超滤离心法对CVB-D脂质体分离及包封率测定的效果分析

目的:分析超滤离心法对CVB-D脂质体分离及包封率测定的效果。方法:以超滤离心法分离CVB-D脂质体与游离药物,通过UPLC-MS/MS测定CVB-D脂质体总CVB-D含量与游离CVB-D含量,计算出脂质体的包封率。结果:使用超滤离心管以4000 r/min离心30 min,可得CVB-D脂质体游离药物溶液,再以UPLC-MS/MS测定CVB-D含量可得出脂质体的包封率。结论:超滤离心法操作简便,重复性好,可以达到将CVB-D脂质体与游离CVB-D分离的目的,用作CVB-D脂质体的分离并测定包封率。

环维黄杨星D对大鼠肾小管上皮细胞增殖的影响

目的:研究环维黄杨星D对大鼠肾小管上皮细胞的毒性影响。方法:体外培养大鼠肾小管上皮细胞,利用噻唑蓝法(MTT)评价环维黄杨星D(CVB-D)对大鼠肾小管上皮细胞增长抑制的IC50,观察不同浓度药物对细胞形态和细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)活力的影响。结果:CVB-D作用大鼠肾小管上皮细胞48小时后,可明显地抑制细胞增值,其IC50是111.47μmol/L,并且能够导致细胞发生皱缩和空泡化,48小时后细胞上清液中LDH漏出率明显增加。结论:CVB-D在体外对于大鼠肾小管上皮细胞的增殖具有明显的抑制作用。

环维黄杨星D对NaCN致乳鼠心肌细胞损伤的影响

目的 观察环维环杨星D（CVB-D）对心肌细胞缺氧性损伤的保护作用.方法 利用NaCN诱导细胞内缺氧,建立心肌细胞缺氧损伤病理模型,从细胞存活率、LDH外漏释放、细胞凋亡率等方面,观察CVB-D对缺氧损伤心肌细胞的保护作用.结果 CVB-D能明显抑制NaCN造成的心肌细胞死亡、减少细胞内LDH的漏出（P＜0.05～0.01）,并能减少缺氧诱导的心肌细胞凋亡.结论 CVB-D对缺氧损伤心肌细胞具有明显的保护作用,作用机制与清除氧自由基及降低细胞凋亡率有关.

环维黄杨星D对高交感活性诱导大鼠实验性心肌损伤氧化应激及能量代谢的影响

目的:研究环维黄杨星D对高交感活性诱导大鼠实验性心肌损伤氧化应激及能量代谢障碍的改善作用。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、维生素E组及环维黄杨星D低、高剂量组,除正常对照组外其余各组均腹腔注射去甲肾上腺素(Noradrenaline,NE)复制实验性心肌损伤模型,同时灌胃给予相应药物,连续给药16d,期间检测各组动物体质量变化,16 d后进行心指数、羟脯氨酸含量、组织病理学检查、氧化/抗氧化指标(MDA、SOD、CAT、GSH-Px、T-AOC)、能量代谢指标(Na+,K+-ATPase、Ca2+,Mg2+-ATPase)的测定。结果:环维黄杨星D低、高剂量组均不同程度增加动物体质量,降低心指数及羟脯氨酸含量,改善氧化/抗氧化失衡,改善能量代谢障碍。结论:环维黄杨星D对高交感活性诱导的实验性心肌损伤氧化应激及能量代谢障碍具有显著的保护作用。

环维黄杨星D对心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的观察环维黄杨星D(Cvb-D)对异丙肾上腺素(Iso)致心肌缺血模型大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法给大鼠灌服Cvb-D0.55,1.1和2.2mg/kg,连续21d,以Iso复制心肌缺血性模型大鼠,光学显微镜下观察各组大鼠的心肌组织病理学变化,采用末端标记TUNEL法测定Cvb-D对心肌细胞凋亡的影响,以凋亡细胞数占细胞总数的平均百分比表示。结果Cvb-D可显著减轻Iso诱发的心肌缺血致心肌肌纤维排列紊乱,坏死细胞胞浆溶解,坏死间质区炎性细胞浸润等病理改变;Cvb-D可显著抑制Iso诱发的心肌缺血性模型大鼠心肌细胞凋亡。结论Cvb-D具有抗Iso致心肌缺血,改善心肌缺血致细胞凋亡作用。

环维黄杨星D对高交感活性诱导心肌细胞损伤的保护作用

目的:探讨环维黄杨星D(CVB-D)对高交感活性诱导心肌细胞损伤的保护作用并进一步探讨该作用与氧化应激的相关性。方法:体外培养大鼠乳鼠原代心肌细胞,去甲肾上腺素(Noradrenaline,NE)复制心肌细胞损伤模型,应用维生素E(VE)、CVB-D(10、50μmol/L)进行干预;通过心肌细胞形态变化、MTT法、LDH外漏率检测心肌细胞损伤情况;通过SOD活性、MDA含量分析氧化/抗氧化能力。结果:CVB-D低、高剂量组能显著升高损伤细胞存活率,降低LDH外漏率,CVB-D高剂量能显著升高损伤细胞SOD活性,并显著降低损伤细胞MDA含量。结论:CVB-D对NE诱导的心肌细胞损伤具有一定的保护作用,其保护作用可能与改善氧化应激有关。

环维黄杨星D对麻醉犬血流动力学的影响

目的:探讨环维黄杨星D(CVB-D)对麻醉犬血流动力学的影响。方法:分别以0.1、0.2、0.4 mg/kg剂量的CVB-D静脉注射给予麻醉犬,观察给药后收缩压(SAP)、平均动脉压(MAP)、心率(HR)、心输出量(CO)、冠脉流量(CBF)、每搏输出量(SV)、总外周血管阻力(TPVR)等血流动力学指标的变化。结果:CVB-D中、高剂量能降低麻醉犬HR,增加CBF,降低TPVR。此外高剂量CVB-D能升高麻醉犬SAP,增加SV,与对照组比较具有显著性差异。而CVB-D各剂量组对麻醉犬MAP和CO均未见显著影响。结论:CVB-D能够显著改善麻醉犬血流动力学及心脏自身供血,这可能是其治疗心肌缺血性疾病的基础。

环维黄杨星D对心衰大鼠心肌损伤及氧化应激的影响

目的研究环维黄杨星D对心衰大鼠心肌的作用,探讨其可能的机制。方法结扎SD大鼠冠脉左前降支复制心衰模型。造模成功后分组、给药,测定试剂盒血清乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD);透射电镜观察心肌纤维、线粒体、质膜的变化。结果环维黄杨星D能明显减轻心衰大鼠心肌损伤,显著抑制心衰大鼠心肌中SOD活性降低和MDA含量升高。结论环维黄杨星D对大鼠的心力衰竭有一定的保护作用,其可能通过抑制氧自由基、脂质过氧化起作用。

环维黄杨星D对去甲肾上腺素诱导心肌细胞G蛋白偶联受体激酶-2表达的影响

目的观察环维黄杨星D(CVB-D)对去甲肾上腺素(NE)诱导心肌细胞损伤的保护作用及对G蛋白偶联受体激酶-2(GRK-2)表达的影响。方法体外培养新生SD大鼠原代心肌细胞,建立NE诱导的心肌细胞损伤模型,以细胞存活率,培养上清液乳酸脱氢酶的(LDH)活性反映心肌细胞损伤。酶联免疫吸附法(ELISA)测定环磷酸腺苷(cAMP)含量,Western blot分析G蛋白偶联受体激酶-2(GRK-2)蛋白表达。结果 NE能降低细胞存活率,提高培养液LDH活性,降低细胞内cAMP含量,增加GRK-2蛋白表达。CVB-D对NE诱导上述指标异常具有明显的改善作用。

环维黄杨星D双层片的制备方法及体外评价

目的研究环维黄杨星D双层片的处方,并进行体外评价(体外释放度)。方法通过单因素考察法分别确定双层片的速释层和缓释层处方组成与制备方法。采用紫外分光光度法测定双层片的体外释放度。结果环维黄杨星D双层片中,速释层处方组成为淀粉、羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁,工艺采用湿法制粒;缓释层处方组成为卡波姆、硬脂酸镁,采用干粉末直接压片。体外释放度结果表明,速释层在5 min累积释放度达95%以上,缓释层能在14 h内维持恒定的释药量,满足零级释放方程。结论环维黄杨星D双层片的处方合理,制备工艺简单,可达到速释和缓释的双重作用。

环维黄杨星D对离体豚鼠胆道括约肌收缩力的影响

目的:研究环维黄杨星D(CyclovirobuxineD,CVBD)对离体豚鼠胆道括约肌的收缩作用。方法:1)利用离体豚鼠胆道括约肌,加入不同浓度(1×10-7M～3×10-6M)CVBD,观察由KCl或Ach引起的括约肌快速收缩相和持续相的变化。2)加入维拉帕米(Ver)作用后,再加入CVBD,观察二者合用对KCl或Ach引起的括约肌收缩变化。结果:对KCl引起的标本收缩,CVBD使快速相峰值显著下降,且有量效关系,而持续相呈轻度升高,坪/峰比值也呈剂量效应的增加。但对Ach引起的收缩,CVBD使快速相、持续相、坪/峰值均显著下降,且有一定量效关系。Verapamil合用CVBD对KCl引起的快速收缩相峰值下降,但坪值则与单用Ver相当。对Ach引起的快速相收缩,二者也有相似的协同作用,但此时坪值几乎消失。结论:CVBD对括约肌的收缩作用与引起收缩的刺激剂有关,也与收缩时相有关,反映了CVBD对不同钙离子通道的影响。

环维黄杨星D对高血压大鼠脑缺血GAP-43与Neurocan表达的影响

目的观察中药单体环维黄杨星D(CVB-D)对易卒中型肾血管性高血压大鼠(RHRSP)脑缺血-复流不同时间脑组织生长相关蛋白-43(GAP-43)与神经粘蛋白(Neurocan)表达的影响。方法采用环形银夹使SD大鼠双侧肾动脉狭窄,制成RHRSP,再用线栓法制成一侧大脑中动脉闭塞(MCAO)模型。用免疫组化方法观察CVB-D对MCAO大鼠脑缺血2h后复流1、7、14、30d脑组织GAP-43与Neurocan表达的影响,并与生理盐水组对照。结果缺血2h后再灌注1d,对照组缺血周围半暗区出现GAP-43阳性细胞,7d明显增多,14d减少,30d明显减少,各时间点阳性细胞数表达差异有显著性意义(P<0.01);治疗组GAP-43阳性细胞数表达在各时间点较对照组显著增加(P<0.01)。Neurocan阳性细胞数表达对照组在缺血再灌注1d出现,7d明显增多,14d达高峰,30d时下降,但仍高于假手术组水平(P<0.05);治疗组neurocan阳性细胞数表达在缺血再灌注7、14、30d则较对照组显著减少(P<0.01)。结论CVB-D上调RHRSP脑缺血区GAP-43阳性细胞数表达与下调Neurocan表达的作用,可能是其促进脑损伤区中枢神经修复的重要机制之一。

环维黄杨星D对大鼠原代心肌细胞缺氧复氧损伤的影响

目的观察环维黄杨星D对大鼠原代心肌细胞缺氧复氧损伤(HR)的保护作用及机制。方法大鼠原代心肌细胞并造成缺氧复氧损伤,7.5、15、30、60、120、240μg/ml CVB-D作用24、48、72 h后,CCK-8法测定细胞增殖;30、60、120μg/ml CVB-D干预48 h后,测定乳酸脱氢酶LDH、微量丙二醛MDA,超氧化物歧化酶SOD含量和Na+-K+-ATPase活性。结果 CVB-D能促进受损细胞增殖,提高细胞SOD含量及Na+-K+-ATPase活性,降低细胞LDH、MDA的含量。结论 CVB-D对心肌细胞HR损伤具有保护作用,可能与抑制损伤细胞脂质过氧化,提高Na+-K+-ATPase活性和清除自由基有关。

环维黄杨星D对高血压大鼠脑缺血GAP-43 mRNA表达与细胞损伤的影响

目的观察中药单体环维黄杨星D(CVB-D)对易卒中型肾血管性高血压大鼠(RHRSP)脑缺血再灌注不同时间脑组织生长相关蛋白-43(GAP-43)mRNA表达与细胞超微结构损伤的影响。方法采用环形银夹使SD大鼠的双侧肾动脉狭窄,制成RHRSP,再用线栓法制成一侧大脑中动脉闭塞(MCAO)模型。用原位杂交等方法观察CVB-D对脑缺血2h后复流1d、7d、14d、30d不同时间点大鼠脑组织GAP-43mRNA表达、水含量、梗死面积百分率、行为学评分及细胞超微结构的干预作用。结果脑缺血2h复流后1d缺血区周围及海马可见GAP-43mRNA表达,7d明显增多至高峰,14d开始下降,30d时则明显减少,CVB-D治疗组在上述区域各时间点较对照组显著增加。脑缺血再灌注7d后,治疗组较对照组大鼠脑水含量及梗死面积显著降低,受损脑组织神经元和血管壁的超微结构亦明显改善。结论CVB-D对RHRSP缺血性脑细胞损伤有一定保护作用,其促进轴突的再生可能与上调脑组织GAP-43mRNA表达有关。

环维黄杨星D聚乙二醇衍生物的测定及体外的稳定性研究

目的建立测定环维黄杨星D—PEG10000（CVB—D—PEG）含量的方法，并研究其体外的稳定性。方法采用HPLC法，色谱柱为C18柱，流动相为20mmol·L^-1磷酸氢二纳（磷酸调pH2．95）-乙腈（26：74），柱温为40℃，检测波长为210nm。结果CVB—D—PEG0．15～4．80mg·ml^-1与峰面积有良好的线性关系（r^2=0．9996）；其在光照条件下，8h内稳定，在水、甲醇溶液中72h内稳定，在pH2、7、7．8的缓冲液中24h内不稳定，pH5的缓冲液中24h内较稳定；在人工胃液、大鼠胃肠共孵液中2．5h内均不稳定，人工肠液中2．5h内基本稳定。结论所建方法能准确有效地测定CVB—D—PEG的含量，此药在酸碱环境中稳定性差。