大肠埃希菌CTX-M-9组超广谱β-内酰胺酶耐药基因研究

目的了解CTX-M-9组超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),在温州地区分离的产ESBLs大肠埃希菌中的分布,分析CTX-M-9组基因的种类、数量以及多态性。方法收集2005-2006年临床分离非重复的145株ESBLs大肠埃希菌,纸片扩散法检测ESBLs,聚合酶链反应(PCR)检测CTX-M-9组ESBLs基因,对PCR产物进行测序以确定基因型,核酸序列比对分析SNPs位点。结果 145株ESBLs大肠埃希菌中,114株携带CTX-M-9组基因,阳性率78.6%;其中2005年73株中CTX-M-9组基因阳性60株占82.2%,2006年72株中阳性54株占75.0%,各阳性菌株的ESBLs基因均与CTX-M-9组中的CTX-M-14型相似,25株菌的CTX-M-14基因5个位点发生点突变,造成80、158、242、275位氨基酸改变。结论温州地区大肠埃希菌CTX-M-9组ESBLs耐药基因传播情况严重,检测到的均与CTX-M-14型相似,部分样本有点突变,并引起相应的氨基酸的改变。

CTX-M-9亚群鸡大肠杆菌的遗传背景及毒力基因特性

探讨鸡大肠杆菌bla_(CTX-M-9)的遗传背景和毒力因子流行特征,为进一步研究bla_(CTX-M-9)与致病特性是否相关奠定基础。取近年来收集的17株产CTX-M-9族鸡大肠杆菌为研究对象,分别采用定位PCR、多重PCR等技术检测受试菌株的种系发育、MLST序列、质粒复制子特性、bla_(CTX-M-9)的上、下游基因环境及其携带的31种毒力基因。结果显示,bla_(CTX-M-9)的上游均含有ISEcpl,部分被IS26截断,下游最常见的是IS903。受试菌ST分型多样化,17株菌分别属于12种不同的ST型。受试菌携带3种以上复制子,最常见的是IncFII复制子,其次为IncFIB、IncK和IncI1型。受试菌分属于种系发育的D群(7株)、B1群(6株)和A群(4株),未检出强致病力的B2群菌株。受试菌均含有fimH、traT和feoB毒力基因,同时毒力基因检测率较高的还有sit A、iut A、iucC、iroN和iss基因。结果表明,ISEcpl和IS903转座子、IncF在bla_(CTX-M-9)快速散播过程中发挥了重要的作用,克隆传播仅发挥了次要的作用;产CTX-M-9族鸡大肠杆菌含有较多的毒力基因,具有一定的致病力。

临床分离志贺菌中CTX-M-9型超广谱β-内酰胺酶基因分析

目的:了解本地区临床分离志贺菌中CTX-M-9型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)分布,分析CTX-M-9型基因的种类、数量以及多态性。方法:收集2008年-2011年本地区临床分离非重复的志贺菌94株,聚合酶链反应(PCR)检测CTX-M-9型ESBLs基因,对PCR阳性产物进行测序,测序结果在GenBank上比对确定基因亚型,并通过DNAman软件对核酸序列进行分析,确定SNPs位点。结果:94株志贺菌中,17株携带CTX-M-9型ESBLs基因,阳性率18.09%,并在福氏志贺菌、宋内志贺菌和鲍氏志贺菌中均有检出。对DNA序列进行比对、分析,均为CTX-M-14亚型,未发现SNPs位点。结论:本地区志贺菌中CTX-M-9型ESBLs以CTX-M-14亚型为主,基因结构稳定,未发生变异,并可广泛在志贺菌各血清型中存在。

全国10所教学医院产ESBLs和质粒AmpC酶大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的研究

目的研究全国10所教学医院临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中同时产ESBLs及质粒型AmpC酶菌株的比率及其基因型特点,比较不同地区间的差别。方法收集来自中国不同地区的10所教学医院2003年度产ESBLs的大肠埃希菌90株和肺炎克雷伯菌61株,用等电聚焦电泳测定β内酰胺酶的等电点;接合试验证实酶基因有无可转移性;采用多重聚合酶链反应(MPCR)及序列分析确定质粒AmpC酶的基因型。结果武汉、南京、济南等地产ESBLs大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌所占比率相近,均在50%左右;北京产ESBLs大肠埃希菌所占比率低于肺炎克雷伯菌;其他各城市产ESBLs大肠埃希菌所占比率均略高于肺炎克雷伯菌。在产ESBLs菌株中24.4%大肠埃希菌和19.4%肺炎克雷伯菌对头孢西丁耐药。除沈阳无对头孢西丁耐药菌株外,其他医院均存在对头孢西丁耐药株。产ESBLs菌株基因型主要为CTX—M型,其中以CTX-M-9组最为常见,其次为CTX-M-1组。在同时产ESBLs和AmpC的菌株中,肺炎克雷伯菌多于大肠埃希菌,且均为CTX-M/ DHA-1型(多为CTX-M-9/DHA-1型)。3株同时产ESBLs和AmpC肺炎克雷伯菌的接合子PCR结果与其供体菌完全相同。结论参与本研究的各所教学医院产ESBLs菌株基因型主要为CTX-M-9组,在同时产ESBLs和AmpC酶的菌株中,肺炎克雷伯菌多于大肠埃希菌,多为CTX-M-9/DHA-1型,该酶可通过质粒传播。

不同CTX-M亚群鸡大肠杆菌毒力基因的流行特征

目的了解CTX-M-1亚群、CTX-M-9亚群与不产CTX-M3类鸡源大肠杆菌毒力基因的流行特征。方法从河南省不同地区分离获得CTX-M-1亚群鸡大肠杆菌33株,CTX-M-9亚群鸡大肠杆菌31株和不产CTX-M的鸡大肠杆菌23株,以多重PCR技术检测受试菌携带33种毒力基因的情况。结果 3类受试菌毒力基因的携带种类趋于一致,其中feoB、fimH、traT和sitA在3类菌中检出率均较高。CTX-M-1亚群鸡大肠杆菌中traT和irp-2基因和CTX-M-9亚群鸡大肠杆菌中iroN、iss和irp-2基因的携带著高于不产CTX-M菌株。CTX-M-1亚群鸡大肠杆菌中cvaC和sfaS的携带率高于CTX-M-9亚群,而iroN和iss的携带率低于CTX-M-9亚群。结论结果表明CTX-M-1与CTX-M-9亚群大肠杆菌部分毒力基因的携带率明显高于不产CTX-M的菌株,CTX-M-9和CTX-M-1亚群鸡大肠杆菌携带的部分毒力基因差异明显,推测产CTX-M鸡大肠杆菌的致病力可能较强,且菌株的致病力可能还与其携带的CTX-M基因亚型有关。

bla_(CTX-M)型鸡大肠杆菌中mcr-1的分子流行病学分析

检测了不同时期从河南省分离的162株bla_(CTX-M)型鸡大肠杆菌对黏菌素的耐药性,进行了耐药基因bla_(CTX-M)和mcr-1的质粒接合试验,并比较了各亚型的水平传播规律。结果表明:随着时间的推移,bla_(CTX-M)型鸡大肠杆菌对黏菌素的耐药率由0%显著增加到42.2%;在头孢噻肟单药筛选下获得的21株接合子有5株同时携带mcr-1,在黏菌素单药筛选下获得的18株接合子有11株同时携带bla_(CTX-M),且bla_(CTX-M)和mcr-1基因的接合频率无明显差异;原菌及对应接合子的bla_(CTX-M)亚型均属于bla_(CTX-M-1)和bla_(CTX-M-9)亚群,部分原菌同时携带两种亚型,但接合子均仅携带一种亚型(bla_(CTX-M-9)亚群)。说明在单一药物(黏菌素或头孢噻肟)的选择性压力下,bla_(CTX-M)和mcr-1基因均易水平传播,且携带bla_(CTX-M)和mcr-1的质粒既可单独转移也可同时转移。

基于MALDI-TOF MS鉴别产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的应用研究

目的探讨基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)快速区分不同基因型产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株的可行性。方法收集2019年1至12月浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院各类无污染体液标本中分离的肠杆菌目菌株共368株。采用MALDI-TOF MS进行菌种鉴定,通过VITEK IICompact进行常规药敏试验及ESBLs筛查试验,筛选产ESBLs以及产碳青霉烯酶的肠杆菌目细菌(CRE)。采用PCR检测CTX-M-1、CTX-M-9、TEM、SHV基因,同时利用ClinProTools 3.0软件对各基因型菌株的质谱峰图进行分析。结果368株肠杆菌目细菌中共有169株产ESBLs,其中CTX-M型130株,以CTX-M-1型的CTX-M-55亚型(39株,占30.0%)、CTX-M-15亚型(34株,占26.2%)和CTX-M-9型的CTX-M-14亚型(38株,占29.2%)为主。共检出大肠埃希菌255株,其中产ESBLs大肠埃希菌152株,以CTX-M-1型(75株,占49.3%)和CTX-M-9型(58株,占38.2%)为主。通过ClinProTools 3.0软件分析发现产CTX-M-9型大肠埃希菌在质荷比为6415 m/z和13664 m/z处具有特征性蛋白峰。结论产ESBLs菌株主要为大肠埃希菌,基因型主要为CTX-M-1型与CTX-M-9型。MALDI-TOF MS可以快速鉴别CTX-M-9型大肠埃希菌,对尽早指导临床用药具有一定意义。

贵阳市多家医院感染产ESBLs大肠埃希菌基因分型研究

目的分析贵阳市多家医院临床分离的大肠埃希氏菌中产CTX-M-9型产超广谱β-内酰胺酶(extended spectrumβ-lactamase,ESBLs)的基因分型。方法收集贵阳市多家医院临床分离的大肠埃希菌74株,经确证非重复产ESBLs大肠埃希菌47株,将已扩增的PCR产物进行基因测序并用NCBI数据库中的BLASTN比对测序结果,从而进行基因分型。结果 74株大肠埃希菌中检出47株产超广谱β-内酰胺酶。PCR扩增结果显示47株ESBLs基因阳性菌株中,33株携带CTX-M-9组基因。随机选取部分PCR扩增阳性产物进行DNA测序分析,结果显示含CTX-M-9组基因阳性菌株的亚型为CTX-M-14型。结论 CTX-M-9型耐药基因为本研究产ESBLs大肠埃希菌主要基因,CTX-M-14型为其变异亚型。