10-23脱氧核酶对CTX-M-38型超广谱β-内酰胺酶的抑制作用

目的:探讨10-23脱氧核酶(10-23DRz)抑制CTX-M-38型ESBLs的可行性。方法:依据CTX-M-38型ESBLs序列及其mRNA构象特征,设计针对其mRNA结构的10-23DRz脱氧核酸序列及反义核酸序列;采用氯化钙法对10-23DRz及反义核酸进行转化;依据转化菌在平板上菌落形成状况及菌液吸光度选择10-23DRz应用量;采用K-B法体外药敏试验检测耐药活性。结果:45nmol10-23DRz用量时转化菌菌落形成量及菌液吸光度较为理想。除哌拉西林、头孢噻肟及亚胺培南外,其他抗菌药物10-23DRz组与反义核酸组抑菌环直径间差异有统计学意义(P均<0.001)。结论:10-23DRz可抑制CTX-M-38型ESBLs的表达。

CTX-M-38型超广谱β-内酰胺酶快速检测方法的建立

目的:建立一种CTX-M-38型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的快速检测方法。方法:采用梅花形双向琼脂扩散实验检测酶蛋白与抗体反应最适比;根据双抗体夹心法原理设计酶联免疫吸附实验(ELISA)检测试剂盒;平行测定30次BL21-pET-28a-CTX-M-38转化子表达产物,检测批内变异;分别采用所建立的ELISA法与PCR技术对146株产ESBLs大肠埃希菌进行检测,评价方法特异性;对27株非产CTX-M-38型产酶大肠埃希菌进行检测,计算假阳性率;对产CTX-M-38型ESBLs菌株不同时间段培养液进行检测,明确最适检测时间。结果:抗体与4 h培养物反应最适比为1∶64;批内检测结果变异系数为1.525%;PCR及所建立的ELISA法检测产CTX-M-38型ESBLs菌株的检出率分别为4.11%和7.53%(χ2=2.286,P=0.131);交叉反应中存在假阳性现象(1/27);产酶菌株培养4 h后进行ESBLs检测较为合适。结论:所建立的方法适用于临床产CTX-M-38型ESBLs菌株的检测。