTLA-4、CD8在肺癌组织芯片中的表达及意义

背景与目的近年来研究显示gp96在机体发挥抗肿瘤的特异性细胞毒免疫应答中发挥重要作用。本研究旨在探讨热休克蛋白gp96与免疫相关基因CTLA-4、CD8在不同进展阶段肺癌中的表达及生物学意义。方法应用免疫组化Envision法及组织芯片技术检测89例原发肺癌、12例癌前病变、10例正常肺组织及12例淋巴结转移性肺癌中gp96、CTLA-4、CD8的表达,并分析其与肺癌临床病理指标的关系。结果①原发性肺癌组gp96的阳性率高于正常组与癌前病变组(P<0.05)。原发性肺癌组和癌前病变组CTLA-4的阳性率均高于正常组(P<0.05)。CD8在原发性肺癌组的阳性率高于正常组(P<0.05)。CD8阳性淋巴细胞高表达组gp96阳性率低于低表达组(P<0.05)。②gp96表达与患者的性别、分化程度和临床分期有关(P<0.05),而与年龄、肉眼类型、组织学分型和有无淋巴结转移无关(P>0.05)。CTLA-4表达与年龄、分化程度有关(P<0.05),而与性别、肉眼类型、组织学分型、临床分期和有无淋巴结转移无关(P>0.05)。CD8表达与临床分期有关(P<0.05),而与性别、年龄、肉眼类型、组织学分型、分化程度和有无淋巴结转移无关(P>0.05)。在鳞癌和小细胞癌中,gp96、CTLA-4的表达阳性率均高于CD8的表达(P<0.05)。③Gp96与CTLA-4表达呈正相关(P<0.05),与CD8表达呈负相关(P<0.05),CD8与CTLA-4表达呈负相关(P<0.05)。结论在肺癌中gp96的表达与CTLA-4、CD8密切相关,提示三者在肺癌的发生发展中起重要作用,可作为评估患者病情和估计预后的参考指标。

CTLA4Ig基因修饰的BMSCs支持CD34^+细胞扩增的实验研究

目的 通过腺病毒介导CTLA4Ig在骨髓基质细胞 (BMSCs)中的表达 ,探讨CTLA4Ig基因修饰的BMSCs支持CD34+ 细胞扩增的功能变化 ,为该基因修饰的BMSCs联合造血干细胞移植 (HSCT) ,达到预防移植物抗宿主病 (GVHD )和纠正预处理损伤的造血微环境 (HIM)积累实验依据。方法 以CTLA4Ig 重组腺病毒按感染复数 (Multiplicityofinfection ,MOI) 5 0转染BMSCs ,以RT PCR检测目的基因转录 ;免疫磁珠 (MACS)阳性选择分选骨髓CD34+ 细胞 ,流式细胞仪检测其纯度 ;通过骨髓基质细胞支持CD34+ 扩增的细胞总数及集落形成细胞数 (CFC)的变化 ,比较转染和未转染BMSCs在支持CD34+ 细胞扩增方面的差异。结果 RT PCR在转染组及转染后传两代BMSCs中检测到CTLA4Ig基因的转录 ;通过观察扩增后细胞总数及CFC数的变化 ,发现CTLA4Ig基因转染组与未转染组BMSCs支持CD34+ 细胞扩增的能力也无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 CTLA4Ig 重组腺病毒有效介导目的基因对BMSCs的转染 ,在MOI为 5

腺病毒介导CTLA4Ig基因在体外培养细胞中的表达

目的 鉴定腺病毒介导免疫调节基因CTLA4Ig在体外培养细胞中的表达能力和细胞毒性。 方法 以肾小管上皮细胞(PK 15 )、血管内皮细胞 (ECV 3 0 4)为靶细胞 ,观察感染强度为 10 0、2 0 0、40 0时CTLA4Ig重组腺病毒转染靶细胞后不同时相细胞存活百分率 ;以免疫组化以及Westernblot分别检测CTLA4Ig在细胞以及上清中的表达。 结果 转染后 2d、4d ,转染组两种细胞存活百分率与对照组相比无显著差异 ;转染后 2 4hCTLA4Ig在PK 15和ECV 3 0 4中的阳性表达率分别为 93 7%和 90 2 % ;Westernblot检测到两种细胞上清中均有CTLA4Ig表达。 结论 重组腺病毒对非包装靶细胞毒性很小 ,能够介导CTLA4Ig基因对靶细胞的高效转染 ,并使其表达分泌型CTLA4Ig ,具备了以基因治疗诱导免疫耐受的潜能 。

CTLA_4Ig抑制T细胞增殖的体外研究

目的观察 CTL A4Ig在人外周血 T细胞增殖反应中的作用。方法植物血凝素 (PHA )、脂多糖 (L PS)、金葡菌肠毒素 B(SEB)刺激 T细胞增殖 ,在加入或未加入 CTL A4Ig情况下 ,观察细胞形态并检测 3H- Td R掺入量。结果 CTL A4Ig对PHA、L PS的抑制作用呈剂量依赖关系 ;而 CTL A4Ig浓度只有高于 5μg/ m L时 ,对 SEB才有抑制作用 ,且可完全抑制。结论CTL A4Ig对 PHA、L PS、SEB刺激下的 T细胞增殖反应有明显的抑制作用 ,但反应模式不一致。

CTLA4Ig诱导免疫耐受的体外研究

目的 观察CTLA4Ig在诱导人外周血T细胞免疫耐受中的作用。方法以结核菌素刺激人外周血淋巴细胞,观察不同剂量CTLA4Ig对外周血淋巴细胞增殖反应的影响;观察CTLA4Ig和CsA(环孢霉素A)对再次结核菌素刺激和非相关第三者APC细胞刺激淋巴细胞增殖反应的影响,IL-2的变化,以及外源性IL-2对免疫耐受诱导的影响。结果CT-LA4Ig抑制淋巴细胞增殖呈剂量依赖关系,20μg/ml时抑制作用最强;CTLA4Ig能诱导免疫耐受并与CsA有协同作用;外源性IL-2能抑制免疫耐受的诱导。结论CTLA4Ig能抑制淋巴细胞的增殖和IL-2的分泌释放,CTLA4Ig和CsA联合应用能更彻底抑制淋巴细胞增殖和IL-2的分泌释放,并诱导免疫耐受;外源性IL-2能逆转免疫耐受。

PD-1与CTLA-4在泡球蚴感染小鼠肝脏中的动态变化研究

目的研究负性协同刺激分子PD-1和CTLA-4表达水平在泡球蚴持续性感染小鼠肝脏中的变化特点,探讨其在泡球蚴感染中的免疫作用。方法将90只雌性Balb/c小鼠随机分为实验组和对照组,实验组通过腹腔接种原头蚴悬液制备泡球蚴感染小鼠模型,对照组腹腔注射等量生理盐水。分别在接种2、8、30、90、180和330 d收集标本。用HE染色观察肝脏病理变化;免疫组化法和实时荧光定量PCR检测PD-1和CTLA-4在肝脏的表达及分布。结果肝脏泡球蚴持续性感染中,PD-1和CTLA-4在感染早期少量表达;感染中晚期表达水平均明显升高,而且均维持一定的高水平。结论 PD-1与CTLA-4表达的增加可能促进泡球蚴感染病情的发展,参与泡球蚴的免疫逃避并利于泡球蚴在机体内的长期寄生。