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CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶的序列分析与原核表达 被引量:2
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作者 徐韫健 廖伟娇 江洁华 《中国热带医学》 CAS 2007年第12期2180-2183,共4页
目的对肺炎克雷伯菌所产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)进行基因克隆和重组表达,探讨其特性。方法以产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌49号菌总基因组DNA为模板,PCR扩增CTX-M-3,将其克隆入pGEM-T载体后测定该核苷酸序列,再... 目的对肺炎克雷伯菌所产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)进行基因克隆和重组表达,探讨其特性。方法以产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌49号菌总基因组DNA为模板,PCR扩增CTX-M-3,将其克隆入pGEM-T载体后测定该核苷酸序列,再将CTX-M-3基因克隆到pBV220/DH5α系统进行重组,重组菌经42℃热诱导,SDS-PAGE电泳鉴定酶蛋白的表达。结果PCR扩增出大小为876bp的基因片段,与GenBank上同类酶的基因序列同源性为100%。大肠杆菌DH5α转化pBV220/CTX-M-3重组质粒后,ESBLs试验为阳性,药敏试验结果与原菌株相比耐药性下降。此基因能在大肠埃希菌中大量表达,SDS-PAGE电泳显示,蛋白分子质量大约为31KD。结论成功表达重组的CTX-M-3型酶,为进一步做酶动力学及酶的其他分子生物学特性研究奠定基础。 展开更多
关键词 超广谱Β-内酰胺酶 ctx-m-3 克隆 表达
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革兰阴性菌产CTX-M-3型超广谱β内酰胺酶分子传播机制的研究
2
作者 陆坚 唐英春 +6 位作者 吴本权 张扣兴 张天托 黄再平 曹智忠 朱家馨 谈淑卿 《中国抗感染化疗杂志》 2002年第4期202-206,共5页
目的 :了解革兰阴性菌产CTX M 3型超广谱β内酰胺酶 (ESBLs)的分子传播机制 ,为临床防治提供依据。 方法 :收集革兰阴性菌医院感染无重复株共 378株 ,进行药敏试验和ESBLs产酶株的检测 ;肠杆菌科基因组内重复一致序列 聚合酶链反应 (ERI... 目的 :了解革兰阴性菌产CTX M 3型超广谱β内酰胺酶 (ESBLs)的分子传播机制 ,为临床防治提供依据。 方法 :收集革兰阴性菌医院感染无重复株共 378株 ,进行药敏试验和ESBLs产酶株的检测 ;肠杆菌科基因组内重复一致序列 聚合酶链反应 (ERIC PCR)进行克隆株的DNA分型 ;质粒转移实验、质粒谱及耐药质粒酶切指纹分析、等电聚焦电泳、PCR扩增TEM、CTX M基因及其克隆测序进行ESBLs基因分型和质粒定位。结果 :ESBLs的检出率为 16 .9% (6 4 / 378) ,其中CTX M 3型产酶株占 2 0 .3% (13/ 6 4 ) ;CTX M 3基因定位在 6 6kb和 75kb 2种接合性质粒上 ,6 6kb的质粒同时携带TEM 1基因 ;从不同来源的CTX M 3产酶株中可以分离到同种耐药质粒 ,染色体DNA同源性分析显示其为不同的克隆株。结论 :CTX M 3型ESBLs产酶株的传播机制以质粒介导为主 ,并可能存在局部携带CTX M 展开更多
关键词 革兰阴性菌 ctx-m-3型超广谱β内酰胺酶 分子传播机制 研究
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质粒介导的耐多药大肠埃希菌CTX-M、CTX-M-3基因检测 被引量:1
3
作者 张正琼 黄永茂 +3 位作者 林雁 史小玲 陈庄 陈枫 《西南军医》 2012年第5期692-694,共3页
目的了解泸州本地质粒介导的耐多药大肠埃希菌的CTX M、CTX M 3基因分布情况。方法用K-B法进行耐药菌株筛选,PCR扩增CTX M、CTX M 3基因,琼脂糖凝胶电泳检测基因大小,阳性产物外送测碱基序列。结果 71株大肠埃希菌中,有一株死亡。全敏6... 目的了解泸州本地质粒介导的耐多药大肠埃希菌的CTX M、CTX M 3基因分布情况。方法用K-B法进行耐药菌株筛选,PCR扩增CTX M、CTX M 3基因,琼脂糖凝胶电泳检测基因大小,阳性产物外送测碱基序列。结果 71株大肠埃希菌中,有一株死亡。全敏6株,占8.57%,单耐16株,占22.86%,双耐18株,占26.71%,耐多药30株,占42.86%。耐多药质粒中的阳性结果经DNA测序仪检测基因序列,与已知的基因相比较,CTX M有23株,占76.67%,CTX M 3有21株,占70%。两种基因均含有的有12株,占40%。结论泸州地区耐多药大肠埃希菌存在质粒介导的CTX M、CTX M 3基因,耐多药的大肠埃希菌对第三代头孢菌素中的头孢唑肟敏感,对亚胺培南,美罗培南较敏感。 展开更多
关键词 大肠埃希菌 耐多药 质粒介导 CTXM CTXM3
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Characterization of a bla_(CTX-M-3),bla_(KPC-2)and bla_(TEM-1B)co-producing IncN plasmid in Escherichia coli of chicken origin
4
作者 WANG Wen-jing WANG Yi-fu +7 位作者 JIN Ya-jie SONG Wu-qiang LIN Jia-meng ZHANG Yan TONG Xin-ru TU Jian LI Rui-chao LI Tao 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2023年第1期320-324,共5页
An extensively drug-resistant(XDR)Escherichia coli strain 258E was isolated from an anal swab sample of a chicken farm of Anhui province in China.Genomic analyses indicated that the strain 258E harbors an incompatibil... An extensively drug-resistant(XDR)Escherichia coli strain 258E was isolated from an anal swab sample of a chicken farm of Anhui province in China.Genomic analyses indicated that the strain 258E harbors an incompatibility group N(IncN)plasmid pEC258-3,which co-produces bla_(CTX-M-3),bla_(KPC-2),bla_(TEM-1B),qnrS1,aac(6')-Ib-cr,dfrA14,arr-3,and aac(6')-Ib3.Multiple genome arrangement analyses indicated that pEC258-3 is highly homologous with pCRKP-1-KPC discovered in Klebsiella pneumoniae from a patient.Furthermore,conjugation experiments proved that plasmid pEC258-3 can be transferred horizontally and may pose a significant potential threat in animals,community and hospital settings. 展开更多
关键词 bla_(ctx-m-3) bla_(KPC-2) bla_(TEM-1B) IncN PLASMID Escherichia coli
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CTX-M-3超广谱-和TEM-1广谱β-内酰胺酶基因同时存在于大肠埃希菌 被引量:14
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作者 孙景勇 倪语星 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第S1期79-81,共3页
目的 分析我院大肠埃希菌临床分离株中超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)的基因型。方法用NCCLS表型确证试验确定临床标本中产ESBLs的大肠埃希菌 ,用Etest检测其MIC值 ,分别用TEM、SHV和CTX M通用引物进行PCR扩增并对PCR产物进行序列分析。... 目的 分析我院大肠埃希菌临床分离株中超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)的基因型。方法用NCCLS表型确证试验确定临床标本中产ESBLs的大肠埃希菌 ,用Etest检测其MIC值 ,分别用TEM、SHV和CTX M通用引物进行PCR扩增并对PCR产物进行序列分析。结果 我院大部分产ESBLs的大肠埃希菌体外对头孢噻肟耐药而对头孢他啶敏感。这些菌株以TEM和CTX M引物的PCR扩增结果均出现阳性条带 ,而SHV引物的PCR均无条带产生 ,测序发现阳性条带分别为TEM 1和CTX M 3基因序列。结论 发现CTX M 3型ESBL和TEM 1广谱 β 展开更多
关键词 大肠埃希菌 超广谱Β-内酰胺酶 ctx-m-3 TEM-1
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CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶的原核表达及纯化 被引量:3
6
作者 李翊泉 徐韫健 +2 位作者 廖伟娇 江洁华 张东梅 《中国热带医学》 CAS 2010年第2期137-138,161,共3页
目的对肺炎克雷伯菌所产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamase,ESBLs)进行基因重组表达及纯化。方法以产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌总基因组DNA为模板PCR扩增CTX-M-3,将其克隆入pET-28a(+)载体,重... 目的对肺炎克雷伯菌所产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamase,ESBLs)进行基因重组表达及纯化。方法以产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌总基因组DNA为模板PCR扩增CTX-M-3,将其克隆入pET-28a(+)载体,重组质粒转入大肠埃希菌ER2566中表达,表达产物经过Ni-琼脂糖凝胶柱纯化,用SDS-PAGE电泳和Western-blot鉴定纯化蛋白。结果PCR扩增出大小为876bp的基因片段,与GenBank上同类酶的基因序列同源性为100%。此基因能在大肠埃希菌ER2566中大量表达,蛋白分子质量大约为32KD得到SDS-PAGE电泳和Western-blot的证实,与理论值相符。结论成功表达及纯化CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶,为进一步酶生物学特性及酶的抗体制备研究奠定了基础。 展开更多
关键词 超广谱Β-内酰胺酶 CTX—M-3 原核表达 纯化
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CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶的表达、纯化及多克隆抗体的制备 被引量:1
7
作者 李翊泉 黄伟青 +3 位作者 徐韫健 张志强 张东梅 江洁华 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2012年第7期597-601,共5页
目的将肺炎克雷伯菌所产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamase,ESBLs)进行表达、纯化及其多克隆抗体的制备。方法将保存的重组质粒pET-28a(+)/CTX-M-3在大肠埃希菌BL21(DE3)中原核表达。IPTG诱导CTX-M-3融合蛋白表... 目的将肺炎克雷伯菌所产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamase,ESBLs)进行表达、纯化及其多克隆抗体的制备。方法将保存的重组质粒pET-28a(+)/CTX-M-3在大肠埃希菌BL21(DE3)中原核表达。IPTG诱导CTX-M-3融合蛋白表达,利用镍琼脂糖凝胶亲和柱层析纯化蛋白,用纯化的CTX-M-3型ESBLs酶蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。结果可溶性检测表明表达产物以可溶性形式(上清中)和包涵体形式(沉淀中)两种形式存在。通过蛋白表达条件的优化实验,SDS-PAGE电泳结果显示18℃,0.8 mmol/L IPTG诱导24 h的CTX-M-3重组蛋白的可溶性表达最佳。SDS-PAGE电泳和Western-blot检测表明获得纯化的重组32 kD蛋白。免疫获得的CTX-M-3型ESBLs酶蛋白抗血清的效价为1∶32。结论 pET-28a(+)/CTX-M-3表达载体在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,用His亲和层析柱纯化可获得高纯度可溶性的重组蛋白,成功制备了效价较高的抗CTX-M-3型ESBLs酶蛋白多克隆抗体。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 CTX—M-3 原核表达 纯化 多克隆抗体
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CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶原核表达条件的研究 被引量:1
8
作者 徐韫健 李翊泉 +2 位作者 廖伟娇 江洁华 张东梅 《热带医学杂志》 CAS 2010年第2期123-125,129,共4页
目的探讨重组质粒pET-28a(+)/CTX-M-3分别在大肠埃希菌ER2566和BL21(DE3)中进行原核表达的最佳条件。方法分别在不同的宿主菌、诱导温度、诱导时间和诱导剂浓度中诱导pET-28a(+)/CTX-M-3融合表达载体,目的产物经SDS-PAGE和BandScan凝胶... 目的探讨重组质粒pET-28a(+)/CTX-M-3分别在大肠埃希菌ER2566和BL21(DE3)中进行原核表达的最佳条件。方法分别在不同的宿主菌、诱导温度、诱导时间和诱导剂浓度中诱导pET-28a(+)/CTX-M-3融合表达载体,目的产物经SDS-PAGE和BandScan凝胶分析软件分析,以获得最佳表达条件。结果表达载体的最佳诱导条件是重组质粒在BL21(DE3)中18℃诱导24h,IPTG终浓度为0.8mmol/L;表达载体在最佳条件下表达时,目的蛋白的最高表达量占菌体总蛋白的33%。结论获得pET-28a(+)/CTX-M-3在大肠埃希菌中表达CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamase,ESBLs)蛋白的最佳条件,为此酶的大量纯化奠定了基础。 展开更多
关键词 CTX—M一3 超广谱β一内酰胺酶 原核表达 条件
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肺炎克雷伯菌产ESBLs基因型分析 被引量:12
9
作者 陈淑贞 石蓉林 +2 位作者 姚芬 蔡应木 钱元恕 《中国感染与化疗杂志》 CAS 2006年第4期236-239,共4页
目的分析我院临床分离的肺炎克雷伯菌产ESBLs基因型,为指导临床合理用药提供依据。方法用琼脂稀释法检测10种抗菌药物对已确定为产ESBLs肺炎克雷伯菌的MIC,分别用TEM、SHV、CTX-M、OXA通用引物进行PCR扩增、产物克隆测序分析。结果83株... 目的分析我院临床分离的肺炎克雷伯菌产ESBLs基因型,为指导临床合理用药提供依据。方法用琼脂稀释法检测10种抗菌药物对已确定为产ESBLs肺炎克雷伯菌的MIC,分别用TEM、SHV、CTX-M、OXA通用引物进行PCR扩增、产物克隆测序分析。结果83株产ESBLs肺炎克雷伯菌中,产TEM型75株,SHV型41株,CTX-M型25株,OXA型9株。其中,同时产3种酶有13株,占15.7%;同时产2种酶有59株,占71.1%;仅11株产单1种酶,占13.2%。而9株同时产TEM、SHV和CTX-M型,测序结果为CTX-M-3,TEM-1及多种SHV型(SHV-12、SHV-28)。药敏结果表明,同时产2或3种酶的菌株比产单1种酶的菌株耐药性更严重。结论所分离产ESBLs肺炎克雷伯菌主要为TEM、SHV、CTX-M、OXA型,且同时存在产2~3种酶,应引起临床高度重视。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 超广谱Β内酰胺酶 TEM-1 ctx-m-3 SHV
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革兰阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶基因型研究 被引量:3
10
作者 侯晓娜 杨婧 +3 位作者 傅炜昕 何丽 高洪福 王月 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期1180-1182,共3页
目的 分析革兰阴性杆菌中超广谱 β-内酰胺酶 (ESBLs)的基因型。 方法 采用双纸片协同法筛选ES BLs菌 ,用纸片扩散法检测其药敏结果 ,分别用TEM、SHV和CTX -M通用引物进行PCR扩增并对PCR产物进行序列分析。结果 大部分产ESBLs菌对头... 目的 分析革兰阴性杆菌中超广谱 β-内酰胺酶 (ESBLs)的基因型。 方法 采用双纸片协同法筛选ES BLs菌 ,用纸片扩散法检测其药敏结果 ,分别用TEM、SHV和CTX -M通用引物进行PCR扩增并对PCR产物进行序列分析。结果 大部分产ESBLs菌对头孢噻肟耐药 ,而对头孢他啶敏感 ,少部分对两者都耐药 ,这些菌株前者以CTX-M引物的PCR扩增结果 ,主要为CTX -M - 3,还检出CTX -M - 12、CTX -M - 14 ;后者以SHV引物的PCR扩增结果 ,主要为SHV - 12 ,还检出SHV - 4 0、SHV - 33和SHV - 5型。TEM引物扩增结果全部为TEM - 1型广谱酶。结论 革兰阴性杆菌中ESBLs主要是CTX -M - 3型 ,6 2 9%的菌同时存在 2~ 3种酶。 展开更多
关键词 革兰阴性杆菌 超广谱Β-内酰胺酶 ctx-m-3 SHV-12 TEM-1
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肺炎克雷伯氏菌K99-1029中的ESBLs基因型分析 被引量:11
11
作者 熊自忠 朱德妹 +1 位作者 汪复 张婴元 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期96-100,共5页
目的 了解华山医院临床分离的肺炎克雷伯氏菌K99 10 2 9菌株产生的超广谱 β 内酰胺酶(ESBLs)的基因型。方法 编码框以外设计引物、PCR扩增K99 10 2 9转移接合子中的ESBLs全编码基因 ,克隆入pHSG398质粒、表达 ,并对PCR产物进行测序... 目的 了解华山医院临床分离的肺炎克雷伯氏菌K99 10 2 9菌株产生的超广谱 β 内酰胺酶(ESBLs)的基因型。方法 编码框以外设计引物、PCR扩增K99 10 2 9转移接合子中的ESBLs全编码基因 ,克隆入pHSG398质粒、表达 ,并对PCR产物进行测序分析其基因型。结果 K99 10 2 9转移接合子所产生的三种酶编码基因序列分别与GenBank中TEM 1、SHV 12、CTX M 3编码基因序列的同源性为 10 0 % ;产SHV 12或CTX M 3克隆菌株对多数 β 内酰胺类抗生素耐药 ,SHV 12和CTX M 3对多数 β 内酰胺类抗生素具有水解作用 ,CTX M 3对头孢噻肟的水解能力明显强于头孢他啶 ;产TEM 1克隆菌株仅对青霉素类耐药 ,TEM 1对青霉素类有明显的水解作用。结论 临床分离的肺炎克雷伯氏菌K 99 10 2 9菌株同时产生TEM 1、SHV 12、CTX M 3型酶 ,可导致对大多数的 β 内酰胺类抗生素产生耐药性。 展开更多
关键词 ESBLS 基因型 肺炎克雷伯氏菌 医院 超广谱Β-内酰胺酶 抗生素
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阴沟肠杆菌6株中产超广谱β内酰胺酶的基因型 被引量:15
12
作者 吴伟元 陈民钧 王辉 《中国抗感染化疗杂志》 2001年第3期155-159,共5页
目的 :研究阴沟肠杆菌 6株的超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs)的基因型。 方法 :分别使用对TEM型、SHV型和CTX M型基因特异的引物 ,PCR扩增 6株阴沟肠杆菌接合子Esbl基因 ,对PCR产物直接测序分析其基因型。结果 :3株阴沟肠杆菌的接合子均含有C... 目的 :研究阴沟肠杆菌 6株的超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs)的基因型。 方法 :分别使用对TEM型、SHV型和CTX M型基因特异的引物 ,PCR扩增 6株阴沟肠杆菌接合子Esbl基因 ,对PCR产物直接测序分析其基因型。结果 :3株阴沟肠杆菌的接合子均含有CTX M 3型酶 ,同时含有TEM型酶。另 3株阴沟肠杆菌接合子均含有一种等电点为 8.3未知的 β内酰胺酶 ,同时含有一种 pI为 5 .4或 5 .5未知的 β内酰胺酶。 结论 :临床分离的阴沟肠杆菌可产CTX M 3型酶 ,对头孢菌素类产生耐药性。 展开更多
关键词 阴沟肠杆菌 超广谱Β内酰胺酶 基因型 PCR 耐药性 抗生素
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质粒介导产ESBLs与AmpC β-内酰胺酶基因弗氏柠檬酸杆菌的研究 被引量:1
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作者 陈坚 余方友 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第21期4435-4437,共3页
目的研究一株同时产ESBLs和AmpCβ-内酰胺酶弗氏柠檬酸杆菌(CFR)的耐药机制。方法 2008年1月从临床尿液标本中分离出多药耐药弗氏柠檬酸杆菌1株,采用双纸片扩散法检测产ESBLs,头孢西丁三维试验检测AmpC酶,E-test法测定抗菌药物最低抑菌... 目的研究一株同时产ESBLs和AmpCβ-内酰胺酶弗氏柠檬酸杆菌(CFR)的耐药机制。方法 2008年1月从临床尿液标本中分离出多药耐药弗氏柠檬酸杆菌1株,采用双纸片扩散法检测产ESBLs,头孢西丁三维试验检测AmpC酶,E-test法测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC),聚合酶链反应(PCR)检测产ESBLs和AmpC酶基因,DNA测序决定基因型;接合试验测定耐药基因的转移性。结果临床分离出一株同时产ESBLs和AmpCβ-内酰胺酶的多药耐药弗氏柠檬酸杆菌,对头孢他啶、头孢噻肟、头孢西丁、氨曲南、氨苄西林、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的MIC分别为96、96、256、192、>256、>32μg/ml,PCR扩增及测序临床分离株携带blaCTX-M-3和blaCMY-2,接合试验显示含blaCTX-M-3和blaCMY-2基因耐药质粒可以通过接合转移至受体菌大肠埃希菌J53。结论 CFR同时携带有ESBLs和AmpCβ-内酰胺酶基因,ESBLs基因和AmpCβ-内酰胺酶基因由质粒介导。 展开更多
关键词 弗氏柠檬酸杆菌 产超广谱Β-内酰胺酶 ctx-m-3 AMPC β-内酰胺酶 CMY-2
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