骨代谢标志物TRACP-5b与CTX-Ⅱ在进展型股骨头坏死患者中的表达及意义

目的探讨骨代谢标志物抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)与Ⅱ型胶原C-末端肽(CTX-Ⅱ)在进展型股骨头坏死患者中的表达及意义。方法选择2015年1月至2016年10月接诊的180例股骨头坏死患者,其中普通股骨头坏死组45例,骨质疏松组45例,进展型股骨头坏死组45例,对照组(普通外伤)45例。以酶联免疫法对4组患者血清中TRACP-5b、CTX-Ⅱ的含量进行测定。结果在进展型股骨头坏死组患者中,TRACP-5b水平明显高于普通股骨头坏死组、对照组[(53.48±3.72)U/L vs.(47.85±1.84)U/L,(53.48±3.72)U/L vs.(45.12±0.65)U/L](P<0.05);骨质疏松患者血清TRACP-5b表达明显高于普通股骨头坏死组、对照组[(51.83±2.05)U/L vs.(47.85±1.84)U/L,(51.83±2.05)U/L vs.(45.12±0.65)U/L](P<0.05);进展型股骨头坏死组患者血清CTX-Ⅱ表达明显高于普通股骨头坏死组、骨质疏松组、对照组[(221.96±8.32)ng/L vs.(181.03±6.35)ng/L,(221.96±8.32)ng/L vs.(179.86±6.51)ng/L,(221.96±8.32)ng/L vs.(177.94±6.60)ng/L](P<0.05)。结论在进展型股骨头坏死患者中,血清TRACP-5b、CTX-Ⅱ水平的表达较高,可通过对其含量的检测预测股骨头坏死的病情进展,以选择合适的治疗方案。

黄芪甲苷对Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞和人软骨细胞共培养体系MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP的调控作用

目的观察黄芪甲苷对Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞和人软骨细胞共培养体系基质金属蛋白酶-7(MMP-7)、Ⅱ型胶原羧基端肽(CTX-Ⅱ)、软骨寡聚基质蛋白(COMP)的调控作用,初步阐释黄芪甲苷治疗骨关节炎的分子作用机制。方法通过β-catenin慢病毒载体转染正常人滑膜细胞,激活其Wnt/β-catenin信号通路。Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞与正常人软骨细胞置于Transwell小室中共培养。倒置显微镜观察Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞对人软骨细胞形态学变化的影响。黄芪甲苷混悬液干预共培养体系,采用Western bolt方法检测黄芪甲苷对滑膜细胞β-catenin蛋白表达的影响;采用ELISA方法检测黄芪甲苷对滑膜细胞、软骨细胞培养上清液MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP表达的影响。结果β-catenin慢病毒载体转染正常人滑膜细胞后成功激活Wnt信号通路并与软骨细胞共培养。随培养时间的延长,软骨细胞生长逐渐受到抑制,软骨细胞胞体边缘与板壁接触处发白,折光度增加,细胞贴壁强度降低。黄芪甲苷干预后,Western blot检测发现滑膜细胞中β-catenin蛋白的表达明显下调(P<0.01);ELISA法检测发现滑膜与软骨细胞上清液中MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP表达与正常对照相比明显升高(P<0.01)。结论滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路的激活可以使软骨细胞生长受到抑制。黄芪甲苷可以降低滑膜细胞β-catenin表达,且与干预时间长短相关。黄芪甲苷可以抑制滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路,下调MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP的表达。黄芪甲苷可能通过抑制OA滑膜Wnt/β-catenin信号通路,改善滑膜炎症、调控滑膜-软骨共同体系微环境、达到抑制软骨降解,促进软骨细胞功能恢复而治疗骨关节炎。

补肾活血中药干预对去卵巢膝骨关节炎大鼠E2及CTX-Ⅱ的影响

目的:研究补肾活血中药干预对去卵巢膝骨关节炎大鼠血清雌二醇(E2)、Ⅱ型胶原羧基端端肽(CTX-Ⅱ)水平的影响。方法:将30只健康雌性SD大鼠按体重均衡原则随机分为对照组、模型组、中药干预组,每组10只。模型组、中药干预组予以切除双侧卵巢、切断右膝交叉韧带,制造绝经后膝骨关节炎模型,中药干预组每天予以补肾活血中药组方的混悬液灌胃;对照组仅予以模拟切口处理。6周后,取大鼠右侧膝关节股骨髁部的软骨行病理检查,采集大鼠血清检测E2、CTX-Ⅱ的水平。结果:中药干预组股骨髁软骨Mankin评分低于模型组(t′=-7.0365,P<0.05);中药干预组血清E2水平高于模型组(t=2.8022,P<0.05);中药干预组血清CTX-Ⅱ水平明显低于模型组(t=5.9204.P<0.01)。结论:补肾活血中药干预可以引起血清雌激素水平的提高和血清CTX-Ⅱ水平的的降低,改善去卵巢膝骨关节炎大鼠软骨代谢,抑制软骨退变。

生物学标志物CTX-Ⅱ对骨关节炎的诊断价值

骨性关节炎早期诊断是医学中的难题,由于疾病发展缓慢,早期往往不引起临床症状,也无X线表现,故传统的诊断方法难以早期诊断,丧失了早期治疗的机会,导致后期治疗效果不佳,甚至有部分患者发展为关节畸形、活动受限,最后采取手术方法治疗,给患者带来极大的痛苦和沉重的经济负担。如何早期诊断关节软骨损伤成为目前OA研究的重点和难点。有学者曾提出对可疑的OA患者可以用关节镜检查诊断,此是最理想的诊断方法,虽然其创伤小、恢复快,但也属于手术方法之一,具有一定的创伤性,这不仅人为增加了患者的痛苦,而且治疗费用昂贵,使绝大多数患者望而却步。国内外学者进行了大量研究,欲在OA患者的体液中寻找理想的生物学标志物(BM)来及时反映关节软骨代谢状态,并揭示病情活动或预后,而CTX-Ⅱ是可反映软骨降解的BM之一。

膝骨性关节炎关节滑液CTX-Ⅱ的表达及其临床意义

目的检测不同严重程度膝骨性关节炎(KOA)患者关节滑液中Ⅱ型胶原羧基端端肽含量(CTX-Ⅱ)的表达情况,探讨CTX-Ⅱ与膝骨性关节炎严重程度的关系。方法选择我院2009年1月～2010年12月期间80例KOA患者,按Michel Lequesen膝骨性关节炎严重度分级(ISOA)分为四组(中度严重组、严重组、非常严重组、极严重),并选择20例为正常对照组。采集各组患者的膝关节滑液,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组膝关节滑液中CTX-Ⅱ的表达水平。结果①四组KOA患者膝关节滑液中CTX-Ⅱ的表达均比正常对照组增高(p<0.05);②四组KOA患者膝关节滑液CTX-Ⅱ的表达量:中度严重组<严重组<非常严重组<极严重(p<0.05),CTX表达量与病情程度呈正相关(p<0.05)。结论 KOA患者中度严重程度以上患者膝关节滑液中CTX-Ⅱ水平随KOA严重性指数的增加而升高,可利用CTX-Ⅱ的含量变化来监测KOA的病情发展。

膝关节炎患者Omentin-1,Apelin和Ghrelin与关节液CTX-Ⅱ表达水平相关性研究

目的探究膝关节炎(OA)患者血浆和关节液网膜素-1(Omentin-1),APJ的内源性配体(Apelin)和生长素(Ghrelin)与关节液中Ⅱ型胶原C端肽(CTX-Ⅱ)表达水平的关系,深入了解膝OA患者的发病机制。方法选取保守治疗膝OA患者50例为研究组,同一时间收治的胫骨平台骨折患者或者新鲜创伤性半月板损伤行关节镜治疗患者15例作为对照组。测量身高、体重,记录血脂水平,采用酶联免疫吸附试验测定血浆和关节液Omentin-1,Apelin和Ghrelin及关节液CTX-Ⅱ浓度,分析患者血浆和关节液Omentin-1,Apelin和Ghrelin与关节液CTX-Ⅱ水平的相关性。结果研究组患者的平均年龄明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01),在性别构成比、BMI、腰臀比及血脂功能上无显著差异(P>0.05);与对照组比,研究组血浆Apelin、Ghrelin和关节液Apelin显著降低(P<0.01),关节液Apelin、Ghrelin和血浆Apelin显著升高(P<0.01),关节液CTX-Ⅱ表达水平显著降低(P<0.05)。患者血浆Omentin-1、Ghrelin和关节液Apelin与关节液CTX-Ⅱ水平呈显著正相关(P<0.01),血浆Apelin和关节液Omentin-1、Ghrelin与关节液CTX-Ⅱ水平呈显著负相关(P<0.01);在调整年龄、性别与BMI后,进行偏相关分析发现:患者血浆Omentin-1、Ghrelin和关节液Apelin与关节液CTX-Ⅱ水平呈显著正相关(P<0.01),血浆Apelin和关节液Omentin-1、Ghrelin与关节液CTX-Ⅱ水平呈显著负相关(P<0.01)。结论膝OA患者关节液Omentin-1,Apelin和Ghrelin水平与关节液CTX-Ⅱ表达水平关系密切,可以预测组织结构破坏发生的程度及疾病进展,可作为评价膝OA进展与预后的关键生化因子,同时动态监测其含量变化,要考虑到年龄、性别等的影响。

女性骨关节炎患者关节液visfatin水平与CTX-Ⅱ的相关分析

目的研究女性骨关节炎患者关节液visfatin水平与CTX-Ⅱ的相关分析。方法利用ELISA方法测定30例OA患者及12例对照组血浆和关节液visfatin及CTX-Ⅱ水平。结果 OA患者关节液visfatin浓度明显高于对照组(8.95±2.51ng/ml vs 4.48±2.49ng/ml,P<0.001),两组血浆visfatin浓度无统计学意义(5.37±1.45ng/ml vs 4.93±1.4ng/ml,P=0.466)。关节液visfatin水平与Ⅱ型胶原降解产物CTX-Ⅱ呈正相关(r=0.497,P<0.01),与hsCRP无相关(r=-0.246,P=0.19)。K-LⅣ级OA患者关节液visfatin浓度明显高于K-LⅢ级visfatin浓度(10.57±2.49ng/ml vs 7.54±1.5ng/ml,P<0.01)。关节液visfatin水平明显与OA严重程度正相关(r=0.421,P=0.021)。结论 Visfatin可能通过关节腔局部作用参与OA关节软骨降解通路。

血清CTX-Ⅱ浓度评价透明质酸联合倍他米松关节腔内注射治疗膝骨关节炎的临床疗效

目的:观察血清CTX-Ⅱ浓度与透明质酸联合倍他米松关节腔内注射治疗膝骨关节炎临床疗效的相关性。方法:69例随机分为两组,HA+GC组(39例)和单独HA组(30例)。所有OA患者均予以非甾类抗炎药物(NSAIDs)和改变骨关节炎病情药物(DMAODs)治疗。关节腔内注射药物后1、3、6个月后重复观察以上项目进行疗效评价和生化检查。结果:①HA组与HA+GC组一般情况和基线特征组间差异无统计学意义(P>0.05);②骨关节炎治疗前后总体生存质量的比较:HA组与HA+GC组治疗前后总体生存质量均明显改善,HA+GC组与单用HA组相比较,在SF-36评分生理健康(PCS)方面第1、6个月患者对病情总体的VAS评分以及第1、3个月医生对病情总体的VAS评分要优于HA组(P<0.01),而在SF-36评分心理健康(MCS)方面第3个月患者对病情总体的VAS评分以及第6个月医生对病情总体的VAS评分方面与HA组差异无显著性。③骨关节炎治疗前后血清CTX-Ⅱ水平和炎症指标的比较:HA组与HA+GC组治疗前后血清CTX-Ⅱ水平、ESR、CRP均明显下降,HA+GC组与单用HA组相比较,血清CTX-Ⅱ水平下降明显,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:HA+GC联合使用要较单独使用HA在缓解疼痛、改善功能、提高总体生存质量方面有明显的优势,GC的加用并不增加软骨破坏,相反可以通过拮抗滑膜炎起到了保护软骨的作用,CTX-Ⅱ可以作为OA关节损害程度及疾病预后标记物,也可以作为疗效评价的指标之一。

马骨关节炎模型关节液中CTX-Ⅱ含量变化的研究

目前马骨关节炎(OA)的临床诊断尚缺少有效的生物标志物(BM)。为探讨马关节液Ⅱ型胶原羧基端端肽(CTX-Ⅱ)的浓度与OA发病程度的关系。试验选用13匹蒙古马,随机分为造模组(n=8)和对照组(n=5),在马左侧腕关节内注入2 mL两性霉素B(25 mg/mL)诱导OA,对照组马匹注入等量PBS作为对照,于造模后每周采集一次关节液,直至第9周。ELISA检测马关节液中的CTX-Ⅱ浓度。结果显示,与对照组相比,造模组从第1周开始,关节液中CTX-Ⅱ的浓度增加,从第2周开始显著增加(P<0.05),第4周开始极显著增加(P<0.01)并且保持增加的趋势到第9周。造模组马匹第3周开始出现不同程度跛行。试验结果表明,CTX-Ⅱ浓度的升高在跛行前就已经显著升高,推测CTX-Ⅱ可以作为马关节炎BM,为以后建立马OA的快速临床诊断技术提供理论依据。

消瘀接骨散对兔膝骨关节炎模型血清COMP、CTX-Ⅱ含量影响的实验研究

目的:观察消瘀接骨散对兔中期膝骨关节炎模型血清中COMP、CTX-Ⅱ含量的影响,探讨消瘀接骨散对膝骨关节炎的治疗作用及机制。方法:日本大耳白兔32只,造模后随机分为正常组、模型组、治疗组(消瘀接骨散组)、对照组(扶他林组),每组8只。治疗组予消瘀接骨散外用,对照组予扶他林外用,连续给药30d后,取耳源静脉血,ELISA法检测各组血清中COMP、CTX-Ⅱ含量。结果:模型组COMP含量显著高于正常组、治疗组、对照组(均是P<0.01),对照组与模型组之间无差异(P>0.05),治疗组低于对照组(P<0.01);模型组血清中CTX-Ⅱ含量高于正常组、治疗组、对照组,差异有统计学意义(P<0.01),治疗组、对照组均显著低于模型组(P<0.01),治疗组与对照CTX-Ⅱ水平差异有统计学意义(P<0.05)。结论:证实COMP、CTX-Ⅱ在KOA病理过程中有不同表达;消瘀接骨散有抑制血清中CTX-Ⅱ、COMP表达的作用,且对CTX-Ⅱ的抑制能力优于扶他林。

膝骨关节炎关节镜下病变特征与血清CTX-Ⅱ和COMP水平的相关性

目的探讨膝骨关节炎患者血清中Ⅱ型胶原C端肽(CTX-Ⅱ)和软骨寡聚基质蛋白(COMP)的水平高低与膝骨关节病变之间的相关性。方法筛选出144例符合标准的患者,通过关节镜严格检查患者膝关节的炎症病变状况,观察半月板和软骨组织的损伤程度、滑膜增生情况以及是否存在游离体、骨赘,依据惯用标准对上述指标进行分级评价。检测血清CTX-Ⅱ和COMP水平,并分析二者和膝关节病变程度的相关性。结果患者血清中CTX-Ⅱ和COMP水平高低与关节软骨组织损伤程度、半月板损伤分级以及滑膜的增生程度有相关性(P<0.001),而与骨赘分级情况以及游离体大小无相关性(P>0.05)。结论血清CTX-Ⅱ和COMP水平高低在一定程度上反映出膝骨关节炎的病变程度,可以为临床上膝骨关节炎的分级诊断以及患者恢复情况提供参考价值。

血清CTX-Ⅱ、COMP在关节镜清理术治疗膝骨关节炎前后变化及临床意义

目的:探讨关节镜清理术治疗膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)对血清CTX-Ⅱ、COMP的影响,对比术前术后血清CTX-Ⅱ、COMP含量以了解患者术后膝关节软骨修复情况。方法:选取2013年1月-2015年6月本院行关节镜清理术的膝骨关节炎患者60例,根据ICRS分级方法按病情分为Ⅰ级组18例、Ⅱ级组23例、Ⅲ级组11例、Ⅳ级组8例。用ELISA法测定患者术前及术后1周、1个月、3个月血清CTX-Ⅱ和COMP含量,采用WOMAC评分评价患者术前术后膝关节功能。结果:不同分级患者关节镜清理术后1周、1个月、3个月WOMAC评分均较术前显著降低,差异均有统计学意义(P<0.01),各组患者术后1周血清CTX-Ⅱ和COMP含量与术前比较差异均无统计学意义,且各分级组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。各组患者血清CTX-Ⅱ、COMP含量于术后1个月、3个月较术前均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。软骨损伤程度Ⅳ级患者术后1个月、3个月的WOMAC总评分、血清CTX-Ⅱ、COMP含量均显著高于其他分级组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:膝骨关节炎患者的血清CTX-Ⅱ、COMP可作为关节镜清理术后膝关节软骨修复的评价指标,有助于对膝骨关节炎患者治疗预后进行评估。

筋针联合乌头汤治疗寒湿痹阻型早中期膝骨关节炎患者的临床疗效及其对血清CTX-Ⅱ、COMP的影响

目的观察筋针联合乌头汤对寒湿痹阻型早中期膝骨关节炎的临床疗效及其对血清CTX-Ⅱ、COMP的影响。方法选取2018年6月至2020年6月在本院治疗的80例寒湿痹阻型早中期膝骨关节炎患者,随机分为治疗组和对照组,每组各40例。治疗组采用筋针联合乌头汤治疗,对照组采用乌头汤治疗。观察两组治疗前后西安大略和麦克马斯特大学骨关节炎指数(WOMAC)评分、视觉模拟评分量表(VAS)、Ⅱ型胶原羧基端肽(CTX-Ⅱ)、寡聚基质蛋白(COMP)变化情况,并比较两组临床疗效。结果治疗组总有效率为95.0%,高于对照组的77.5%,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗前WOMAC评分和VAS评分比较,差异无统计学意义(P>0.05),观察组治疗后WOMAC评分中疼痛为(6.20±2.12)分、僵硬(2.34±0.65)分、活动功能(23.56±7.68)分,VAS评分(2.30±0.78)分均低于对照组的(8.14±2.75)分、(3.56±1.06)分、(28.43±9.32)分,(3.34±1.04)分,差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗前血清CTX-Ⅱ、COMP水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),观察组治疗后血清CTX-Ⅱ为(180.54±60.78)pg/mL、COMP为(467.37±155.25)pg/mL,低于对照组的(201.91±70.19)pg/mL、(480.58±160.73)pg/mL,差异有统计学意义(P<0.05)。结论筋针联合乌头汤同单用乌头汤相比,可以更好地缓解寒湿痹阻型早中期膝骨关节炎患者的临床症状,改善血清CTX-Ⅱ、COMP的表达,具有较好的临床疗效。

复元胶囊对膝骨关节炎模型Ⅱ型胶原羧基端肽、基质金属蛋白酶-13的影响

目的观察复元胶囊对实验性大鼠膝骨关节炎(KOA)模型病理形态、血清Ⅱ型胶原羧基端肽(CTX-Ⅱ)及基质金属蛋白酶-13(MMP-13)的影响。方法 72只雄性老年SD大鼠随机分成正常组、模型组、抗骨增生胶囊组、复元胶囊组(高、中、低剂量组),每组12只。除正常组外,其余各组采用Hulth法建立OA动物模型。造模2 w后,各实验组给予相应的药物灌胃,正常组、模型组给予等量生理盐水。灌胃后48、1、2 w分别随机选取各组4只处死,比较各组关节软骨病理变化;免疫组化法比较MMP-13水平变化;酶联免疫吸附法(ELISA)比较CTX-Ⅱ水平变化。结果实验组Mankin评分明显低于模型组(P<0.01);复元胶囊中、高剂量组MMP-13及CTX-Ⅱ较模型组表达明显下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论复元胶囊能够抑制关节软骨MMP-13及降解产物CTX-Ⅱ的表达,对防治关节软骨退变有一定的积极意义。

联合检测尿C-末端Ⅱ型胶原 血清软骨寡聚基质蛋白和硫酸软骨素846在骨关节炎早期诊断中的价值

目的评价联合检测尿C-末端Ⅱ型胶原(CTX-Ⅱ)、血清软骨寡聚基质蛋白(COMP)和硫酸软骨素846(CS-846)等生物学标志物在骨关节炎早期诊断中的价值。方法采用VAS评分法对患者疼痛程度进行评估后摄X线片,采用ELISA法检测骨关节炎患者及健康对照组血清中COMP、CS-846的浓度及尿液中CTX-Ⅱ浓度,并对上述指标进行相关性分析。结果骨关节炎组尿CTX-Ⅱ、血清COMP和CS-846含量均高于对照组,随着骨关节炎患者VAS评分及关节间隙狭窄程度的升高或加重,尿C-末端Ⅱ型胶原、血清COMP和CS-846水平逐渐升高。统计学分析结果显示,尚不能认为血清COMP水平与疼痛VAS评分之间有相关性,但其与关节间隙狭窄程度之间存在相关性;而血清CS-846水平及尿CTX-Ⅱ与疼痛VAS评分及关节间隙狭窄程度之间均有相关性。结论联合检测尿CTX-Ⅱ、血清COMP和CS-846等生物学标志物有望成为骨关节炎早期诊断的一种有效方法,但临床应用尚需要有更确切的循证医学证据。

Ⅱ型胶原羧基端端肽对骨关节炎早期诊断和病情评估的实验研究

目的:定量检测骨关节炎(OA)大鼠模型血清、关节软骨蛋白提取液中Ⅱ型胶原羧基端端肽(CTX-Ⅱ)的变化,探讨其作为OA早期诊断及病情评估指标的价值和意义。方法:SD大鼠行前交叉韧带切断术诱导OA模型,将大鼠随机分为模型组和假手术组。于造模后不同时间点分批取血并处死取关节标本,检测血清及软骨蛋白提取液中CTX-Ⅱ水平,观察病理变化。结果:模型组术后2周开始出现OA特征性病理变化且逐渐加重,CTX-Ⅱ水平在术后3天开始不断升高。两组血清及软骨蛋白提取液中CTX-Ⅱ水平在造模后各时间点均有统计学差异,血清和软骨蛋白提取液中CTX-Ⅱ水平变化具有相关性。结论:在大鼠OA模型中,血清CTX-Ⅱ水平在未出现明显病理变化时即已开始增高,并与病灶区软骨中CTX-Ⅱ表达一致,可作为OA早期诊断和病情评估的参考指标。

膝关节液中透明质酸和Ⅱ型胶原羧基端端肽含量与滑膜炎关系的实验研究

目的探讨关节液中透明质酸(HA)和Ⅱ型胶原羧基端端肽(CTX-Ⅱ)含量与骨关节炎(OA)滑膜炎的关系。方法采用酶联免疫吸附试验对膝OA67例患者(OA组)、膝关节其他疾病77例患者(非OA组)的关节液中HA和CTX-Ⅱ含量进行检测,并在关节镜下利用Ayral滑膜炎评分法对滑膜炎程度进行评价。结果OA组关节液中HA含量明显低于非OA组(P<0.05);OA组关节液中CTX-Ⅱ含量高于非OA组(P<0.05);OA组关节液中HA含量与滑膜炎程度呈负相关,CTX-Ⅱ含量与滑膜炎程度呈正相关(P<0.05)。结论关节液中HA和CTX-Ⅱ含量是可反映OA滑膜炎的标志物。

Ⅱ型胶原羧基端端肽和脱氧吡啶啉在实验性大鼠关节软骨损伤中的生物标志作用

目的观察实验性大鼠关节软骨损伤时血清中II型胶原降解产物Ⅱ型胶原羧基端端肽(CTX-II)和脱氧吡啶啉(DPD)水平,探讨其在软骨损伤中的分子生物标志物作用。方法利用大鼠,进行亚慢性毒性试验,通过透明软骨的组织病理和超微结构改变来确定软骨的损伤程度,用ELISA夹心法检测大鼠不同阶段血清CTX-II和DPD含量。结果T-2毒素可致大鼠关节软骨细胞变性、坏死,出现大面积无细胞区,胶原染色可见明显的"胶原显现";扫描电镜显示,关节面起伏不平,表面粗糙,胶原纤维断裂、剥脱,关节表面布满裂片状凸起,呈典型的关节"干燥"现象;ELISA检测结果表明,T-2毒素组大鼠血清CTX-II水平在3个月时较对照组明显增加,差异具有统计学意义。至6个月时,CTX-II含量虽较对照组高,但差异无统计学意义;DPD检测结果正好相反,3个月时两组无差异,6个月时T-2毒素组较对照组明显升高,差异有统计学意义。结论血清CTX-II和DPD可作为关节软骨损伤的生物标志,但两指标反映的病理阶段不同,CTX-II在关节软骨损伤早期反应敏感,可作为早期生物标志物,而DPD在软骨损伤后期更敏感,可作为病情进展的生物标志物。

膝关节液中Ⅱ型胶原羧基端端肽含量与滑膜炎程度的关系

目的探讨膝关节液中Ⅱ型胶原羧基端端肽(CTX-Ⅱ)含量与滑膜炎程度之间的关系。方法采用ELISA法对膝关节液中CTX-Ⅱ含量进行检测,并在关节镜下利用Ayral滑膜炎评分法和Outerbridge软骨损伤评分法对滑膜炎程度和软骨损伤程度进行评价。结果骨性关节炎关节液中CTX-Ⅱ含量高于非骨性关节炎OA组(t=-7.558,P<0.05);在Ayral滑膜炎评分≥60分组的关节液中CTX-Ⅱ含量高于Ayral滑膜炎评分<60分组(t=-5.113,P<0.05)。将71例膝关节疾病CTX-Ⅱ含量与Ayral滑膜炎评分呈正相关(r=0.706,P<0.05)。结论膝关节液CTX-Ⅱ含量可作为生物标记物反映关节软骨损伤累计程度外,在一定程度上还反映关节滑膜炎程度;膝关节液CTX-Ⅱ含量升高提示滑膜炎程度较重。

祛痰化瘀利湿方对大鼠膝骨关节炎滑膜组织和血清IL-1β,MMP-1及COMP,CTX-Ⅱ的影响

目的:观察祛痰化瘀利湿方对大鼠膝骨关节炎(OA)模型关节滑膜组织和血清IL-1β,MMP-1以及血清软骨降解标志物COMP,CTX-Ⅱ的影响。方法:采用Hulth方法建立膝骨关节炎大鼠模型,造模成功后,将造模组随机分为模型组和祛痰化瘀利湿方组。正常组和模型组大鼠予以生理盐水灌胃,祛痰化瘀利湿方组予以祛痰化瘀利湿方中药灌胃,连续灌胃4周,腹主动脉取血方法抽取大鼠血液,离心后获取大鼠血清;外科手术方法打开大鼠膝关节,摘取滑膜组织。免疫印迹法(Western blot)观察大鼠膝关节滑膜组织中IL-1β,MMP-1的表达,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清IL-1β,MMP-1,COMP,CTX-Ⅱ的表达。结果:成功建立大鼠膝骨关节炎模型,免疫印迹法结果显示模型组大鼠滑膜组织中IL-1β,MMP-1的蛋白表达显著高于正常组,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);祛痰化瘀利湿方组对OA滑膜组织中IL-1β,MMP-1的蛋白表达有明显下调作用,与模型组相比较差异有统计学意义(P<0.01)。酶联免疫吸附法结果显示模型组大鼠血清中IL-1β,MMP-1,COMP,CTX-Ⅱ的蛋白表达显著高于正常组,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);祛痰化瘀利湿方组对血清中IL-1β,MMP-1,COMP,CTX-Ⅱ的蛋白表达有明显下调作用,与模型组相比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:1)大鼠膝骨关节炎模型膝关节滑膜组织和血清中IL-1β,MMP-1的表达升高,提示该变化与滑膜炎症有关,MMP-1表达的升高参与诱导了软骨降解;而血清中COMP,CTX-Ⅱ的升高提示软骨降解,符合骨关节炎的特征。2)祛痰化瘀利湿方对IL-1β,MMP-1,COMP,CTX-Ⅱ的表达均有下调作用,提示祛痰化瘀利湿方能够抑制滑膜炎症,抑制滑膜炎症诱导的软骨降解,促进软骨的修复,这是祛痰化瘀利湿方治疗膝骨关节炎的机制之一。