接种EV-A71疫苗后对EV-A71IgM和CV-A16IgM检测结果影响的探讨

目的探讨接种肠道病毒71型(EV-A71)疫苗后对EV-A71IgM和柯萨奇病毒A16型(CV-A16)IgM检测结果的影响。方法采取手足口病患儿的静脉血,用酶联免疫法进行EV-A71IgM和CV-A16IgM检测,检测结果应用统计学软件进行比较分析。结果疫苗接种者与未接种者EV-A71IgM阳性率差异有统计学意义(P<0.01),CV-A16IgM阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。接种疫苗者分组,120~<150组与未接种组阳性率差异无统计学意义(P>0.05);第1剂疫苗“<20d”组EV-A71IgM阳性率(50.0%)除“40~<60”组外与其他组差异有统计学意义(P<0.05);第2剂疫苗,各组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论接种EV-A71疫苗的手足口病患者的EV-A71IgM阳性率高于未接种者(P<0.01),尤其是第1剂接种后20d内,120d后差异无统计学意义(P>0.05),CV-A16IgM阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。

EV-A71和CV-A16感染正常人呼吸道上皮细胞诱导差异性IFN-I产生通路相关基因表达的研究

手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)是一种全球性的传染病,其主要病原体为肠道病毒A组71型(Enterovirus group A 71,EV-A71)和柯萨奇病毒A组16型(cosackievirus A 16,CV-A16)。EV-A71感染易引发重症病例及死亡病例,而CV-A16感染所致的症状普遍较轻,且CV-A16容易引发重复感染,但目前其中的机理仍不清楚。本研究比较了EV-A71与CV-A16感染正常人呼吸道上皮细胞16HBE后I型干扰素(Type I interferon,IFN-Ι)产生相关基因的改变。结果发现EV-A71感染后TLR3、TLR7、RIG-I、MDA5、MAVS、MyD88、IRF3、IRF7、IFNα和IFNβ的基因表达量均发生了显著性地上调,而在CV-A16感染后仅MDA5显著性上调;TLR3和IRF3的基因表达水平显著性地下降,而其它基因表达水平均无显著性地变化。此外,病毒滴度和病毒拷贝数的检测结果显示,CV-A16在16HBE上的复制效率明显高于EV-A71。上述结果提示我们EV-A71和CV-A16感染16HBE对其IFN-I产生相关基因表达的影响完全不一样,且CV-A16更容易感染人呼吸道上皮细胞。本研究为EV-A71和CV-A16引起的临床症状差异的机理研究以及CV-A16重复感染的机理研究提供了线索。

CV-A16和EV-A71感染对肠道上皮细胞间连接分子排布和表达的影响

柯萨奇病毒A组16型(Coxsakievirus A 16,CV-A16)与肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV-A71)是引发手足口病(Hand foot and mouth disease,HFMD)的两种主要病原体,然而两者的致病机理仍未完全被阐明。病毒感染对肠道上皮细胞间连接分子排布和表达直接与病毒感染造成的后果相关。本研究通过右旋糖苷穿透实验、免疫荧光以及蛋白免疫印迹等技术检测了CV-A16和EV-A71感染对肠道上皮细胞系(Intestinal epithelial cell)FHC后细胞通透性的变化以及细胞间连接分子排布和表达情况。研究结果表明,CV-A16和EV-A71感染FHC可导致其通透性显著增强、连接分子Nectin1、Claudin4、Claudin5、ZO-1以及E-Cadherin的排布被破坏,且表达量显著性降低。这一结果提示了CV-A16和EV-A71感染肠道FHC细胞并在细胞中复制引起肠道上皮细胞损伤,导致肠道上皮细胞间连接分子排布的改变和表达量的减少。

基于重组荧光病毒的流式细胞术检测抗CV-A16中和抗体的研究

建立基于重组荧光病毒CV-A16-EGFP的流式快速测定CV-A16感染或免疫动物血清中和抗体效价的方法。在Vero细胞上对不同感染时间点,不同病毒接种量情况下的CV-A16-EGFP病毒的增殖特性进行分析;随后,利用流式检测不同病毒滴度下的EGFP阳性细胞数量、EGFP阳性细胞百分比(%)、及EGFP阳性细胞的平均荧光密度值,并换算出不同病毒滴度与三者之间分别的数值对应关系。最后,以平均荧光密度值作为替代判断病毒病变效应的指标,并利用流式荧光检测及传统微量中和方法对CV-A16感染恒河猴血清及CV-A16免疫的羊血清中和抗体效价进行检测,并对两种方法的检测结果进行比较。在感染后24h,不同的病毒滴度与对应的平均荧光密度值呈良好的线性关系。利用流式荧光检测的CV-A16中和抗体效价与传统的微量中和实验相比,两者检测结果具有较好的线性相关性,线性回归系数为R^2=0.8026;传统的微量中和实验检测的平均中和抗体效价略高于流式荧光检测的中和抗体效价,但是差异无统计学意义(P>0.05)。利用流式荧光检测可以迅速检测CV-A16中和抗体效价,并且实验结果与传统的微量中和实验具有较好的一致性。相比与传统方法,该方法更简单、快速、灵敏,为CV-A16抗血清的中和抗体检测提供参考。

CV-A16感染沙鼠细胞因子和趋化因子的动态变化分析

柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CV-A16)是导致手足口病的病原体之一,CV-A16感染后宿主的外周血细胞的细胞因子表达变化的报道较少,也未见有关血清中细胞因子含量在感染前后的表达变化。为了分析CV-A16感染的不同严重程度的沙鼠细胞因子和趋化因子的动态变化。通过腹腔注射CV-A16构建CV-A16感染发病模型,应用流式细胞术、实时荧光定量RT-PCR和ELISA法检测病毒载量、血清炎症因子和趋化因子水平动态变化。CV-A16感染后重症沙鼠的临床症状,包括体重下降程度、临床症状分值以及死亡率均显著高于轻症沙鼠,并且重症沙鼠外周血白细胞比例和升高趋势总体上高于轻症感染沙鼠;重症感染沙鼠全血中细胞因子IL-2、IL-12、IFN-γ和TNF-α的mRNA转录水平上调,IL-4、IL-10、IL-8和IP-10的mRNA转录水平下调;并且CV-A16感染后重症沙鼠血清中的TNF-α和IFN-γ含量显著上升,IL-8和IP-10的含量显著下降。结论为重症沙鼠全血和血清中存在多种趋化和炎症因子上调,可能与Th1炎症失调有关。

肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16鼠源性广谱中和活性单克隆抗体的制备

目的制备可以同时阻断肠道病毒71型(EV71)及柯萨奇病毒A组16型(CV-A16)感染的中和活性单克隆抗体(mAb)。方法采用EV71病毒体蛋白1(VP1)羧基端的163~177位氨基酸(SP55)免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备mAb,用EV71中和抗原表位SP55以及高度同源的CV-A16 VP1羧基端的第163~177位氨基酸(PEP55)同时进行检测,筛选同时与EV71和CV-A16发生交叉反应的mAb,并进行体外中和试验检测对EV71和CV-A16的中和作用,并分析mAb的生物学特性。结果筛选获得1株可以同时中和EV71及CV-A16的mAb 6E5,其重链为IgG1亚类,轻链为Kappa链;细胞微量中和实验表明其抗EV71感染的中和效价为1∶128,抗CV-A16感染的中和效价为1∶32。结论成功获得1株能同时中和EV71及CV-A16的广谱中和活性mAb。

2016—2020年安徽省手足口病相关柯萨奇病毒A组16型分子分型研究

目的了解安徽省手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)相关柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CV-A16)基因型别分布情况。方法通过中国疾病预防控制信息系统传染病报告管理信息系统收集安徽省2016—2020年HFMD病例资料,并收集HFMD患儿咽拭子标本。对荧光定量PCR检出的CV-A16核酸阳性病例样本采用RT-PCR扩增VP1区基因片段并测序。运用肠道病毒在线分型工具确定基因型别,再利用MEGA 6.0生物软件构建CV-A16 VP1区基因进化树并分析VP1区氨基酸变异位点。结果2016—2020年安徽省累计报告HFMD实验室确诊病例16650例,其中CV-A16确诊病例3809例(占22.88%),各年中CV-A16确诊病例占比依次为20.72%(219/1057)、22.91%(677/2955)、23.89%(1004/4202)、42.58%(1687/3962)、4.96%(222/4474)。对获取的436份CV-A16阳性标本进行测序,获得290条VP1区基因序列,均属于B基因型,其中B1a基因亚型65条,B1b 225条。290条VP1区基因序列核苷酸同源性为86.80%~100.00%,与CV-A16原型株G-10核苷酸同源性为74.10%~76.80%。65条B1a毒株VP1区基因序列与B1a参考株核苷酸同源性为93.00%~99.90%,225条B1b毒株VP1区基因序列与B1b参考株核苷酸同源性为88.40%~99.60%。B1a基因亚型流行株在遗传进化上分为4个分支簇,B1b基因亚型流行株在遗传进化上分为6个分支簇。与原型株G-10 VP1区编码氨基酸位点变异分析显示,290条VP1区基因存在多个位点变异。结论2016—2020年安徽省HFMD CV-A16流行株B1a与B1b基因亚型二者共同流行,应持续关注安徽省肠道病毒病原监测与分子进化变异情况。

2017—2019年浙江省手足口病病原学特征分析

目的:分析2017—2019年浙江省手足口病的病原学特征,为制定手足口病防治措施提供依据。方法:从中国疾病预防控制中心传染病报告信息系统中获取2017—2019年浙江省手足口病监测数据和病原学数据,运用描述性流行病学方法分析浙江省手足口病的病原学特征。结果:2017—2019年浙江省报告手足口病实验室确诊病例分别为3 437例、4 329例和3 540例。病原学检测结果显示,EV-A71所占比例从2017年的22.6%持续下降到2019年的1.8%,CV-A16和CV-A6所占比例分别从2017年的17.1%和7.3%上升到2019年的40.6%和33.1%。CV-A16和CV-A6竞争成为肠道病毒生态中的优势血清型。与2008—2016年相比,浙江省手足口病EV-A71构成比和重症比例都呈下降趋势,但报告发病率并未呈现下降趋势。结论:EV-A71疫苗的主要作用在于预防重症手足口病,由于病原谱的变化,疫苗对降低手足口病发病率的作用并不显著,需要密切监测手足口病病原谱的变化和积极研发多价手足口病疫苗。

2013～2017年沈阳市手足口病的流行病学特征分析

目的对沈阳市手足口病数据进行流行病学和病原学分析,为科学防控手足口病提供依据。方法应用SPSS 19.0统计学软件对2013～2017年手足口病监测数据进行流行病学分析,并对地区分布和病原学指标进行统计、检验。结果 2013～2017年,沈阳市手足口病出现先升高后回落的现象,并呈周期性趋势,沈阳市手足口病高发地区在城乡结合的郊区,市内5区及县病例数较少,5年平均发病率比较,差异有统计学意义(χ~2=7919.35,P<0.001)。患者发病主要集中在5～9月,发病高峰期7～8月,全年均有发病。病例发病人群以5岁及以下儿童,特别是2岁组和3岁组的散居和幼托儿童为主。2013～2017年,沈阳市实验室诊断病例1349例,占病例总数的3.92%。肠道病毒71型(EV-A71)、柯萨奇病毒A16型(CV-A16)、其他肠道病毒在这5年期间呈现此消彼长态势,出现了三者交替规律,三者除2014年外,其他差异均有统计学意义(χ~2=381.99,P<0.001)。结论手足口病的发病率呈周期性趋势,可出现2～3年的周期性流行,加强对存在卫生条件和卫生习惯差、人口密集度等高危地区地区和人群的健康宣传是防制手足口病的重中之重。

PCR-荧光探针法检测手足口病患儿感染情况临床分析

目的对手足口病患儿的临床资料进行系统的回顾性分析,研究本地区肠道病毒A组71型(EV-A71)、柯萨奇病毒A组16型(CV-A16)在患儿肠道病毒感染中的情况,以便提前对手足口病的发生与发展做好防控。方法研究对象为手足口病患儿1084例,研究时间为2016年8月~2019年7月,其中重症手足口病162例,普通手足口病922例,采用PCR-荧光探针法检测手足口病患儿肠道病毒感染情况。结果2016年8月~2019年7月手足口病发病数逐年上升,但在法定传染病中占比逐年下降,而在丙类传染病中略微上升后再下降,总发病率呈下降趋势,重症病例和发病率呈现双升高状态,手足口病主要发生在5岁以下人群,发病例数和重症例数随年龄上升到1岁达最高峰,CV-A16病例逐年上升,而EV-A71病例逐年下降。结论1岁儿童是手足口病发病例数和重症例数的高峰期,CV-A16有逐渐流行的趋势,医院、医护人员和家属的口腔和心理护理、饮食习惯和衣物消毒灭菌等防控措施利于手足口病的恢复。

2016年至2017年广州市手足口病流行病学及非肠道病毒A组71型非柯萨奇病毒A组16型肠道病毒型别分析

目的了解2016年至2017年广州市手足口病流行病学及非肠道病毒A组71型(enterovirus 71, EV-A71)病毒非柯萨奇病毒A组16型(coxsaekievirus group A 16,CV-A16)病毒的分子流行病学特征,为其治疗和防控提供依据。方法运用荧光反转录-PCR对2016年至2017年疑似手足口病患者标本同时进行EV通用型、EV-A71、CV-A16检测,并选取EV-A71和CV-A16是阴性而EV通用型是阳性的标本进行型别鉴定,设计5′非编码区(UTR)引物,RT-PCR扩增后进行序列测定,用BLAST程序进行序列的EV型别确定。结果2016年至2017年同时进行EV通用型、EV-A71型、CV-A16型3类病毒的疑似手足口病例标本共25 779份,总阳性16 300份,阳性率为63.23%;其中EV-A71阳性1 178份,占4.57%;CV-A16阳性3 274份,占12.70%;非EV-A71非CV-A16EV阳性标本11 848份,占45.96%。2017年非EV-A71非CV-A16EV全年平均检出率(55.68%)比2016年检出率(35.14%)更高。95份非EV-A71非CV-Al6阳性标本的序列分析结果有16种型别,分别为CV-A6、CV-A10、CV-A4、CV-A2、CV-A8、CV-A12、CV-A9、CV-B5、CV-B2、CV-B4、CV-B3、E1、E16、E30、E2和E18,其中CV-A6占主,(26.32%),其次是CV-A10(15.79%),这两种病毒占到非EV-A71非CV-A16EV的42.11%。结论2016年至2017年EV-A71感染较低,2016年4月至7月CV-A16存在一个感染小高峰。2016年至2017年手足口病主要以非EV-A71非CV-A16为主,序列分析表明非EV-A71非CV-A16中以CV-A6和CV-A10为主,应加强对以CV-A6、CV-A10为主的非EV-A71非CV-A16的研究及监测。

不同灭活剂对柯萨奇病毒A组16型免疫原性的影响

目的评价甲醛及β-丙内酯对纯化柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CV-A16)灭活效果及免疫原性的影响。方法将制备的CV-A16-168病毒液经浓缩、纯化后,用不同浓度甲醛(1∶400、1∶2000、1∶4000、1∶8000)及β-丙内酯(1∶1000、1∶2000、1∶3000、1∶4000)灭活,CV-A16抗原ELISA检测试剂盒检测抗原含量,确定最适灭活浓度。用1∶4000甲醛及1∶2000β-丙内酯灭活CV-A16-168,按抗原含量分别制备为640和320 U/mL,加入Al(OH)3佐剂,制备灭活CV-A16-168实验疫苗,免疫BALB/c小鼠2次,间隔28 d,于首次免疫后28、35 d采血分离血清,采用体外微量中和试验检测小鼠血清中和抗体效价,流式细胞术检测血清细胞因子水平。将甲醛灭活和β-丙内酯灭活实验疫苗分别腹腔注射5只BALB/c雌鼠和雄鼠2次,间隔28 d,初免后7 d,雌雄小鼠合笼,怀孕后取出单独饲养,待乳鼠出生48 h内,分别用CV-A16-G10株(原型株,A基因型)、CV-A16-154株(B基因型)及CVA16-G20株(B基因型)进行1000 LD50的病毒株颅内注射,观察21 d乳鼠的临床症状及生存情况。结果1∶4000甲醛37℃3 d及1∶2000β-丙内酯4℃24 h均可完全灭活CV-A16-168。小鼠经灭活CV-A16-168实验疫苗免疫后,血清中和抗体阳转率均达到100%,甲醛灭活抗原含量640和320 U/mL组抗体GMT分别为1∶7131.55和1∶5042.77,平均增长42.2和45.3倍;β-丙内酯灭活抗原含量640和320 U/mL组抗体GMT分别为1∶10085.54和1∶6208.38,平均增长42.2和48.5倍;不同灭活剂处理的相同抗原含量间抗体GMT差异无统计学意义(P均>0.05),但组内二次免疫间的抗体GMT差异有统计学意义(P<0.001);甲醛和β-丙内酯灭活实验疫苗免疫小鼠后均诱导产生IFNγ,抗原含量640与320 U/mL组比较,有显著升高(P<0.001)。乳鼠经CV-A16不同基因型毒株攻毒,观察21 d后,全部存活,母传抗体可对不同基因型毒株颅内注射攻毒的乳鼠产生100%的保护。结论1∶4000甲醛及1∶2000β-丙内酯均可完全灭活CV-A16,灭活后的免疫原性无显著差异,为CV-A16灭活疫苗的开发及研究奠定了基础。

表达趋化因子配体13的重组A组16型柯萨奇病毒的构建

柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CV-A16)是小核糖核酸病毒科肠道病毒属病毒,是手足口病(Hand,foot and mouse disease,HFMD)的主要病原体之一。CV-A16在世界范围内广泛流行,但目前还没有有效预防CV-A16感染的疫苗上市,CV-A16疫苗的研发仍处于实验室研究阶段。本研究从改善CV-A16诱导体液免疫能力的角度出发,利用反向遗传学手段构建共表达趋化因子配体13的重组A组16型柯萨奇病毒(Coxsackievirus A16-Chemokine(C-X-C motif)ligand 13,CV-A16-CXCL13)。首先利用全基因合成方法设计合成MluⅠ-T7-5'UTR-CXCL13-VP4-VP2-NdeⅠ片段,将该片段插入pCR-XL-TOPO-CV-A16载体中,获得pCR-XL-TOPO-CV-A16-CXCL13克隆载体。将该载体线性化,体外转录出重组病毒RNA并转染细胞,最终获得包装成功的CV-A16-CXCL13重组病毒。使用PCR检测到病毒感染细胞后趋化因子配体13(Chemokine (C-X-C motif) ligand 13,CXCL13)及结构蛋白VP1在基因水平的表达;免疫印记及免疫荧光结果检测到(CXCL13与VP1蛋白水平的表达;电镜结果显示重组病毒为直径20～30nm球状颗粒;增殖曲线显示重组病毒能够在细胞中正常复制。本研究成功构建了CV-A16-CXCL13病毒,为CV-A16感染特征的研究和疫苗研发提供参考。

2015年山东省烟台地区柯萨奇病毒A组16型VP1区基因特征分析

目的研究2015年山东省烟台地区手足口病(hand,foot,and mouth disease,HFMD)的病原谱,并分析病原谱中柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CV-A16)流行株的进化及VP1区重要氨基酸位点的变异情况。方法采用实时荧光逆转录聚合酶链反应方法,对2015年烟台地区采集于HFMD患者的696份样品进行肠道病毒(enterovirus,EV)核酸检测和分子定型。根据EV的优势血清型,选取10株CV-A16扩增VP1区,并进行核苷酸序列及系统发育分析。结果从696份标本中检出EV 412株,其中101株为CV-A16,76株为EV-A71型。10株CV-A16的核苷酸序列相似性为88.4%~99.9%,氨基酸序列相似性为98.6%~100%。10株CV-A16烟台株分别属于B基因型的B1a和B1b进化分支,其中B1b进化分支为优势株。与参考株Tainan/5079/98(AF177911)相比,10株CVA16分离株氨基酸序列的第11、23、99、145、289位氨基酸出现突变,10株分离株的这些位点也有不同,表明烟台地区的CV-A16有其独特的突变位点。结论 CV-A16是引起2015年烟台地区HFMD发病的常见病原体,本次分离到的CV-A16均属于B基因型的Bla和B1b进化分支。

2019年云南省怒江州柯萨奇病毒A组16型的分子流行病学研究

目的了解2019年云南省怒江州柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CV-A16)毒株的分子流行病学特征,积累CV-A16的基因信息。方法对2019年云南省怒江州疾病预防控制中心手足口病实验室从手足口病患者中检测到的58株CV-A16毒株进行VP1区基因扩增、测序,采用Mega5.2软件和邻位相接法(neighbor-joining method)进行基因特征和分子流行病学分析。结果2019年云南省怒江州CV-A16毒株VP1区基因由891个核苷酸组成,共编码297个氨基酸。基因进化分析表明2019年怒江州58株CV-A16毒株中,57株(98.28%,57/58)为B1b亚型,1株(NJ134/YN/CHN/2019,简称NJ134)为B1c亚型(1.72%,1/58),未分离到B1a亚型和其他基因型。NJ134株与印度株的核苷酸一致性为95.30%~97.60%,氨基酸同源性为99.70%~100.00%,NJ134株最接近印度株,推测其来自印度。结论2019年云南省怒江州CV-A16毒株以B1b亚型为主,同时发现了1株B1c亚型,为国内首次发现。

柯萨奇病毒A16疫苗候选株免疫效果评价

目的研究柯萨奇病毒A16型(CV-A16)疫苗候选株不同形态病毒颗粒与不同佐剂配伍后在小鼠模型中的免疫原性和保护性.方法将不同佐剂与不同剂量的CV-A16疫苗候选株纯化抗原配制成疫苗,免疫小鼠后检测小鼠血清内抗CV-A16的总抗体水平以及中和抗体水平,并评价母传抗体对新生乳鼠的保护作用.结果CV-A16疫苗候选株可在小鼠体内诱导高水平的体液免疫应答,免疫后的小鼠血清中和抗体水平可达8192,并可交叉中和CV-A16病毒原型株(A型)以及异源亚基因型(B2b).疫苗免疫母鼠生产的乳鼠在被10000LD50的同源或异源CV-A16病毒攻击后,可免于发病和死亡.结论CV-A16疫苗候选株具有良好的免疫原性和保护性,可作为CV-A16灭活疫苗或多价手足口病灭活疫苗的候选毒株.

2014—2022年淄博市手足口病病原谱变化及基因特征分析

目的分析山东省淄博市2014—2022年手足口病(hand,foot,and mouth disease,HFMD)病原谱的构成变化,掌握淄博市手足口病主要致病原的流行规律,为手足口病预防控制工作提出建议及参考依据。方法采用实时荧光反转录PCR(RT-PCR)方法对来自2014—2022年间淄博市的4053份咽拭子样本进行肠道病毒核酸检测,选择人横纹肌肉瘤(human rhabdomyosarcoma,RD)细胞培养阳性分离物进行肠道病毒VP1区扩增及测序,从GenBank中选取不同基因型别参考序列,用MAGA 11.0软件中邻接法(neighbor-joining,NJ)构建系统进化树,并采用DNAStar Mega Align软件对VP1区序列进行同源性比对分析。结果共采集淄博市手足口病患儿咽拭子样本4053份,核酸检测结果显示:样本的总阳性率为70.91%,3~6岁的幼托儿童阳性率最高(72.50%);2014年的优势血清型为EV-A71,2015年、2017年和2018年的优势血清型为非EV-A71和CVA16的其他肠道病毒,2016年和2019年的优势血清型为CVA16,2020年之后的优势血清型均为非EV-A71和CVA16的其他肠道病毒;淄博市手足口病发病高峰以5~8月为主,6月为高峰。不同区县的HFMD病原谱分布差异有统计学意义(χ^(2)=48.841,P<0.05);对获得的63份阳性毒株分离物进行测序后比对分析,显示淄博市存在6种肠道病毒CVA10(28.57%)、CVA16(17.46%)、CVA6(7.94%)、CV-A2(6.35%)、CV-A4(12.70%)和EV-A71(26.98%)。进化分析及同源性分析结果显示淄博市HFMD病例EV-A71毒株呈现高度集中,均为C4a亚型,其毒株间VP1区核苷酸同源性为92.50%~100.00%,HFMD病例CVA16毒株均属于B1亚型,其中B1a占36.36%,B1b占63.64%,存在B1a和B1b亚型共流行,其毒株间VP1区核苷酸同源性为88.10%~100.00%。结论2014—2022年淄博市手足口病原谱呈现多样性,2014—2019年,淄博市手足口病优势毒株交替出现,自2020年开始逐渐转变为以非EV-A71非CVA16的其他肠道病毒为主。3~6岁托幼儿童为重点人群,应重点开展其他肠道病毒的检测和VP1区的分型工作,以期了解本地HFMD流行规律,控制疾病流行。

2012-2018年开封市手足口病病原学监测分析

目的了解2012-2018年开封市手足口病的病原型别及分布特征。方法2012年1月至2018年12月逐月采集开封市儿童医院临床诊断为疑似手足口病病例的粪便标本2437例,应用实时荧光PCR法对肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组16型(CV-A16)和其他肠道病毒(PE)核酸进行检测。结果2437例标本中,检出肠道病毒阳性1883例,阳性检出率为92.44%,其中EV71、CV-A16的阳性率分别为48.71%、12.27%,PE阳性率为32.25%。EV71的占比有逐年降低的趋势,PE的占比有逐年增加的趋势。送检的临床诊断病例中3岁内的婴幼儿占比高达88.31%,3岁以下和3岁以上儿童病原谱差异及性别间病原谱差异均无统计学意义。结论2012-2018年引起手足口病的主要病原是EV71,但PE的构成比呈上升趋势,需要持续关注病原谱变化。3岁内婴幼儿是手足口病主要感染人群,应重点关注。

2013～2015年中国重症手足口病的流行病学特征和病原构成

为阐明中国重症手足口病流行特征及病原构成情况,我们收集2013～2015年中国大陆地区上报的44 754例重症手足口病病例,按地理分布对不同地区重症手足口病的流行特征及病原构成进行分析。2013～2015各年重症发病数及占全部重症病例数的比例分别为10 276（22.96%）,24 654（55.09%）和9 824（21.95%）。91.35%的重症手足口病患者为0～3岁。发病人群中,男/女性别比为1.72：1,散居儿童占87.02%。七大区病原构成以肠道病毒71型（Enterovirus 71,EV71）为主,但其他EV在2015年东北、华南、华北、西北4个区病原谱的构成比均较2013年升高,华北的增幅最大（30.92%增至59.74%）。不同行政区确诊病例占同期重症病例数的构成比的差异具有统计学意义（χ^2=1 784.04,P〈0.001）。结果表明,在东北、华南、华北、西北4个区中,其他EV在重症手足口病的病原谱中的构成比不断增加,应重点关注其感染流行,并制定针对性的防控措施。

2015-2019年北京佑安医院手足口病特征分析

目的分析2015-2019年北京佑安医院手足口病的病原谱及流行病学特征。方法采用描述性流行病学方法分析2015-2019年在北京佑安医院就诊的手足口病病例,结合测定的基因序列对部分非肠道病毒A组71型(enterovirus A71, EV-A71)和非柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A, CV-A16)的其他肠道病毒进行基因分型。结果 2015-2019年北京佑安医院就诊的手足口病病例累计3 894例,EV-A71、CV-A16和其他肠道病毒病例的构成比分别为16.3%(636/3 894)、15.3%(594/3 894)和68.4%(2 664/3 894)。病例数自2017年显著降低,其他肠道病毒所占比例逐渐增高,2018-2019年EV-A71所占比例显著降低,2019年CV-A16所占比例回升。0~6岁的手足口病病例占总病例数的89.3%(3 479/3 894);非EV-A71和非CV-A16的其他肠道病毒感染患者的年龄偏小(H=33.327,P<0.001);病例中男女性别比例为1.56∶1;成年人感染占5.2%(201/3 894)。其他肠道病毒感染病例发病高峰后移是2017年后手足口病发病高峰从6月后移至7-8月的主要原因。2018-2019年成功鉴定的42例其他肠道病毒标本中,CV-A6所占比例最高,达64.3%(27/42),还有CV-A10、CV-A16、CV-A2和CV-A5等多种病原共流行。结论北京佑安医院就诊的手足口病病例数自2017年显著且持续降低,5年间非EV-A71和非CV-A16的其他肠道病毒是主要病原并显现出新的流行特征,应持续关注并加强监测。