RNA干扰CTSL表达抑制卵巢癌细胞的侵袭和转移

目的:构建组织蛋白酶L基因(cathepsin L,CTSL)RNAi的真核表达载体,探讨干扰CTSL基因表达对卵巢癌细胞侵袭和转移的影响。方法:设计并合成4对CTSL小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),转染卵巢癌A2780细胞,RT-PCR检测各转染细胞CTSL的表达,筛选沉默效果最好的siRNA序列。设计并合成CTSL-shRNA序列,与psilence4.1-CMV-neo载体连接,构建psilence4.1-CTSL表达载体。psilence4.1-CTSL转染A2780细胞,获得稳定转染克隆A2780-CTSL。RT-PCR和Western blotting验证CTSL基因干扰效果,MTT法和集落形成实验检测A2780细胞的增殖,流式细胞术检测A2780细胞周期,Transwell侵袭小室实验检测A2780细胞体外侵袭和迁移能力。结果:筛选出干扰效果最好的siRNA-CTSL-1202序列,并成功构建相应的CTSL-shRNA表达载体psilence4.1-CTSL。稳定转染psilence4.1-CTSL能沉默A2780细胞中CTSL的表达。沉默CTSL基因后可抑制A2780细胞的侵袭和转移,但不影响A2780细胞的增殖、细胞周期和黏附活性。结论:成功构建CTSL基因siRNA的真核表达载体,RNA干扰CTSL基因表达可抑制卵巢癌细胞的侵袭和转移。

ctsd、ctsl基因的多态性与“雪龙”黑牛胴体性状相关性研究

为了提高雪龙黑牛的胴体性状,进行新品种选育,以组织蛋白酶D、L(Cathepsin D,Cathepsin L)基因为候选基因,利用PCR-RFLP方法对114头雪龙黑牛F1代商品牛进行多态性检测,应用SAS9.2软件采用最小二乘拟合线性模型进行分析,结果表明,ctsd、c581t位点与雪龙黑牛的经济性状无明显的相关性,ctsl基因Xma I位点与雪龙黑牛的三角牛腩厚显著相关,且AB型个体三角牛腩厚与AA和BB型个体三角牛腩厚差异显著。

miR-379-5p靶向CTSL调控肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的分子机制

目的:探讨微小RNA-379-5p(miR-379-5p)通过靶向组织蛋白酶L(CTSL)调控肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的作用机制。方法:选择本院收治的肺癌患者57例,取患者肺癌组织与癌旁组织,应用qRT-PCR法检测miR-379-5p与CTSL mRNA的表达水平;免疫组化法检测CTSL蛋白的表达情况。miR-con(miR-con组)、miR-379-5p mimics(miR-379-5p组)分别转染肺癌NC-H446细胞,miR-379-5p mimics与pcDNA(miR-379-5p+pcDNA组)、miR-379-5p mimics与pcDNA-CTSL(miR-379-5p+pcDNA-CTSL组)分别共转染肺癌NC-H446细胞,MTT检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell迁移与侵袭实验检测细胞迁移与侵袭能力。双荧光素酶报告实验验证miR-379-5p与CTSL之间的靶向关系。Western blot检测CTSL、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、Cleaved caspase-3蛋白的表达。结果:肺癌组织中miR-379-5p的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05),而CTSL mRNA及蛋白阳性率均显著高于癌旁组织(P<0.05);与miR-con组比较,miR-379-5p组细胞增殖、迁移、侵袭能力显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著增加(P<0.05),明显抑制Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达(P<0.05),而促进Cleaved caspase-3蛋白表达(P<0.05);双荧光素酶报告实验证明miR-379-5p可负向调控CTSL表达与活性;CTSL过表达可逆转miR-379-5p过表达对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的调控作用。结论:miR-379-5p过表达通过靶向CTSL而减弱肺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,诱导细胞凋亡。

自噬基因CTSL表达与胶质母细胞瘤患者预后相关

本研究旨在探讨自噬基因CTSL对胶质母细胞瘤(GBM)患者的预后影响。利用癌症基因组图谱(TCGA)、人类自噬数据库(HADB)、中国脑胶质瘤基因组图谱(CGGA)数据库、基因表达谱分析(GEPIA)获取数据信息,通过筛选差异表达基因及单因素和多因素COX分析确定GBM的独立预后危险因素,同时通过基因本体论(GO)、基因组百科全书途径(KEGG)、临床病理相关性、基因集富集分析(GSEA)、自噬基因网络分析CTSL的相关作用机制。结果显示:(1)富集分析显示胶质母细胞瘤中差异自噬基因(ARG)与自噬体的形成、细胞凋亡、血管生成、细胞化疗等相关;(2)GBM中CTSL的mRNA水平明显高于正常组织样本;(3)多因素COX回归分析显示自噬基因CTSL的高表达为GBM预后的独立危险因素,STUPP治疗(术后替莫唑胺[Tmz]同步放化疗+Tmz辅助化疗)为独立保护因素;(4)自噬基因CTSL在非GCIMP(CpG岛甲基化)型、间质型、IDH野生型、1p/19q无缺失型胶质母细胞瘤及化疗后表达量更高。综上所述,本研究分析了自噬基因在GBM中的作用,并表明自噬基因CTSL的过表达预示胶质母细胞瘤患者不良预后,显示自噬基因CTSL有作为有效靶标的潜质。

大白猪群中CTSL基因多态性与生长性状的关联分析

组织蛋白酶L(CTSL)基因属于组织蛋白酶(cathepsin)家族成员之一,该基因在调控肉质嫩度上发挥着重要作用,可以作为猪生长和胴体性状的候选基因。实验采用PCR-RFLP技术在大白猪群体中对CTSL基因第5外显子g.143 C>T单核苷酸多态性位点进行检测,分析该位点与生长及胴体性状的关联性。结果表明:在大白猪群体中共有3种基因型,分别是TT、TC和CC基因型,CC基因型个体达100 kg体重日龄天数显著小于TT基因型个体(P<0.05),但其他性状关联分析结果未达到显著水平。

新型冠状病毒侵染所需宿主基因TMPRSS2、CTSL、PIKFYVE、TPCN2重要功能变异分析

目的研究新型冠状病毒(SARS-CoV-2)侵染所需宿主基因TMPRSS2、CTSL、PIKFYVE、TPCN2的重要功能变异在全世界不同人群间的分布差异。方法使用GTEx数据库,在新型冠状病毒的主要侵染器官肺中分析TMPRSS2、CTSL、PIKFYVE、TPCN2基因的eQTL位点。使用1 k GP(千人基因组计划)数据库,系统分析上述4个基因的错义变异在世界不同人群间的分布差异,并使用PolyPhen-2和SIFT软件预测错义突变导致的氨基酸替代是否影响蛋白功能。结果在肺中发现了4个q值小于0.05的eQTL位点,分别为TMPRSS2基因的rs35074065、CTSL基因的rs2378757、PIKFYVE基因的rs12475932、TPCN2基因的rs930786。TMPRSS2、CTSL、PIKFYVE、TPCN2基因的4个eQTL位点可能与上述4个基因在东亚人群中的较低表达水平有关。在TMPRSS2、CTSL、PIKFYVE、TPCN2基因上分别有10、6、15、30个有害错义变异,大部分变异都是低频变异,其中大多数仅在一个人群中具有特异性。唯一的例外是TPCN2基因的变异位点rs78034812,它在全球的等位基因频率大于1%,在东亚人群中具有最高的等位基因频率且该位点在物种间具有保守性。结论TMPRSS2、CTSL、PIKFYVE、TPCN2基因存在重要功能变异,这些变异的等位基因频率在不同人群间存在差异,可能影响基因的表达和功能,从而影响人群对新型冠状病毒的易感性以及感染后症状的差异。

马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)Pm-CTSL基因的克隆及表达分析

组织蛋白酶L (cathepsin L, CTSL)是无脊椎动物体内非特异性免疫的重要组成部分。为了研究马氏珠母贝CTSL (Pm-CTSL)的功能,本实验利用RACE技术克隆获得了Pm-CTSL基因,并对其结构和组织表达模式进行了分析。结果表明,Pm-CTSL基因c DNA序列全长为1 237 bp,其中开放式阅读框957 bp,5'UTR69 bp,3'UTR 211 bp,共编码氨基酸318个。结构域分析发现Pm-CTSL具有CTSL两个典型的结构域Inhibitor_I29和Pept_C1。Pm-CTSL也具有信号肽、保守序列ERFNVN和GNFD、两个潜在的N-糖基化位点和催化活性位点三联体残基(Cys, His和Asn)。多序列比对结果表明Pm-CTSL与太平洋牡蛎的同源性最高,为42%;系统进化分析发现,Pm-CTSL与虾夷扇贝等贝类聚为一支。实时荧光定量分析发现,Pm-CTSL在肝胰腺中显著高表达(p<0.05),表明Pm-CTSL可能参与马氏珠母贝的免疫应答。本研究为进一步探讨CTSL在马氏珠母贝非特异性免疫应答中的作用提供了基础资料。

组织蛋白酶L基因的RNA干扰真核表达载体的构建

目的:构建组织蛋白酶L(CTSL)基因的RNA干扰真核表达载体。方法:根据GenBank数据库提供的CTSL基因核苷酸序列,设计并化学合成4对双链小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA),瞬时转染卵巢癌细胞系A2780细胞,通过半定量RT-PCR检测各转染细胞CTSL表达筛选一个有效的si RNA序列。设计并合成能表达其小发卡结构RNA(Small hairpin RNAs,shRNA)的DNA序列,并与psilence4.1-CMV-neo质粒定向连接,构建真核表达载体,DNA测序进行鉴定,并通过半定量RT-PCR验证其干扰效果。结果:构建CTSL的RNA干扰真核表达载体psilence4.1-CMV-neo-CTSL,经DNA测序证实与设计完全一致,通过半定量RT-PCR证实其能够沉默A2780细胞的CTSL基因表达。结论:CTSL基因RNA干扰真核细胞表达载体构建成功。

组织蛋白酶L的结构与功能

组织蛋白酶L(cathepsin L,CTSL)是溶酶体半胱氨酸蛋白酶家族的主要成员,具有非常独特的合成和转运方式.CTSL前体酶原的前体肽含有ERF/WNIN模体和GNFD模体.CTSL的空间结构主要由α螺旋构成的L结构域以及由β折叠构成的R结构域组成.大量研究工作表明,CTSL在体内生理和病理过程中,以及在寄生动物中都发挥着极其重要的功能.其生理作用广泛涉及到蛋白质水解、抗原提呈、T细胞分选、细胞凋亡以及胚胎发育等方面.CTSL还与多种类型的肿瘤发生、心血管疾病以及肾病等密切相关.另外,CTSL在寄生动物中也发挥着独特的作用.本文针对CTST的最新研究进展做了简要总结及分析,并指出了相关研究的发展趋势.

越南留学生习得“在”字方所短语的句中位置偏误研究

越南留学生在使用汉语"在"字方所短语时,常常出现句中位置上的偏误。文章采用抽样统计以及问卷调查的方法,对越南留学生习得"在"字方所短语的句中位置偏误作了统计和分析,针对性地提出了两种教学策略:(1)标记理论与"在"字方所短语的偏误教学策略;(2)汉越句法成分对比与"NP+VP+在+方所"结构的偏误教学策略。

山羊组织蛋白酶L基因克隆、序列分析及组织表达研究

试验旨在克隆山羊组织蛋白酶L(cathepsin L,CTSL)基因,并进一步探讨该基因结构与功能的关系,揭示其组织表达规律。本研究以天府肉羊为试验材料,运用同源序列克隆技术,对山羊CTSL基因进行克隆,并对其进行生物信息学分析及组织表达研究。结果表明,山羊CTSL基因编码区(CDS区)长1005bp,共编码334个氨基酸;山羊CTSL氨基酸与绵羊的同源性最高(99.10%),其次是牛(96.71%)、猪(90.12%)、人(76.95%)、大鼠(76.12%)、小鼠(75.82%)、青鳉鱼(66.17%)和斑马鱼(61.42%);经预测山羊CTSL可能含有1个Inhibitor_129结构域和1个Pept_C1结构域;山羊CTSL基因在11个组织中均有表达,但在肺脏和肾脏中的表达量显著高于在心肌、肝脏、脾脏、胸肌、腹肌、腿肌、膈肌、眼肌和比目鱼肌中的表达量(P<0.05)。

基于分子对接技术筛选中药“新冠2号”干预新型冠状病毒肺炎活性成分

目的:通过分子对接技术,筛选“新冠2号”中干预新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019,COVID-19)核心药物及其活性成分。方法:根据处方中药组分,通过ETCM、TCMID、TCMSP数据库收集“新冠2号”所有中药化学小分子;结合相关文献选取SARS-CoV-23L水解酶(Mpro)和组织蛋白酶L(Cathepsin L,CTSL)两种蛋白酶作为靶蛋白,将处理后小分子作为配体与两种处理过的靶蛋白进行分子对接筛选。结果:归纳“新冠2号”所含小分子,收集化合物共1720个,其中连翘酯苷F、厚朴苷B、1,2,3,4,6-五-O-没食子酰-β-d-葡萄糖等13个小分子与靶蛋白有较好亲和力,可能为干预新冠肺炎的活性成分。结论:从“新冠2号”处方中筛选出连翘中连翘酯苷F、半夏中1,2,3,4,6-五-O-没食子酰-β-d-葡萄糖、厚朴中厚朴苷B等13个小分子能与新型冠状病毒靶点结合,符合中医药“多成分-多靶点”学说,为寻找Mpro、CTSL抑制剂分子提供参考。