CVB感染在上海地区小儿常见疾病发病中的地位及年龄特点

为探讨柯萨奇B组病毒 (CVB)感染在上海地区小儿常见疾病发病中的地位及年龄特点 ,作者对96 7例住院患儿进行了血清CVB抗原 (CVB Ag)及CVB特异性IgM抗体 (CVB IgM )的检测。结果发现 ,上呼吸道感染组、下呼吸道感染组、心肌炎组、哮喘组、ITP组、过敏性紫癜组CVB Ag及CVB IgM阳性率均高于对照组 ,0～ 1岁组及 1～ 3岁组CVB阳性者主要是呼吸道感染患儿 ,此后随年龄增长 ,阳性者中呼吸道感染者逐渐减少 ,心肌炎比例逐渐上升 ,同时 ,过敏性紫癜、ITP患儿的比例亦上升 ,而哮喘在各年龄组均占一定比例。结果提示除呼吸道感染外 ,CVB在小儿心肌炎、哮喘、ITP。

柯萨奇病毒B3(CVB3)通过激活NADK2促进小鼠巨噬细胞NLRP3的活化

目的研究在柯萨奇病毒B3(CVB3)刺激下,小鼠巨噬细胞中含pyrin结构域NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)表达的变化及机制。方法CVB3刺激RAW264.7细胞、小鼠原代(骨髓来源或腹腔)巨噬细胞以及感染NLRP3短发夹RNA(shRNA-NLRP3)慢病毒的RAW264.7细胞,实时荧光定量PCR检测NLRP3和白细胞介素1β(IL-1β)表达水平;ELISA检测细胞上清中IL-1β的含量;Western blot法检测NLRP3蛋白的变化,免疫共沉淀(Co-IP)法检测NLRP3相互作用蛋白的表达。结果CVB3刺激RAW264.7细胞、骨髓来源或腹腔巨噬细胞后,NLRP3和IL-1β表达明显升高;下调NLRP3后,IL-1β分泌明显减少;NLRP3抗体Co-IP所得复合物银染,组间差异蛋白经质谱分析鉴定为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶2(NADK2),证明CVB3诱导NADK2与NLRP3相互作用。结论CVB3通过激活NADK2促进巨噬细胞NLRP3活化,增加炎症因子IL-1β表达和释放。

低硒、氧化应激及CVB感染在克山病发病机制中的作用

目的 研究低硒、氧化应激和柯萨奇B组病毒 (CoxsackievirusB ,CVB)感染在克山病发病中的作用。方法 检测了陕西省黄陵县 30例潜在型、慢型克山病患者血清CVB IgM抗体、硒水平、总抗氧化能力以及脂质过氧化物 (LipidPeroxide,LPO)。健康对照选自黄陵县克山病病区和非病区西安市。结果 ①克山病患者组CVB IgM阳性率显著高于病区和非病区健康组 ,分别为 43.3%vs 1 5 %和 43.3%vs 1 0 % ,P <0 .0 1 ;②克山病患者和病区健康居民血清硒水平和总抗氧化能力显著低于非病区西安人群 (P <0 .0 5 ) ,但克山病患者血清LPO水平显著高于两健康组 (P <0 .0 5 ) ;③克山病患者CVB IgM( + )者血清Se水平、总抗氧化能力显著低于CVB IgM( - )患者和病区健康组CVB IgM ( + )和CVB IgM ( - )者 (P <0 .0 5 ) ;克山病患者CVB IgM( + )血清LPO水平显著高于其他各组 (P <0 .0 5 )。结论 低硒。

Balb/c小鼠CVB_3病毒性扩张型心肌病并心力衰竭模型的建立

目的 建立慢性病毒性心肌炎、扩张型心肌病并心力衰竭的实验模型。方法 用CVB3 反复感染Balb/c小鼠 ,分别于感染后第 1、3、6、9个月不同时点 ,采用超声心动图观察小鼠左心室收缩期及舒张末期内径及射血分数。取心肌经HE染色观察其病理形态特征 ,VG染色观察心肌纤维化 ,及原位末端标记法观察细胞凋亡。结果 B超发现 ,感染病毒后小鼠左心室收缩末期及舒张末期内径增大 ,左心室射血分数 (EF)下降 ,与正常小鼠相比P <0 .0 5。反复感染病毒 3个月内组织病理学特征与慢性心肌炎类似 ,而 3个月后则呈现出典型的扩张型心肌病理特征。在慢性期主要是病变部位的炎症细胞及心肌细胞凋亡 ,而扩张型心肌病期出现心肌细胞散在性凋亡。结论 Balb/c小鼠反复感染病毒可能是慢性心肌炎演变为扩张型心肌病并心力衰竭的良好的实验模型 ;

柴胡 黄芩 炙甘草对小鼠CVB3心肌炎治疗作用的研究

目的 探讨单剂柴胡、黄芩、炙甘草对柯萨奇病毒B3(CVB3)感染的病毒性心肌炎小鼠的治疗作用。方法 用CVB3感染Balb/C小鼠造成病毒性心肌炎模型 ,分别用生理盐水、柴胡、黄芩、炙甘草灌胃治疗 ,观察病毒感染后不同时间点的心肌组织病理变化。结果 柴胡组小鼠在感染后第 5 ,7,10天心肌病理积分为 1.33±0 .82 ,1.6 0± 0 .6 3和 1.87± 0 .74 ,明显低于对照组 (2 .2 2± 1.37,3.2 7± 0 .96 ,2 .6 0± 1.0 6 ) (P <0 .0 5或 0 .0 1)。炙甘草组小鼠在感染后第 5 ,7天心肌病理积分为 1.2 6± 0 .88和 1.80± 0 .6 8,明显低于相应对照组 (P <0 .0 5或0 .0 1)。黄芩组小鼠在感染第 14 ,2 1天后心肌病理积分 (1.5 3± 0 .74 ,0 .80± 0 .5 6 )与对照组 (2 .33± 0 .98,1.4 0±0 .83)比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 单剂柴胡、黄芩。

反复CVB3m感染对小鼠心肌的影响

目的 研究反复病毒感染对小鼠心肌的损伤 ,观察转化生长因子β1(TGF-β1)在反复病毒性心肌损伤心肌基质胶原重建中的作用。方法 通过 3次反复且增量 CVB3 m病毒感染小鼠 ,建立慢性心肌损伤模型 ,于首次感染后第 74d处死小鼠 ,病理、组织化学及电镜分析心肌病理损伤和胶原系统改变 ,计算胶原容积分数。用EL ISA法测定血清 TGF-β1含量。结果 反复病毒感染后小鼠心功能降低 ,心肌胶原容积分数高于对照组 (P <0 .0 5) ,基质胶原明显增生重建 ,主要表现为瘢痕修复和间质纤维化。反复病毒感染组血清 TGF-β1含量 (0 .10 3 5± 1.2 70 0 ) μg/L 高于对照组 (P <0 .0 5)。结论 反复病毒感染对小鼠心肌的影响主要是基质胶原系统的增生重建 ,持续病毒感染和

黄芩 柴胡及其配伍提取物对心肌炎小鼠心肌组织CVB3m RNA复制及IFNm RNA表达的影响

目的:研究黄芩、柴胡及其配伍提取物对心肌炎小鼠心肌组织CVB3mRNA复制及IFNmRNA表达的影响。方法:将Balb/c小鼠随机分为:柴胡组、黄芩组、配伍组,模型组和正常对照组。腹腔注射CVB3m病毒诱导Balb/c小鼠心肌炎模型,采用RT-PCR技术,检测各组小鼠给药后不同时间点心肌组织中CVB3m RNA的复制和IFNm RNA的表达情况。结果:3个给药组心肌组织中CVB3m-RNA的量明显低于模型对照组,其中黄芩组和配伍物组抗病毒作用明显;柴胡组和配伍组均可诱生干扰素,与模型组比较有显著差异。结论:黄芩提取物组具有明显抗病毒作用;柴胡在疾病早期具有明显抗病毒作用,且具有明显诱生干扰素的作用;配伍提取物组具有明显抗病毒和诱生干扰素作用,在疾病极期表现明显优势。

C家族趋化因子XCL1增强CVB3基因疫苗的抗病毒免疫应答及保护作用

为提高以往构建的基因疫苗pcDNA3.1-VP1的抗B3型柯萨奇病毒(CVB3)感染的免疫效果,以编码C家族趋化因子XCL1的质粒pcDNA3.1-XCL1共注射,观察诱导的CVB3特异性免疫应答及CVB3病毒性心肌炎预防效果。将两种质粒各50μg混合后分别于0、2、4、6周肌注免疫小鼠4次,末次免疫后4周分别以5×LD50剂量CVB3攻击小鼠观察保护率,或以3×LD50剂量CVB3感染小鼠观察病毒性心肌炎的诱生。结果显示,与单纯pcDNA3.1-VP1质粒相比,XCL1质粒共注射可增强血清CVB3特异性IgG以及特异性CTL应答。5×LD50病毒攻击后,共注射组体重降低7.28%,而pcDNA3.1-VP1组体重降低10.97%;共注射组28 d保护率达40%,高于pcDNA3.1-VP1组的30%。3×LD50病毒感染后心肌组织病理显示,共注射组心外膜下仅有轻微炎症,心肌内未见炎症细胞浸润,而pcDNA3.1-VP1组除心外膜下有较多淋巴细胞聚集外,心肌内有少量炎症浸润和坏死灶。提示XCL1质粒共注射可增强CVB3特异性体液和细胞免疫应答及抗病毒保护,可有效预防病毒性心肌炎的发生。

苦参系列生物碱体外抗CVB_3病毒活性

目的研究苦参系列生物碱(Sophora flavescens alkaloids)对柯萨奇B3病毒(CVB3)所致的Vero细胞和大鼠原代心肌细胞病变抑制作用、病毒繁殖抑制反应,并测定其对大鼠原代心肌细胞培养上清液中心肌酶(LDH、CK MB)活性的影响。方法在Vero细胞、大鼠原代心肌细胞中加入不同稀释度苦参系列生物碱后,感染CVB3病毒,观察细胞病变,MTT染色比较各组间活细胞数的变化,病毒繁殖抑制实验比较半数组织感染量(TCID50)的差别;紫外分光光度法测定心肌细胞培养液上清中LDH和CK MB活性。结果槐果碱、苦参碱、槐啶碱在Vero细胞和原代乳鼠心肌细胞试验中可有效抑制CVB3病毒引起的细胞病变(P<0.05,P<0.01);槐果碱对病毒的繁殖有抑制作用(对数值升高一个单位),并可降低心肌细胞释放心肌酶(P<0.05,P<0.01)。结论槐果碱、苦参碱、槐啶碱对CVB3病毒感染的Vero细胞和原代乳鼠心肌细胞具有一定保护作用。对细胞病变(CPE)的抑制作用强弱顺序为:槐果碱>苦参碱>槐定碱>氧化槐果碱、苦豆碱、槐胺碱、槐醇碱。槐果碱对CVB3病毒的繁殖有抑制作用,在一定浓度下可降低心肌酶的释放,其作用机制尚需做进一步探讨。

广枣总黄酮体外抗CVB_3病毒活性

目的:研究广枣总黄酮(TFFC)体外抗柯萨奇B组3型病毒(CVB3)作用及其作用机制,探究其作用靶点,为TFFC进一步开发利用奠定基础。方法:采用差速贴壁法培养原代乳鼠心肌细胞,镜下观察心肌细胞搏动次数,使用α-actin免疫组化法鉴定培养心肌细胞的纯度;在细胞水平测定阳性药盐酸胍以及TFFC的药物毒性;以CVB3感染心肌细胞建立病毒性心肌炎细胞模型;MTT染色分析TFFC对病毒感染后的Hela细胞及心肌细胞是否有保护作用;病毒繁殖抑制实验比较不同分组间TCID50的差别以验证TFFC在Hela细胞及心肌细胞上的抗病毒活性;测定各实验组心肌细胞培养上清液中心肌酶LDH、CK-MB的变化;测定各实验组心肌细胞培养上清液中肿瘤坏死因子TNF-α含量的变化;运用逆转录聚合酶链式反应测定心肌细胞内病毒相关基因的表达。结果:经过在Hela细胞及心肌细胞水平的初筛,确定TFFC具有保护细胞免受CVB3病毒侵袭的作用。病毒繁殖抑制实验显示TFFC的高、中剂量组TCID50与病毒对照组TCID50相差一个以上对数值;TFFC能使心肌酶(LDH、CK-MB)的释放较病毒组显著降低(P<0.05),还可抑制被病毒感染的心肌细胞TNF-α的分泌;同时,TFFC还可明显抑制CVB3相关基因c-Myc、TNF-α、Fas的表达。结论:通过建立病毒性心肌炎细胞模型,证实TFFC在体外细胞培养物上具有抗CVB3病毒活性作用。

酵母双杂交技术筛选与CVB3 VP1直接作用的细胞蛋白

目的以CVB3VP1为诱饵蛋白,筛选与CVB3VP1直接作用的人心脏cDNA文库基因,并对阳性cDNA克隆进行初步分析和鉴定。方法酵母双杂交技术筛选人心脏cDNA文库;经阳性克隆的表型确定、PCR扩增cDNA插入片段和Alu I酶切等试验将阳性克隆归类,并进行测序和同源性比对分析;α-半乳糖苷酶活性定量分析VP1与各阳性蛋白之间相互作用的强弱。结果在人心脏cDNA文库中筛选到5个阳性克隆,分别为:MNAT1(CAK装配因子),GOLGA2(高尔基体基质蛋白GM130),PHR1(视网膜PH结构域蛋白1),LDB1(LI M结构域结合蛋白1),NADH脱氢酶亚单位4。将筛选的GOLGA2cDNA新序列提交给NCBI GenBank数据库,获得Accession Number:AY823636;α-半乳糖苷酶定量分析试验进一步证明了MNAT1、GOLGA2、PHR1和LDB1等4个基因与VP1均有较强的相互作用。结论本研究成功地运用了酵母双杂交技术,以CVB3VP1为诱饵蛋白,从人心脏cDNA文库中获得5种不同类别的阳性基因:MNAT1、GOLGA2、PHR1、LDB1和NADH脱氢酶亚单位4。

中药防治CVB_3病毒性心肌炎实验研究进展

CVB3是病毒性心肌炎的主要致病因素,目前西医对CVB3病毒性心肌炎的治疗尚无特效药物。近年来,中医药对CVB3的治疗取得了一定的成就。大量的动物实验表明,单味药和复方广泛用于CVB3的治疗,具有部分直接杀灭病毒、抑制病毒复制、抗氧化、保护心肌细胞,调节免疫功能以及参与心肌细胞的凋亡等。文章对近年中药防治CVB3病毒性心肌炎从实验研究的角度做一综述。

MDSCs诱导调节性T细胞改善CVB3诱导的病毒性心肌炎

目的探讨骨髓来源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)在CVB3诱导的病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)中的保护作用。方法通过流式细胞术分选获得足量MDSCs,体外证实具有免疫抑制功能后行体内转输实验,观察疗效及免疫机制。结果与对照PBS组相比,MDSCs处理组体质量呈上升趋势,肌酸激酶(CK)活性明显降低(P<0.001),心脏局部炎症浸润及坏死病灶显著减少,7天生存率高达70%(P<0.01),而心肌病毒滴度无明显改变,却上调了CD4+FoxP3+调节性T细胞比例。结论 MDSCs可显著改善CVB3诱导的病毒性心肌炎,有望成为心肌炎防治的新型策略和手段。

不同免疫途径对chitosan-DNA疫苗诱导CVB3特异性免疫应答的影响及其意义

目的 确定新型chitosan DNA疫苗的有效免疫途径。方法 将chitosan pcDNA3 VP1疫分别苗以肌注、口服、滴鼻 3种免疫方式免疫Balb c小鼠 ;以ELISA检测免疫小鼠血清中IgG、IgM、IgA ,评估其特异性体液免疫应答 ;以特异性淋巴细胞增殖反应和CTL活性反映其诱导细胞免疫 ;以 5LD50 致死剂量CVB3攻击免疫小鼠 ,评价不同免疫途径的免疫保护效果。结果 ①在诱导CVB3特异性体液免疫方面 :chitosan pcDNA3 VP1疫苗肌注组诱生了高水平IgM和IgG ,但未能诱生黏膜IgA ;口服免疫组仅诱生低水平的黏膜IgA ,未能诱生特异性IgM和IgG ;滴鼻组可诱生低水平的IgM及高水平的IgG和黏膜IgA。②在诱导CVB3特异性细胞免疫方面 :仅滴鼻组诱导了较高水平的淋巴细胞特异性增殖反应和CTL活性 ;口服组的淋巴细胞增殖活性和CTL活性稍弱 ;肌注组几乎不能诱导特异性细胞免疫应答。③免疫保护作用 :滴鼻组可保护 33.3%小鼠长期存活 ;口服组仅达到 16 .7%的保护率 ;肌注组无保护作用。结论 滴鼻免疫途径可能是chitosan pcDNA3

抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方新制剂抗CVB_3作用

目的通过体内外实验观察抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊K-CoXB-JN复方新制剂对柯萨奇B3(CVB3)病毒感染的心肌细胞和病毒性心肌炎(VMC)小鼠的保护作用。方法体外实验用1000 TCID50的CVB3感染心肌细胞后,分别加入不同浓度的K-CoXB-JN复方新制剂和利巴韦林,并设定正常对照组和模型对照组,当细胞病变达到75%后,测定细胞上清液中肌酸激酶(CK)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)活性;体内实验用CVB3感染Balb/c小鼠造成病毒性心肌炎模型,分别予K-CoXB-JN复方新制剂高、中、低剂量,利巴韦林和纯水连续灌胃14 d,记录小鼠死亡数,观察药物对小鼠的死亡保护情况。结果 K-CoXB-JN复方新制剂可降低CVB3感染的心肌细胞培养上清液中CK、AST、LDH含量,降低病毒性心肌炎小鼠的死亡率,给药组和模型对照组相比较P<0.05。结论 K-CoXB-JN复方新制剂对CVB3感染的心肌细胞和病毒性心肌炎小鼠具有保护作用。

TAV-CP、CVB-CP、CChMVd基因片段的融合及其RNAi载体的构建

番茄不孕病毒(TAV)、菊花B病毒(CVB)、菊花褪绿斑驳类病毒(CChMVd)是侵染菊花的3种主要病毒,严重影响菊花品质。利用Blast及分子生物学软件DNAStar对TAV、CVB、CChMVd基因序列同源性进行分析比较,选用TAV的277 bp(1 810～2 086),CVB的281 bp(496～776),CChMVd的217 bp(109～325)的部分基因片段,应用重叠延伸PCR技术将其拼接成融合基因CBT,构建了以CaMV 35S启动子驱动的含有"正向CBT片段-内含子-反向CBT片段"的RNAi的植物表达载体,为培育抗3种病毒的菊花优异种质资源奠定基础。

CVB3-VP1基因免疫诱导特异性抗病毒免疫应答及保护作用

目的 :构建表达柯萨奇病毒B3(CVB3)主要包膜蛋白VP1的基因疫苗 ,并研究该疫苗诱导CVB3特异性免疫应答及免疫保护的作用。方法 :抽提CVB3RNA ,以RT PCR扩增VP1基因 ,克隆于真核表达载体 pcDNA3中 ,构建质粒pcDNA3 VP1。将该质粒转染Hela细胞 ,观察其表达情况 ;以 5 0 μgpcDNA3 VP1质粒DNA肌注免疫BALB/c小鼠 3次 ,检测CVB3特异性体液和细胞免疫应答。间隔 4wk以 5×LD50 的CVB3攻击小鼠 ,观察攻击后小鼠的存活情况。结果 :构建了重组质粒 pcDNA3 VP1,并在体外获得有效表达。以该质粒肌肉免疫BALB/c小鼠 ,可诱生高水平的IgM和IgG ,VP1多肽特异性淋巴细胞增殖反应及CTL活性均显著高于 pcDNA3免疫的对照组。病毒攻击试验表明 ,pcDNA3 VP1免疫组33.3%小鼠可长期存活 ,其心肌组织未见明显的病理学改变 ;而对照小鼠平均仅存活 6 .7d ,心肌显示大量的局灶性坏死和炎性细胞浸润。结论 :pcDNA3 VP1免疫可诱生CVB3特异性体液及细胞免疫应答 。

IL-15基因真核表达质粒的构建及其对CVB3 VP1基因疫苗的免疫增强作用

目的探讨人白细胞介素 15 (humaninterleukin 15 ,hIL 15 )基因佐剂对柯萨奇B3病毒 (CoxsackievirusB3 ,CVB3 )VP1基因疫苗的免疫增强效果。方法从人胚肺二倍体细胞提取hIL 15的mRNA ,用逆转录 聚合酶链反应 (reversetranscriptase polymerasechainreaction ,RT PCR)扩增出cDNA ,构建成真核表达克隆 pcDNA3 IL 15。将pcDNA3 VP1、pcDNA3 VP1+ pcDNA3 IL 15、pcDNA3 IL 15、pcDNA3和盐水分别肌内注射Balb/c小鼠 ,每次免疫后 6天取血清用微量中和试验测CVB3中和抗体 ,3次免疫后用 80 0TCID5 0CVB3感染小鼠 ,观察小鼠的生存率。结果 pcDNA3 IL 15重组质粒的目的基因与hIL 15基因序列相同 ;pcDNA3 VP1和pcDNA3 VP1+ pcDNA3 IL 15能诱导小鼠产生中和抗体 ,抗体滴度随免疫次数增加而提高 ;pcDNA3 VP1+ pcDNA3 IL 15组抗体滴度和生存率均高于 pcDNA3 VP1组。结论本研究成功构建了hIL 15重组质粒 ,该质粒对真核表达重组质粒 pcDNA3

抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方新制剂对CVB_3感染小鼠的治疗作用

目的观察抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊(K-CoxB-JN复方新制剂)对CVB3感染小鼠的治疗作用。方法用CVB3感染Balb/c小鼠造成病毒性心肌炎模型,分别予K-CoxBJN复方新制剂高、中、低剂量,利巴韦林和纯水灌胃十四天。观察小鼠一般状态、记录死亡数,分别在第7、14天每组随机抽取小鼠标号,称体质量,取血测天冬氨酸转氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)含量活性;之后取心,脾,胸腺称重,计算脏器指数;取心脏放入10%甲醛中固定,HE染色观察心肌病理变化,记录病理积分。结果 K-CoxB-JN复方新制剂能降低病毒性心肌炎小鼠的死亡率和血清中CK、AST含量,给药组和模型对照组相比较P<0.05,并能降低心脏指数和心脏病理积分,但对脾、胸腺指数影响不明显。结论 K-CoxB-JN复方新制剂对CVB3感染的小鼠有治疗作用。