ZEA、DON及其联合染毒对CTLL-2细胞因子分泌的影响

为研究镰刀菌毒素玉米赤霉烯酮(ZEA)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)及其联合作用对动物免疫功能的影响,试验以CTLL-2细胞(细胞毒性T淋巴细胞株)为材料,用不同浓度的ZEA(0、5、10、20μg/mL)、DON(0、0.5、1、2μg/mL)及联合(空白组、5μg/mL ZEA、0.5μg/mL DON、5μg/mL ZEA+0.5μg/mL DON)处理CTLL-2细胞48h,采用ELISA法检测了细胞内及培养上清液中颗粒酶B(GZMB)、穿孔素(PFP)、干扰素γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)等细胞因子的含量。结果显示,ZEA、DON能够降低CTLL-2细胞胞内及培养上清液中PFP、GZMB、IFN-γ的浓度,增加TNF-α浓度,染毒组与对照组相比均有显著或极显著差异(P<0.05;P<0.01),且均呈剂量效应关系;ZEA、DON联合染毒表现为加性效应。结果表明,ZEA、DON及其联合作用可通过影响免疫细胞因子的分泌,降低免疫细胞杀伤活力,间接影响机体体液免疫和细胞免疫的负调节,从而导致动物机体免疫机能下降。

ZEA与DON联合染毒对CTLL-2细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase3等表达的影响

为了探讨玉米赤霉烯酮(ZEA)与脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)联合作用对免疫系统毒性影响及其毒理机制,试验以T淋巴细胞株(CTLL-2)为材料,在利用CCK-8试验确定ZEA、DON对CTLL-2细胞联合染毒浓度的基础上,研究了ZEA与DON联合染毒对CTLL-2细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3等表达的影响,试验设对照组、ZEA染毒组(5μg/m L ZEA)、DON染毒组(0.5μg/m L DON)、ZEA+DON联合染毒组(5μg/m L ZEA+0.5μg/m L DON),染毒时间为48 h,用流式细胞术检测细胞的凋亡率,Western-blot检测Bax、Bcl-2和Caspase级联反应相关蛋白的表达情况。结果表明:与对照组相比,各染毒组CTLL-2细胞的凋亡率均极显著升高(P<0.01);各染毒组细胞凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2比值和Cleaved Cspase-3、Cleaved Caspase-8、Cleaved Caspase-9等蛋白的表达量均较对照组显著升高(P<0.05或P<0.01);联合染毒组呈现协同效应。说明ZEA与DON联合染毒在诱导免疫细胞凋亡方面发挥协同效应,它们共同存在可以发挥更强的免疫抑制效应;ZEA与DON联合染毒诱导CTLL-2细胞发生凋亡的机制与Bax/Bcl-2上调的线粒体通路密切相关。

使用大鼠因子部分取代IL-2培养CTLL-2细胞

使用大鼠因子部分取代ＩＬ┐２培养ＣＴＬＬ┐２细胞王彦宏王树宽朱平（第四军医大学西京医院临床免疫科西安７１００３３）关键词大鼠因子白细胞介素┐２ＣＴＬＬ－２细胞中图号Ｒ４４６．６ＣＴＬＬ－２细胞是白细胞介素－２（ＩＬ－２）依赖性细胞株，它来自用白血病细...

CTLL-2/MTT法快速测定IL-2基因转移效率的研究

应用包装ＩＬ－２基因的逆转录病毒载体，将ＩＬ－２基因导入小鼠成纤维细胞ＮＩＨ－３Ｔ３和小鼠黑色素瘤细胞Ｂ１６，建立了ＮＩＨ－３Ｔ３／ＩＬ－２－２，ＮＩＨ－３Ｔ３／ＩＬ－２－７和Ｂ１６／ＩＬ－２－４等３个转基因细胞株，应用ＣＴＬＬ－２／ＭＴＴ法快速测定各转基因细胞株分泌上清ＩＬ－２的浓度．转染效率最高的ＮＩＨ－３Ｔ３／ＩＬ－２－７其ＩＬ－２分泌量高达１４２２ｕ／（１０６ｃ·２４ｈ），表明这一基因转移系统能有效地将外源基因导入靶细胞．ＣＴＬＬ－２／ＭＴＴ法能快速、简便、有效地检测ＩＬ－２的表达．

烧伤血清抑制CTLL细胞对白细胞介素-2的应答与血清中游离受体的变化

近年来新发现的淋巴因子中,白细胞介素-2(IL-2)很引起人们的重视。其生物学功能广泛而重要,如诱导淋巴细胞的增殖、分化;增强淋巴细胞的活性;还能诱导淋巴细胞产生干扰素 r等。我们对7名重度烧伤病人,在7个不同时相点,连续检测了在烧伤血清影响下,T 淋巴细胞(本研究用 CTLL-2细胞)对 IL-2的应答,以及烧伤血清中白细胞介素-2受体(IL-2R)的变化,均以正常血清为对照。报告如下。

CTLL_2细胞增殖检测单核/巨噬细胞ADCC效应方法的应用研究

探讨ＣＴＬＬ２细胞增殖检测单核／巨噬细胞ＡＤＣＣ效应方法的应用价值，利用此方法检测比较了健康志愿者外周血单核细胞ＡＤＣＣ效应和非特异杀伤效应，ＬＰＳ刺激单核细胞前后其ＡＤＣＣ效应变化。结果表明检测单核细胞ＡＤＣＣ效应和非特异杀伤效应不存在相关性（Ｐ＞０．０５），活化后单核细胞ＡＤＣＣ效应较活化前明显增强（Ｐ＜０．０１），提示ＣＴＬＬ２细胞增殖检测单核／巨噬细胞ＡＤＣＣ效应方法是特异、灵敏的实验方法，为临床广泛研究单核／巨噬细胞ＡＤＣＣ效应提供一种可靠的检测手段。

人重组C3片段通过IL-2自分泌效应对CTLL-2细胞产生促增殖作用

目的研究补体Ｃ３片段的体外生物学活性及其作用机理，进一步探讨Ｃ３片段与免疫细胞的关联。方法利用重组ＤＮＡ技术表达纯化Ｃ３活性片段（命名为Ｃ３３），观察其对ＩＬ－２依赖性的小鼠杀伤性Ｔ细胞株ＣＴＬＬ－２细胞的促增殖效应，并通过抗体封闭途径和分子杂交技术研究Ｃ３３作用的机理。结果发现Ｃ３３蛋白对ＣＴＬＬ－２细胞具有明显的促增殖作用，并呈剂量依赖关系；这一作用能够部分地被抗小鼠ＣＤ１１ｂ抗体所封闭，能够完全被抗小鼠ＩＬ－２抗体所封闭；分子杂交显示Ｃ３３蛋白能够明显刺激ＣＴＬＬ－２细胞的ＩＬ－２ｍＲＮＡ表达。结论人重组Ｃ３片段Ｃ３３可通过ＩＬ－２的自分泌效应对ＣＴＬＬ细胞产生促增殖作用，补体受体ＣＲ３参与这一作用。

玉米赤霉烯酮诱导CTLL-2细胞凋亡途径的研究

为探讨玉米赤霉烯酮(ZEA)对免疫细胞凋亡途径的影响,以细胞毒性T淋巴细胞株(C TLL-2)为材料,用不同浓度的ZEA(0、0.8、3.2、12.8、25.6 g/mL)处理CTLL-2细胞48 h,流式细胞术检测细胞的凋亡率,Western-blot检测Fasl、Fas、Cleaved-Caspase 9、Cleaved-Caspase 3、Bcl-2和Bax等蛋白的表达情况。结果显示,随着ZEA浓度的增加,CTLL-2细胞的凋亡率呈上升趋势,3.2 g/mL ZEA以上染毒组均较对照组有极显著差异(P<0.01);Bax蛋白的表达呈上升趋势,而Bcl-2蛋白的表达量呈下调趋势,Bax/Bcl-2的比值升高且呈剂量效应关系;Caspase 3蛋白表达量呈下调趋势,3.2 g/mL ZEA以上染毒组均较对照组有极显著差异(P<0.01);各染毒组Cleaved-Caspase 3、Cleaved-Caspase 9、Fasl和Fas蛋白表达量均较对照组极显著升高(P<0.01)。结果表明,玉米赤霉烯酮可以通过线粒体途径和死亡受体途径诱导CTLL-2细胞凋亡,影响动物的免疫机能。

锤头状核酶抑制CTLL-2细胞凋亡而增强其对Yac-1细胞杀伤活性的实验研究

目的 研究抗fas的锤头状核酶对小鼠细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)系CTLL 2细胞fas基因的表达及其介导的细胞凋亡抑制作用 ,探索供者淋巴细胞输注 (DLI)时增强T细胞抗白血病的新途径。方法设计并合成抗fas的锤头状核酶基因 ,将其导入CTLL 2细胞 ,通过RT PCR、Westernblot和流式细胞仪分别检测核酶对CTLL 2细胞fasmRNA和Fas蛋白表达的抑制 ,以MTT法检测CTLL 2细胞与Fas抗体结合后的增殖活性 ,以半胱天冬酶 3(caspase 3)活性检测试剂盒检测细胞caspase 3蛋白酶活性 ,以流式细胞仪检测细胞凋亡 ,以乳酸脱氢酶法检测CTLL 2细胞的体外杀伤活性。结果锤头状核酶基因导入CTLL 2细胞后 ,可使其表面的Fas表达降低达 5 0 % ,细胞经Fas抗体 (JO2 )处理后 ,与空白对照、转染空载体的细胞相比 ,转染核酶的细胞增殖活性增加了 1倍 ,caspase 3活性降低近 5 0 % ,而细胞的凋亡率显著降低 ,只有 37% ,且CTLL 2细胞的体外杀伤活性为对照组的 2倍。结论该核酶具有切割fas基因的良好活性 ,并可抑制Fas介导的CTLL 2细胞凋亡 ,增加该细胞存活率 ,从而增强对Yac 1细胞的杀伤活性。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导CTLL-2细胞凋亡的信号途径研究

为探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对动物免疫功能的影响及其机理,以细胞毒性T淋巴细胞株CTLL-2为材料,用不同浓度的DON(0、0.5、1、2μg/m L)处理CTLL-2细胞48h,流式细胞术检测细胞的凋亡率,免疫印记法检测细胞凋亡相关通路蛋白CleavedCaspase 9、Cleaved-Caspase 3、Fas L、Fas、Cleaved-Caspase8等表达情况;并用流式细胞术检测了DON(1μg/m L)与Fas L中和抗体(10μg/m L)共处理后细胞的凋亡率。结果表明,随着DON浓度的升高,CTLL-2细胞的凋亡率呈上升趋势,染毒组均较对照组有极显著差异(P<0.01);Bax/Bcl-2的比值升高,呈剂量-效应关系;DON促进细胞色素c(Cyt-c)从线粒体中释放到胞浆中,能够上调Cleaved-Caspase 9、Cleaved-Caspase 3的表达,染毒组均较对照组有显著性或极显著差异(P<0.05或P<0.01);Fas L、Fas、Cleaved-Caspase 8蛋白表达量随着DON浓度的升高逐渐增加,染毒组均较对照组有显著性或极显著差异(P<0.05或P<0.01);随着DON浓度的升高,p38 MAPK、JNK、Erk的磷酸化水平也升高,呈剂量-效应关系;与DON处理组相比,Fas L中和抗体与DON共同处理组细胞凋亡率明显下降(P<0.01)。结果表明,DON可以诱导CTLL-2细胞发生凋亡,激活CTLL-2细胞线粒体通路、MAPKs通路,DON通过死亡受体途径诱导CTLL-2细胞凋亡,影响动物的免疫机能。

人PBL及CTLL-2/HIL-4R细胞系对人IL-4增殖应答的特性

本文分析了３０例正常人ＰＲＬ经ＰＨＡ活化的Ｔ细胞对ＩＬ－２及ＩＬ－４的增殖应答特点；及整合有人ＩＬ－４受体ｃＤＮＡ的ＣＴＬＬ－２／ＨＩＬ－４Ｒ细胞系对人ＩＬ－４的特异增殖应答特点。结果表明，正常人经ＰＨＡ活化的ＰＢＬ对ＩＬ－２有良好增殖应答曲线者占９３％，而对ＩＬ－４有良好增殖应答者只占２０％。 ＣＴＬＬ－２／ＨＩＬ－４Ｒ细胞系对人ＩＬ－４呈规律性增殖应答曲线，且应答敏感性高，可测出０．０９ｕ／ｍｌ，可推荐作为测定人ＩＬ－４生物活性的一种准确方法。

MTT比色检测细胞增殖方法的改良及实验影响因素的观察

探讨了改良前后两种MTT比色法的显色机制及区别,并进行了改良方法与未改良方法及同位素掺入方法检测敏感性的比较和改良方法实验影响因素的观察。结果表明①改良前异丙醇只能溶解细胞外部甲,改良后异丙醇不但能溶解细胞周围的甲,而且能将细胞内的MTT代谢物全部溶解。②改良后较改良前的敏感性有了较大的提高,其敏感性检测结果与~3H-TdR检测结果相一致。③改良方法可以测出约3×10~3个CTLL_2细胞和用6×10~3个细胞活化后的PBL。④适当提高MTT浓度能进一步提高检测敏感性及OD值。

对IL-4两种测活方法的比较及MTT法最适条件确定

目的建立一种稳定、灵敏的方法用于检测 IL - 4生物活性。方法比较人外周血 T淋巴细胞与 CTL L - 2 /IL - 4R细胞系对 rh IL - 4的增殖应答特点及 MTT法用于 rh IL - 4生物活性检测过程中的细胞浓度、细胞培养时间、MTT掺入浓度及时间等条件。结果两者均能对 rh IL - 4呈规律性增殖应答。 IL - 4活性测定时 ,人外周血 T淋巴细胞检测最低限为 8U /ml,CTL L - 2 /IL - 4R细胞系为 0 .73U /ml。确定了 MTT法用于 CTL L - 2 /IL - 4R细胞系检测 rh IL - 4生物活性时的最佳条件方案。结论就重复性和应答敏感性来说 ,CTL L - 2 /IL - 4R较之 T淋巴细胞更为优越 ,该细胞系可用于建立一种较灵敏而稳定的 IL -4测活方法。

MTT比色法中五种甲溶解液的比较

ＭＴＴ比色法中五种甲溶解液的比较边兴艳（大连市儿童医院免疫室，大连１１６０１２）陈洁（大连医科大学附属第一医院检验科）关键词四甲基偶氮唑蓝比色法甲溶解度ＭＴＴ（四甲基偶氮唑蓝）比色法〔１〕主要用于检测ＣＴＬＬ细胞（一株小鼠肿瘤特异性Ｔ杀伤细胞）代...

白细胞介素-2检验方法的比较研究

应用白细胞介素-2(IL-2)依赖T细胞株(Cytotoxic T Lymphocyte line)检测 IL-2,~3H-TdR掺入法与四甲基偶氮唑(MTT)比色法的检测效果,两者有一定的一致性。~3H-TdR掺入法重复性较好。在IL-2活性单位的计算方法上,比较了直接作图法、直接回归分析及正概率分布法,并对这些方法进行了讨论。不论用何种方法统计分析,在检测样品 IL-2时用标化的 IL-2作对比是必需要的。

一种高度敏感的改良的IL-1检测方法

采用CTLL-2检测IL-1诱导小鼠胸腺瘤细胞系EL_4产生IL-2活性,建立了一种间接检测IL-1的方法。通过对多种影响因素进行探讨,选择了较适的诱导血清浓度,细胞浓度,诱导时间和转移诱导上清稀释度,从而使检测IL-1的敏感性达10^(-3)～10^(-4)U/ml(2.5～25×10^(-4)Pg/ml,约为小鼠胸腺细胞检测方法的10~2～10~3倍),整个检测流程可在40小时内完成。若用CTLL-2和EL_4细胞同时培养的一步法检测,敏感性约为10^(-1)U/ml,但30小时内可完成检测。此法不受高浓度rHuTNF-α、rHuTNF-β、rHuIL-6干扰,IL-2、ConA、PHA、LPS和SEB对检测系统只有较弱的影响,但A23187可明显地干扰检测系统。因此,本方法可用于基础和临床研究过程中不同来源的IL-1生物学活性检测。

淋巴因子相应靶细胞的小剂量辐射效应

观察了单次小剂量Ｘ射线全身照射后Ｃ５７ＢＬ／６小鼠胸腺细胞ＩＬ－１反应性和脾细胞ＩＬ－２反应性的变化。发现在１００ｍＧｙ以内的小剂量照射后，整个胸腺和脾脏的细胞数趋于增多，胸腺细胞对ＩＬ－１的反应性和牌细胞对ＩＬ－２的反应性趋于增强，体外照射ＩＬ－２依赖株ＣＴＬＬ－２细胞亦出现同样的反应趋势，但统计学处理与对照组比较均无明显差异。

海藻硫酸多糖911对小鼠脾淋巴细胞增殖反应及对细胞产生IL—2作用的影响

本文以~3H—TdR掺入法观察911对小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响并用CTLL细胞检测了其对IL—2的作用。体外实验结果表明,911对小鼠脾淋巴细胞增殖反应有明显的增强作用,以0.5μg/ml的浓度效果最为明显,相对增殖指数RPI可达200％;体内实验则以5mg/kg体重ip,连续7d效果最好,相对增殖指数RPI可达176％;911用药组小鼠IL—2的产生量均高于对照组,以5mg/kg和10mg/kg效果最好。以上实验证明,这一多糖是一种有希望的新免疫调节药物。

铜绿假单胞菌外毒素A的抗原性及其与辅助细胞的关系

目的 研究铜绿假单胞菌外毒素A(PE)的某些抗原性及其与辅助细胞的关系。方法用MTT法观察PE在有无辅助细胞参与条件下对鼠脾淋巴细胞的刺激作用 ,并用鼠细胞毒性T细胞株CTLL进行证实。结果 PE在 0 0 1～ 10 0ng/ml浓度范围能刺激鼠脾淋巴细胞增殖 ,PE的丝裂原作用无需粘附细胞的辅助 ,但粘附细胞及其粘附细胞的PE刺激上清能协同PE对鼠脾淋巴细胞的刺激作用。PE在丝裂原作用范围内能刺激CTLL细胞生长 ,并与IL 2有协同作用。PE在体内能使小鼠脾淋巴细胞自发淋转率增高 ,对ConA刺激的增殖反应增强 ,但对淋巴细胞自发分泌IL 2和ConA诱导IL 2的产生水平无影响。